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TRABAJO PRÁCTICO METABOLISMO

TP: Primera parte: PIGMENTOS VEGETALES

Para el desarrollo de este práctico, cada división deberá traer un

paquete de acelga o espinaca.

Introducción: ENERGÍA RADIANTE . PIGMENTOS . FOTOSÍNTESIS.

• Energía radiante:

Es aquella que puede ser transmitida por el espacio en forma de

partículas muy diminutas que oscilan a medida que se trasladan,
describiendo ondas. Del análisis de estas ondas se desprenden datos como
la longitud de onda (distancia entre dos crestas sucesivas de la onda)
y la frecuencia (cantidad de ondas en la unidad de tiempo), muy
importantes en el estudio de las radiaciones.

Las partículas encargadas de transportar la energía radiante se

denominan cuantos. La cantidad de energía por "cuanto" varía inversamente
con la longitud de onda (a mayor longitud de onda, menor energía por
cuanto). Un "cuanto" de luz recibe el nombre de fotón.

La energía que llega a la tierra (radiaciones solares) se compone de

varias longitudes de onda comprendidas dentro de un rango que varía entre
los 3000 y 26000 A (Angstroms). A su vez, dentro de este rango se
encuentran las radiaciones que componen el espectro visible (aquellas que
pueden ser captadas por el ojo) cuyas longitudes de onda varían entre los
3900 y 7500 A.

El color de la luz varía de acuerdo con su longitud de onda. Los rayos

visibles que tienen la menor longitud de onda son los de color violeta y los
que poseen la mayor longitud son los de color rojo, representando las
longitudes intermedias diferentes colores que, en orden, se mencionan en la
figura 1 y 2.
La luz blanca (luz solar) se compone de una mezcla de todas esas longitudes
de onda.

En condiciones ordinarias, alrededor del 40% de la energía radiante que

llega a la superficie terrestre está dentro del espectro visible. Las ondas
de longitud demasiado cortas para ser vistas se denominan ultravioletas y
las de longitud demasiado largas, infrarrojas.
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Fig.1

Fig2 - Espectro de luz radiante (en A°)

• Pigmentos:

Todas las sustancias absorben y reflejan la luz en forma diferente,

absorbiendo más cuantos de cierta longitud de onda que de otras. Las
sustancias que tienen propiedades marcadamente diferentes para absorber la
luz son los pigmentos.

En las Plantas y Algas encontramos a los pigmentos vegetales. Algunos

de ellos tienen una función importante dentro de los procesos fisiológicos del
vegetal, como la Fotosíntesis; en cambio otros, como la antocianina de las
flores, participan en la atracción de agentes polinizadores.

Los pigmentos que estudiaremos en este T.P., son aquellos que tienen
participación en la fotosíntesis, los cuales se encuentran dentro del
cloroplasto (organela citoplasmática). Estos son la clorofila y los
carotenoides.

Recordemos que la Fotosíntesis es un proceso metabólico que llevana a

cabo los fotoautótrofos como manera de sintetizar monosacáridos a partir de
compuesto inorgánicos como el dióxido de carbono (CO2) y el agua (H2O).
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La energía requerida para esta síntesis proviene de la energía lumínica la

cual es absorbida por la clorofila y “transformada” en energía química
necesaria en las reacciones químicas que llevarán a la síntesis de la glucose.

Fórmula general de Fotosíntesis:

La Clorofila:

Es el pigmento verde que da la coloración típica de las hojas y tallos

herbáceos de las Plantas. Sin embargo, aunque es menos evidente, estos
órganos también contienen pigmentos rojos, anaranjados o amarillos, tales
como los carotenoides y otros. Estos, rara vez son aparentes, excepto en
las hojas en las que la clorofila no se ha desarrollado o se ha degradado como
consecuencia de la vejez u otros cambios fisiológicos (por ejemplo en las
hojas “secas-amarillas” que se caen en otoño).

En Plantas y Algas existen varios tipos diferentes de clorofilas. La más

común es la clorofila “A”, la cual se halla presente en la mayoría de
los organismos fotosintéticos. En las Plantas, además de la "A", también está
presente la clorofila “B”.

Ambas clorofilas (A y B) son insoluble en agua, pero solubles en varios

solventes orgánicos (alcohol etílico, éter de petróleo, acetona, etc.). La
clorofila “A” en solución es de color azul verdoso, la “B” es de un verde casi
puro; esto resulta fundamental para distinguirlas en el trabajo práctico.

Los carotenoides:

Incluyen principalmnete a dos tipos de pigmentos: los carotenos

(anaranjados) y las xantófilas (amarillos). Estos pigmentos participan en la
fotosíntesis “capturando” energía lumínica de ciertas longitudes de onda (que
la clorofila no puede absorber) y transfieriéndosela a la clorofila.

Al igual que las clorofilas A y B, también son insolubles en agua, pero solubles
en disolventes orgánicos.
Debido a su carácter hidrofóbico se encuentran normalmente en estructuras
celulas lipófilas, como en membranas, o bien su asociados proteínas.

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(Para mayor información de éste Trabajo Práctico, visite nuestra página de Internet)
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp6/Pigmentos.htm
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T.P. PIGMENTOS VEGETALES

PARTE PRÁCTICA:

Antes de comenzar el trabajo práctico es fundamental interpretar

los conceptos de EXTRACCIÓN y SEPARACIÓN.
Efectuamos una extracción al aislar una sustancia o una mezcla de éstas
del sistema del que forman parte. La separación implica obtener por
separado cada uno de los componentes de una mezcla (reconocer estos
procedimientos durante la práctica.)

OBJETIVOS:

• Conocer y manejar algunas técnicas de extracción y separación de

sustancias en base a sus afinidades con distintos solventes orgánicos.
• Reconocer algunos pigmentos vegetales.
• Emplear y manejar el material de laboratorio.
• Redactar un informe sobre observaciones y conclusiones del TP

MATERIALES:

Parte a) Hojas verdes de espinaca o acelga, mortero, papel de filtro, tubos de

ensayo, embudos, 10 ml. de alcohol etílico, 5 ml. de bencina o percloroetileno.

Parte b) Hojas verdes, mortero, papel de filtro, tubo de ensayo, embudo,

kitasato, vaso de precipitados, capilar, éter de petróleo, granos de cloruro de
calcio, 5 ml. de acetona.

PROCEDIMIENTO:

a) Extracción y separación simple de pigmentos vegetales:

1. Cortar las hojas en trozos pequeños, triturarlos y

desmenuzarlos en un mortero con 10 ml. de alcohol.

2. Filtrar la mezcla utilizando papel de filtro y recoger el líquido

resultante en un tubo de ensayos.

3. Agregar 5 ml. de percloroetileno. Agitar y dejar reposar unos

minutos.

4. Observar e interpreter el resultado. Registrar.

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b) Extracción y separación por cromatografía en papel:

1. Cortar las hojas en trozos pequeños y triturar en el mortero con

5 ml. de acetona.

2. Filtrar la mezcla utilizando el papel de filtro y recoger el líquido

resultante en un tubo de ensayo.

3. Agregar 2 a 3 granos de sustancia deshidratante (cloruro de

calcio) y dejar reposar.

4. Preparar una hoja rectangular de papel de filtro con un ancho

menor que el diámetro del vaso de precipitados y similar altura.

5. Trazar una línea con un lápiz negro a 1 cm sobre la base del papel.

6. Extraer con un capilar una pequeña cantidad de la solución

acetónica de pigmentos (cara superior del líquido) y extender
cuidadosamente sobre la línea trazada en el papel. Repetir la
operación varias veces hasta que quede bien impregnado.

7. Colocar éter de petróleo en el vaso de precipitados hasta

alcanzar aproximadamente 0,5 cm. de altura. Introducir
cuidadosamente el papel con pigmentos.

8. Dejar reposar 10 min.

9. Registrar los resultados y conclusiones.

NOTA: Los solventes utilizados pueden cumplir la función de extraer y

separar dependiendo de su afinidad con los solutos (pigmentos) y de la
relación entre los solventes mismos. Por lo tanto un mismo solvente
puede actuar en un caso como extractor y en otro caso como
separador dependiendo de los solutos y de los otros solventes con los
que se esté experimentando.

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Presentación del informe del T.P., teniendo en cuenta los siguientes

ítems:

1. Objetivo del T.P.

2. Materiales utilizados en esta experiencia.
3. Procedimiento
4. Resultados.(Descripción de las observaciones realizadas, adjuntando
imágenes y corrida cromatográfica).
5. Conclusiones.

Según los resultados obtenidos responde:

1- ¿Por qué las plantas en su mayoría presentan hojas verdes?

2- ¿Por qué no se ven los distintos pigmentos presentes en las hojas?
3- ¿Qué métodos de separación se utilizaron en el T.P.?
4- ¿Por qué crees que los distintos pigmentos tienen distinta velocidad de
ascenso por el papel de filtro?
5- ¿Todos los pigmentos vegetales son fotosintéticos?

El informe será presentado en forma grupal a la semana de haber tenido el T.P.

y al profesor del curso.

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