UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

(creada por ley Nº 25265)

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AGROINDUSTRIAL

GUIA DE PRACTICA Nº 3

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Asignatura: Microbiología
Ciclo: IV
Docente: Ing. Sonia BUITRON PIZARRO
Jefe de practica: Ing. Deniss Yoshira ARECHE MANSILLA
Estudiante: QUISPE RIVERA Sonali
Nº de matrícula: 2021122025
Lugar de ejecución de la práctica: Laboratorio de análisis de alimentos
Semestre: 2023-II

Acobamba - Huancavelica
2023

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I. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados
obtenidos. En los laboratorios tambien se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden
ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se
parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la
sílicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes
el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición
precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían
considerablemente (Smith et al., 2018)
II. OBJETIVOS
 Realizar la preparación de medios de cultivo
 Aplicar tecnicas asépticas para evitar contaminacion
 Evaluar el impacto de la calidas del crecimiento de microorganismos

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III. FUNDAMENTO TEÓRICO
III.1. Medios de cultivo
Los medios de cultivo son productos orgánicos e inorgánicos, naturales o artificiales
adecuados para la vida, crecimiento y reproducción y reproducción de bacterias, mohos
y levaduras.
Sus componentes básicos deben satisfacer las mínimas exigencias nutricionales para el
desarrollo microbiano y varían según el tipo de microorganismo. Incluyen agua,
nutrientes como fuentes de N, C y energía y en ciertos casos factores de crecimiento.
Se consideran, además, para el crecimiento, necesidades de oxígeno (aeróbico), CO2
parcial o total (microaerófilos o anaerobios) y condiciones óptimas de PH y temperatura
de incubación.
La mayoría de los medios empleados para el desarrollo inicial y aislamiento de
microorganismos heterotróficos son ricos en componentes proteicos derivados de
carnes, corazón, cerebro, caseína, fibrina, soya, por digestión con enzimas proteolíticas
(pepsina, papaína). Estos derivados son principalmente péptidos, peptonas, proteasas,
aminoácidos, sales orgánicas como fosfatos, y trazas de potasio y magnesio que los
microorganismos utilizan como compuestos parcialmente degradados al ser incapaces,
la mayoría de hidrolizar proteínas completas.

III.2. Tipos de medios de cultivo

A. Por su naturaleza
a. Naturales: sustancias naturales que pueden usarse como medios de cultivo.
Ejemplo: sangre, para bacterias patógenas; leche, para bacterias heterotróficas.
b. Artificiales: están compuestas por gran variedad de materias:
b.1. sintéticas de composición química conocida, acidos, azucares, vitaminas.

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b.2. no sintéticas de composición química desconocida, peptonas, extracto de
levadura.
B. Por su estado físico
a. Líquidos: para obtener grandes masas de cultivo. Ejemplo: caldo nutritivo, agua
peptonada.
b. Solidos: inicialmente liquidos (al momento de ser preparados)
b.1. reversibles: aquellos que una que una vez solidos pueden ser licuados
nuevamente. Ejemplo: agar nutritivo, agar Me Conkey, etc.
b.2. Irreversibles: aquellos que una vez solidificados no pueden ser licuados
nuevamente porque tienen elementos termolábiles en su constitución. Ejemplo:
agar, sangre sangre, agar huevo.
C. Por la función que desempeñan
a. Comunes: son aquellos que contienen los mínimos requerimientos nutricionales
para organismos heterotróficos no exigentes. Estos pueden ser sólidos, líquidos
o semisólidos. Permiten el desarrollo indiscriminado de todo tipo de
microorganismos. Ejemplos: caldo nutritivo, caldo peptonado, agar nutritivo,
agar peptonado, agar almidón, gelatina.
b. Medios especiales: medios de enriquecimiento (medios mejorados); que ofrecen
el crecimiento de un de un grupo de microrganismos en particular e inhiben en
lo posible otros de la microflora acompañante. Ejemplo: agua peptonada
alcalina (APA) para vidrio para haemolyticus: caldo selenito de Leifson, caldo
tetrationato para entéricos patógenos.
c. Medios selectivos: que favorecen el aislamiento de un determinado grupo de
microorganismos mediante la obtención de colonias (ceas puras). Todos son
utilizados en condiciones solidas. Ejemplo: agar Baird Parker (para aislamiento
de Staphylococos patogeno), agar Cahapman y Mitisalivarius (para aislamiento
de Streptococos mitis y salivarius).
d. Medios diferenciales: empleados para detectar reacciones bioquímicas, con
carácter diferencial de grupos géneros o especies microbianas. Emplos: agar
TSI, para el estudio de fermentación de lactosa y sacarosa de organismos
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entéricos, agar SLU, permite interpretar varias pruebas bioquímicas como
fermentación de lactosa, producción de HS, producción de ureasa, producción
de indol.
e. Medios enriquecidos o suplementados: reúne los requerimientos nutricionales
de bacterias exigentes. Se compone de un medio basal ordinario suplementado
con factores de crecimiento como sangre, suero, vitaminas, extracto de
levadura, bases nitrogenadas, carbohidratos y sales minerales. Ejemplo: caldo
extracto de levadura (CL); caldo chocolate, suero coagulado; agar extracto de
levadura, agar sangre, agar suero coagulado.
f. Medios sintéticos definidos o químicamente definidos: preparados en
laboratorios exclusivamente de sustancias químicas.
g. Medios sintéticos simples: contienen carbono como fuente de (glucosa/lactosa)
una fuente inorgánica de N (C1NH4), fosfato o sulfato y varias sales
inorgánicas, sustancias tampon y agentes quelantes como el citrato. Ejemplo:
medio mínimo de Falcom.
h. Medios sintéticos complejos: incorporan aminoácidos, purinas y pirimidinas
además de otros factores de crecimientos para cepas exigentes.
III.3. Preparación de medios de cultivo
La preparación se desarrolla de acuerdo al medio de cultivo además de tener
información adicional de cada uno.
a. Caldo extracto de malta: es un medio de aislamiento, demostración y numeración de
hongos, especialmente levaduras y mohos, en diversos materiales de investigación
y para cultivos de capas de ensayo para la determinación microbiológica de
vitaminas, composición: extracto de malta: 17 g; peptona de soya: 3 g; agua
destilada: 1000 ml; ph: 4.8. Preparación: disolver 17 g/l, distribuir y esterilizar
cautelosamente a la autoclave (115º C por 10`).
b. Agar violeta cristal: es un agar selectivo para demostración y numeración de E. Coli,
según Davis (1951), en agua, leche, helados, carnes y otros alimentos. El violeta
cristal y sales biliares inhiben el crecimiento, sobre todo, la flora Gram (+) de

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acompañamiento. La degradación de la lactosa a acido se pone de manifiesto por el
viraje a rojo del indicador de ph rojo neutro y por una precipitación de ácidos biliares.
c. Agar saboraud: es un medio recomendado para el cultivo de hongos,
particularmente aquellos asociados a infecciones dermatológicas. El contenido de
glucosa y el pH bajo facilitan el rápido desarrollo de los hongos y levaduras
presentes en la muestra.
IV. MATERIALES Y METODOS.
IV.1. MATERIALES
 Matraz
 Agitador magneto
 Magneto
 Placas Petri
 Mechero de bunsen
 Agar nutritivo
 Autoclave
 Agua destilada 1 ltro
IV.2. METODOLOGIA
IV.2.a. Preparación de medios de cultivo
1. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado, según las indicaciones del
fabricante.
2. Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo
3. En un matraz colocar el medio y el agua destilada, según indicaciones.
4. Calentar en el agitador magnético y ayudase con el magneto para la
homogenización de la preparación, llegar hasta la ebullición.
5. Tapar con un algodón y papel de aluminio el medio preparado.
6. Llevar a la esterilización con autoclave (121º C por 15 o 20 min).
7. Dejar enfriar y pasar la mezcla a las placas esterilizadas, dejar solidificarlas.
Usar siempre el mechero para esterilizar.
8. Almacenar en un lugar adecuado.

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V. BIBLIOGRAFIA
Gómez Jurado, G. J. y Gómez Meza, J. E. (2011). Laboratorio de microbiología: (1 ed.).
Bogota D.C, Universidad de La Salle - Ediciones Unisalle. Recuperado de
https://elibro.net/es/ereader/bibliounh/221570?page=24.
Reyes V. y Yabar E. manual de microbiología general. UNCP. PERU. 2014
Reforzar: https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/home

VI. LOGRO DE APRENDIZAJE DE LA PRACTICA

Al finalizar la práctica los alumnos deben de haber aprendido la importancia de la práctica.

VII. ANEXOS
Considerar instrumentos que se usaran en la práctica.
CUESTIONARIO
1. En caso de no tener agar para el medio sólido, ¿qué utilizarías?
2. ¿Qué medios de cultivos selectivos y específicos conoce para el análisis microbiológico
de los alimentos? Especificar medio y tipo de microorganismos a analizar.
3. ¿Por qué es importante medir y ajustar el pH en medios de cultivo que se preparan a
partir de ingredientes?