UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO

FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA N° 06

SIEMBRA, ASILAMIENTO Y TRASPLANTE DE BACTERIAS

I. COMPETENCIA

El estudiante conoce el fundamento y las técnicas de siembra, aislamiento y trasplante de bacterias.

II. GENERALIDADES

Siembra: Es el proceso por el cual se pone en contacto al microorganismo con el medio de cultivo,
para que en condiciones óptimas de temperatura y tiempo de incubación pueda desarrollar y
multiplicarse IN VITRO. Tiene la finalidad de realizar un aislamiento y posterior trasplante a partir
de una muestra problema.

Aislamiento: Permite la separación del microorganismo al estado de pureza a partir de una muestra
problema, se requiere un medio sòlido con suficiente superficie para que los microorganismos al ser
diseminados sobre el medio generen su progenie (cepa) para la formación de colonias separadas. La
morfología de la colonia deriva de cada célula, pero es una característica de la masa celular. Se
pueden definir distintos tipos de colonias que dependen de las características que presentan:
a) Tamaño: uniforme para cada especie o tipo, las dimensiones varían desde muy pequeñas o apenas
visibles, hasta unos centímetros de diámetro.
b) Consistencia: blanda, seca o viscosa.
c) Forma: circulares, fusiformes, irregular, rizoide, etc.
d) Margen o borde: entero, ondulado, aserrado, etc.
e) Elevación: Plana, elevada, convexa, etc.

Trasplante: Significa la separación primaria de la cepa a un medio de cultivo apropiado en tubo que
puede ser líquido o sólido, mediante los trasplantes en medios especiales se logra conocer las
propiedades culturales y bioquímicas dando como resultado la identificación de la especie. Los
trasplantes se pueden realizar:
 De líquido a sólido
 De líquido a líquido
 De sólido a
sólido
 De sólido a
líquido
 Tipos de colonias

III. MATERIALES

 Videos sobre técnicas de siembra, aislamiento y trasplante de bacterias.

 Materiales de vidrio (placas Petri, tubos de ensayo)
 Equipos (incubadora)
 Medios de cultivo
 Asa y aguja de siembra
 Imágenes de tipos de colonias.

IV. PROCEDIMIENTO
En laboratorio el procedimiento para la siembra y aislamiento de bacterias es el siguiente:

Siembra y aislamiento de bacterias aerobias en placas petri

El aislamiento implica el agotamiento de una muestra sobre la superficie del medio sólido, donde se
va descargando gradualmente el inoculo. Los métodos de aislamiento, el dispositivo de siembra y la
forma de distribuir el inoculo varían, cualquiera sea el método ensayado, el aprovechamiento
máximo de superficie del medio logra el aislamiento del mayor número de colonias.
Las técnicas de siembra y asilamiento deben efectuarse siguiendo las reglas de asepsia, para impedir
que desarrollen al mismo tiempo las bacterias en estudio y microorganismos del medio ambiente.

Método del estriado o agotamiento en superficie.

 Con el asa de siembra, previamente esterilizada, tomar una pequeña porción del inoculo y trazar
estrías sobre la superficie del medio siguiendo las lineaciones de las indicaciones dadas en la
práctica.
 Incubar a 37° C por 24 horas, colocando las placas en la incubadora en posición invertida.
 Manual de Practicas de Laboratorio de Microbiología y parasitología. Facultad de Medicina y Cirugía. Oaxaca. 2019.

https://www.quiminet.com/articulos/usos-y-aplicaciones-de-los-medios-de-cultivo-2706573.htm

Método de aislamiento por diseminación

 Tomar 0.1mL de un cultivo problema con una pipeta y depositar sobre el margen del medio de
la placa petri que descansa en posición normal sobre la mesa.
 Si queda el inoculo en la pipeta devolver al tubo de cultivo.
 Diseminar las gotas del cultivo con la espátula de Drigalsky por la superficie del medio
evitando pasar 2 veces por el mismo plano.
 Desechar la espátula en solución desinfectante.
 Rotular el nombre muestra y fecha.
 Incubar a 37° C por 24 horas, en la incubadora en posición invertida.
Método de aislamiento por dilución
 Numerar los tubos contenido 9 ml de agua peptona con 10 -1, 10-2. 10-3, etc. al igual que las
placas petri vacías y estériles.
 Con la pipeta estéril, tomar 1mL de la muestra problema y depositar en el tubo 10 -1 mezclar y
de este volver a tomar 1mL y depositar en el tubo 10-2, y así sucesivamente.
 De cada dilución depositar 1 mL en las placas petri ya marcadas.
 Adicionar agar fundido a 45° y mezclar, rotando en sentido de las agujas del reloj y sentido
contrario.
 Esperar que solidifique e incubar como en los casos anteriores.

V. RESULTADOS
Describa y esquematice el método del estriado o agotamiento en superficie.
En las imágenes a continuación describa el tipo de colonias que se observan.

VI. CUESTIONARIO
1. Defina los siguientes términos:
b. Siembra de bacterias
c. Aislamiento de bacterias
d. Cepa bacteriana
2. ¿Qué función cumple el mechero bunsen en el procedimiento de siembra y aislamiento de
bacterias?
3. ¿Cuál es la finalidad del método del estriado o agotamiento en superficie?