Universidad Autónoma de Chihuahua

Campus Parral

Medicina genómica

Impacto de la secuenciación del ADN en el diagnóstico clínico

Catedrático facilitador: Azalea Arreola Romero

Alumnos:
Brayan Alberto Carrillo Gonzalez. 345999
Adrian Alberto Mendoza Portillo 343640

Secuenciación del ADN

La secuenciación de ADN es el proceso que determina la secuencia de bases de los

nucleótidos (As, Ts, Cs y Gs) de un fragmento de ADN.
Secuenciar un fragmento pequeño de ADN es relativamente sencillo.
Secuenciar un genoma completo (todo el ADN de un organismo) sigue siendo una tarea
compleja.
El proceso requiere romper el ADN del genoma en muchos pedazos más pequeños,
secuenciar dichos pedazos y ensamblar las secuencias en una única y larga "secuencia
consenso".
Gracias a nuevos métodos que se han desarrollado en las últimas dos décadas, ahora
secuenciar un genoma es mucho más rápido y menos costoso.

Secuenciación de Sanger

Se secuencian regiones de ADN de hasta 900 pares de bases.

Fue desarrollado por el bioquímico británico Fred Sanger y sus colegas en 1977.
Aunque actualmente los genomas se secuencian con otros métodos que son más rápidos y
menos costosos, la secuenciación de Sanger todavía se usa ampliamente para secuenciar
piezas individuales de ADN, como los fragmentos utilizados en la clonación de ADN o los
generados a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Ingredientes:
La secuenciación de Sanger consiste en hacer muchas copias de una región blanco de
ADN.
● Una enzima ADN polimerasa

● Un cebador

● Los cuatro nucleótidos del ADN (dATP, dTTP, dCTP, dGTP).

● El molde de ADN que será secuenciado.

también contiene un ingrediente único:

 ● Versiones didesoxi, o terminadores de la cadena, de los cuatro nucleótidos
(ddATP, ddTTP, ddCTP, ddGTP), cada uno marcado con pigmentos de color
diferente.

Usos y limitaciones

La secuenciación de Sanger arroja secuencias de alta calidad para segmentos

relativamente largos de ADN (de hasta aproximadamente 900 pares de bases). La técnica
suele utilizarse para secuenciar fragmentos individuales de ADN, como plásmidos
bacterianos o ADN copiado en la PCR.

Sin embargo, la secuenciación de Sanger es costosa e ineficiente para proyectos a gran

escala, como la secuenciación de un genoma completo. Para tareas como estas, las nuevas
técnicas de secuenciación a gran escala son más rápidas y menos costosas.

Tecnologías de secuenciación de nueva generación (NSG)

La secuenciación de nueva generación (Next Generation Sequencing [NGS]) es un grupo

de tecnologías diseñadas para secuenciar gran cantidad de segmentos de ADN de forma
masiva y en paralelo, en menor cantidad de tiempo y a un menor costo por base

Las características de este tipo de secuenciación son:

● Altamente paralelas: ocurren muchas reacciones de secuenciación al mismo

tiempo.

● Microescala: las reacciones son diminutas y se pueden hacer muchas a la vez en

un chip.

● Rápidas: puesto que las reacciones se realizan en paralelo, los resultados están
listos mucho más rápido.

● Bajo costo: secuenciar un genoma es más barato que con la secuenciación de

Sanger.

● Longitudes más cortas: típicamente, las lecturas se obtienen con fragmentos de

entre 500 y 700 nucleótidos de longitud.

Todas las técnicas NGS comparten la capacidad de secuenciar una gran cantidad de
fragmentos de ADN de forma paralela en un corto lapso. Para lograr este objetivo, siguen
un abordaje metodológico semejante que se puede resumir en cinco pasos:
 1. Segmentación del ADN en varios fragmentos.
2. Marcaje del ADN por medio de primers o adaptadores que indican el punto de
partida para la replicación.
3. Amplificación de los fragmentos de ADN marcados con adaptadores por métodos
basados en reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés).
4. Secuenciación o lectura de los fragmentos de ADN.
5. Reconstrucción de la secuencia completa por medio de secuencias de referencia y
exportación a ficheros de almacenamiento de datos.

Ejemplos de tecnologías de secuenciación de nueva generación

● Roche 454: Basado en la pirosecuenciación, la cual es una tecnología que permite

determinar el orden de una secuencia de ADN mediante luminiscencia. Se basa en
el principio de "secuenciación por síntesis" en el que se detecta la incorporación de
nucleótidos al ADN por acción del ADN polimerasa.

● Illumina: Se basa en la generación de clusters para su posterior secuenciación.

● Oxford nanopore technologies: La secuenciación de nanoporos es una tecnología

única y escalable que permite el análisis directo y en tiempo real de fragmentos
largos de ADN o ARN. Funciona al monitorear los cambios en una corriente eléctrica
a medida que los ácidos nucleicos pasan a través de un nanoporo de proteína. La
señal resultante se decodifica para proporcionar la secuencia específica de ADN o
ARN.

Aplicación de las tecnologías basadas en secuenciación de nueva generación en la

práctica clínica

● Secuenciación de panel de genes: Es una prueba que secuencia un número

determinado y específico de genes que están relacionados con una enfermedad o
grupo de enfermedades.
● Secuenciación completa de exoma: En esta prueba se secuencian todas las
regiones codificantes del genoma, es decir, el exoma, el cual representa entre el 1 y
el 2 % de la secuencia genómica completa y donde se hallan hasta el 85 % de las
variantes genéticas reportadas como patogénicas.
● Secuenciación completa de genoma: Esta prueba evalúa todas las bases del
genoma, incluyendo las regiones no codificantes. Tiene como ventaja que es la
mejor prueba para la detección de nuevas variantes genéticas y estructurales que no
se asociaban previamente con el cuadro clínico que se iba a estudiar