Kroff , P. Aplicación de las microondas en laboratorios de anatomía patológica. Rev. Chil. Tecnol. Méd.

31(2),
1637–1644, 2011.

ARTÍCULO ORIGINAL

APLICACIÓN DE LAS MICROONDAS EN LABORATORIOS

DE ANATOMÍA PATOLÓGICA
MICROWAVE APPLICATION FOR LABORATORY OF PATHOLOGY

TM. Paula Kroff B. - Morfofisiopatología y Citodiagnóstico

RESUMEN

El presente estudio expone los criterios para estandarizar procedimientos en laboratorios

de Anatomía Patológica, con horno de microondas doméstico. Se revisaron protocolos
de procesamiento histológico, desarrollando nuevos, utilizando un horno de 800 watts,
según principios físicos de emisión de microondas e interacción con el tejido. Los
nuevos protocolos abarcan fijación, inclusión, tinciones y técnicas histoquímicas.
Fueron empleadas muestras frescas y fijadas, y controles positivos de apéndice,
estómago, piel, hígado, riñón y pulmón para las técnicas histoquímicas, definiendo
las variables que afectan la estandarización y comparando los procedimientos
propuestos con métodos tradicionales. Tanto el suero fisiológico como la formalina
(10%), conservan las estructuras, eliminándose los vapores tóxicos con el primero.
En la inclusión, los resultados dependen de: tamaño de la muestra, contenido de agua,
dureza del tejido y grosor. Existe un aumento de calidad e intensidad con horno de
microondas en las tinciones y reacciones. Los resultados indican una gran disminución
en el tiempo de los procedimientos, lo que permitiría diagnósticos oportunos y la
realización de terapias tempranas. El tener en cuenta todos los criterios necesarios
para estandarizar los procedimientos, permite que los laboratorios de Anatomía
Patológica empleen hornos de microondas domésticos con resultados que apoyan
un mejor pronóstico a los pacientes y un menor costo para el laboratorio.

Palabras Clave: Microondas doméstico, fijación, inclusión, técnicas histológicas,

técnicas histoquímicas.

ABSTRACT
This study sets out the criteria to standardize procedures in pathology laboratories, with
domestic microwave oven. We reviewed histological processing protocols, develop new use
of an oven of 800 watts, according to physical principles of microwave emission and interaction
with tissue. New protocols include fixation, embedding, staining and histochemical techniques.
Were used fresh and fixed samples and positive controls appendix, stomach, skin, liver,
kidney and lung for the histochemical techniques, defining the variables that affect the
standardization and comparing the proposed procedures with traditional methods. Both saline
solution and formalin (10%) retain the structure, eliminating toxic vapors with the first. At
inclusion, the results depend: sample size, water content, tissue stiffness and thickness.
There is an increase in quality and intensity on stains and reactions with microwave. The
results indicate a large decrease in the time of the proceedings, which would allow early
diagnosis and implementation of early therapy. Having considered all the criteria necessary
to standardize procedures, allows pathology laboratories employ domestic microwave ovens
with results that support a better prognosis for patients and lower cost for the laboratory.

Key words: Domestic microwave oven, embedding, histological, histochemical techniques.

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INTRODUCCIÓN
Las microondas son ondas electromagnéticas
con una longitud muy pequeña (30 cm a 0.3
cm), de alta frecuencia (300 MHz a los 300
GHz) y viajan a la velocidad de la luz.(1) Su
aplicación comprende un rango de 1 y 40
GHz. Pertenecen a la gama de radiación no
ionizante, que no es penetrante y sólo
produce que las moléculas de la materia
vibren, causando fricción y calor, excitando
la molécula de agua. Por tanto, aumenta la
velocidad de las reacciones químicas,(2)
generando un aumento de la temperatura
dentro del cuerpo en un tiempo muy
reducido.(1,3)
Desde hace más de veinte años se han
incorporado hornos de microondas
especializados en las técnicas
anatomopatológicas,(4-9) principalmente en
Inmunohistoquímica.(10-13) También se han
utilizado en Histoquímica,(10,14,15) Microscopía
Electrónica,(16) Hibridación in situ,(11) y en
procedimientos de fijación,(2,17)
impregnación,(18) técnicas histológicas,(6,9,15)
y descalcificación. (13) No obstante, el
aprovechamiento de este recurso tiene como
limitante el alto costo de equipos
específicamente desarrollados para tal
función.(19,20) Es así que desde hace algunos
años se han introducido hornos de
microondas de tipo doméstico, obteniéndose
resultados satisfactorios en tiempo y costo,
comparado con las técnicas convencionales.(21)
Actualmente no se utilizan metodologías
diseñadas para las condiciones puntuales
de cada centro de diagnóstico. Esto es debido
a la escasez de protocolos reproducibles e
interpretables que utilizan horno de
microondas doméstico y donde gran parte
de la información es referente a hornos de
microondas específicos para laboratorios
que representan un alto costo. Todo lo
expuesto explica la inexistencia de un
estándar en los procedimientos, que pudiera
acelerar el procesamiento de tejidos, con el
consiguiente beneficio para el paciente. Para
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Figura 1. Primera y segunda posición de los borreles dentro del horno
ello en el presente estudio se validó el uso
del horno de microondas doméstico en
técnicas de procesamiento de muestras,
mediante la estandarización de parámetros
y condiciones, de tal manera de servir de
apoyo al regularizar los diferentes
procedimientos, y así hacer accesible la
implementación de estos equipos,
especialmente en laboratorios con bajos
volúmenes de muestras y sin procedimientos
automatizados; optimizando de esta manera
los recursos disponibles y el rendimiento,
disminuyendo el tiempo de espera de los
pacientes.
Se consideraron los parámetros
“temperatura”, “potencia” y “tiempo” como
variables en distintos tejidos y diferentes
condiciones. Fueron contemplados los
procedimientos de fijación, inclusión, tinción
e histoquímica para cada prueba efectuada.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizó un horno de microondas doméstico,
Spacemaker IITM, modelo JEI831, con 800W
de potencia máxima, sin bandeja giratoria,
digital, 10 niveles de temperatura, capacidad
interior de 26 litros, con medidas de 28.5 cm
alto x 61 cm alto x 31 cm fondo, y borreles
de plástico para microondas, de 50 ml. Fueron
confeccionadas cartillas para el registro de
datos: alcance de acción de las microondas,
temperaturas, evaluación de formalina y
suero fisiológico; alcohol, xilol y parafina.
Para determinar el alcance de acción de las
microondas, se identificaron puntos fríos y
puntos calientes en la cavidad del horno
mediante borreles con agua destilada y un
termómetro de laboratorio (Figura 1)
El horno presenta 10 niveles de potencia:
80, 160, 240, 320, 400, 480, 560, 640, 720
y 800W, que corresponden a 32, 48, 53, 63,
70, 73, 85, 89, 93, 95º C respectivamente.
Estos datos fueron obtenidos mediante una
carga de agua de 200 ml en el centro de la
cavidad del horno.
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Los tejidos utilizados fueron vesícula, ganglio,
próstata, estómago, grasa y riñón, los cuales
estaban frescos o ya habían sido expuestos
a la formalina como consecuencia de su
traslado desde pabellón. Luego de observar
los tejidos, se procesaron de forma rutinaria
hasta su tinción con hematoxilina-eosina.
Igual proporción de muestras fueron fijadas
durante 24 horas en formalina 10%, como
grupo control.
Para el procedimiento de deshidratación,
aclaramiento e impregnación fueron utilizados
cortes de vesícula, piel, útero, testículo, riñón
y grasa de 1 a 5 mm de grosor. Se estudiaron
diferentes protocolos (14,17, 22, 23), y las
propiedades químicas de los líquidos en
relación a su comportamiento cuando son
expuestos a las microondas, de tal forma de
determinar una base para la estandarización.
La potencia 4 (320 W) fue utilizada para las
pruebas de deshidratación y aclaramiento,
y la potencia 8 (640 W) para la impregnación
con parafina. La temperatura se tomó cada
10 segundos a estas potencias, hasta llegar
a un punto cercano al de ebullición de cada
líquido y así determinar el tiempo de
permanencia en el horno. Posteriormente
las muestras fueron incluidas, cortadas y
teñidas con los procedimientos de rutina.
En las tinciones y técnicas histoquímicas, se
realizaron pruebas de diferentes protocolos
(PAS, Masson, Rojo Congo, Grocott y Ziehl
Neelsen), hasta calibrar los parámetros
adecuados en cada una de ellas, y luego
comparadas con el método convencional.
Fueron utilizados borreles de plástico con
40 ml de reactivo, en el centro de la bandeja
y controles positivos de 5 µm. El protocolo
idóneo para cada técnica se definió
basándose en los procedimientos anteriores,
tomando la temperatura cada 10 segundos
hasta llegar a un punto cercano al de
ebullición de cada líquido y teniendo en
cuenta un rango de temperatura de 62 - 85º
C para no dañar los tejidos (Tabla 1).

Tabla 1. Protocolos

1) Desparafinar hasta el agua destilada. 2) Ácido periódico 5% por 20 segundos

a 480 W. 3) Agua destilada. 4) Reactivo de Schiff por 30 segundos a 480 W.
5) Agua corriente. 6) Hematoxilina de Mayer por 25 segundos. 7) Agua corriente
por 5 minutos. 8) Deshidratar, aclarar y montar.
1) Desparafinar hasta el agua destilada. 2) Bouin por 30 segundos a 480 W.
3) Agua destilada. 4) Hematoxilina de Weigert por 10 minutos a temperatura
ambiente. 5) Agua corriente por 10 miuntos y luego agua destilada. 6) Fucsina
ácida Escarlata de Biebrich 1% por 15 segundos a 480 W. 7) Agua destilada.
8) Acido fosfotúngstico fosfomolíbdico 5% por 8 segundos a 480 W. 9) Azul
de anilina por 15 segundos a 480 W. 10) Acido acético 1% por 3 minutos a
temperatura ambiente. 11) Deshidratar, aclarar y montar.
1) Desparafinar hasta el agua destilada. 2) Hematoxilina de Mayer por 10
segundos a 480 W. 3) Agua corriente por 5 minutos. 4) Rojo Congo por 30
segundos a 480 W. 5) Solución de KOH brevemente. 6) Agua destilada. 7)
Deshidratar, aclarar y montar.
1) Desparafinar hasta el agua destilada. 2) Acido crómico 5% por 20 segundos
a 480 W. 3) Agua corriente y luego agua destilada. 4) Bisulfito de sodio 1%
por un minuto a temperatura ambiente. 5) Agua corriente y luego agua destilada.
6) Nitrato de Plata-Metenamina por 6 minutos a potencia máxima en baño
maría y luego esperar en la solución caliente hasta que los cortes tomen un
color marrón oscuro. 7) Agua destilada. 8) Tiosulfato de sodio 2% por 1 minuto
a temperatura ambiente. 9) Agua corriente. 10) Verde luz 45 segundos a
temperatura ambiente. 11) Agua destilada. 12) Deshidratar, aclarar y montar.
1) Desparafinar hasta el agua destilada. 2) Carbol fucsina por 40 segundos
a potencia máxima. 3) Agua corriente. 4) Alcohol ácido 1% hasta que los cortes
se decoloren. 5) Agua corriente. 6) Hematoxilina de Mayer por 10 segundos.
7) Agua destilada. 8) Deshidratar, aclarar y montar.

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RESULTADOS
La mayor absorción de energía está en el
centro de la bandeja del horno, obteniéndose
los siguientes resultados en los
procedimientos:
En el proceso de fijación la grasa de 3 mm
de grosor se preservó mejor a los 50
segundos con formalina, obteniéndose cortes
con mucha facilidad. Los cortes duros como
los de próstata de 2 y 3 mm se preservan
adecuadamente a los 40 segundos y los de
5 mm a los 50 segundos. Las muestras de
tejido linfático de 3 mm conservan su
morfología con suero fisiológico como con
formalina a los 40 – 50 segundos, pero es
difícil realizar un corte posterior con el primero.
Las muestras de estómago de 5 mm de
grosor se preservaron a los 60 segundos con
suero fisiológico y 50 segundos con formalina.
Las muestras de riñón de 2 mm de grosor
se preservaron a los 50 segundos con suero
fisiológico. El corte de placenta de 4 mm se
preservó a los 65 segundos con formalina y
el de 2 mm a los 75 segundos con suero
fisiológico (Figura 2).
En el proceso de deshidratación, aclaramiento
e impregnación, los resultados no fueron
satisfactorios. Las muestras de piel de 2 mm
de grosor se preservaron bien a los 30
segundos en el alcohol de 70%, 30 segundos
en el alcohol de 95%, 30 segundos en el
alcohol absoluto, un minuto en cada xilol (2
cambios) y un minuto en cada parafina (2
cambios). Las muestras duras como las de
útero de 3 mm de grosor tomaron una
consistencia de corte adecuado y cambio de
color a los 60 segundos en el alcohol de
70%, 40 segundos en el alcohol de 95%, 40
segundos en el alcohol absoluto, 2 minutos
en cada xilol, 3 minutos en cada parafina.
Las muestras de testículo de 4 mm de grosor
se preservaron a los 50 segundos en el
alcohol de 70%, 35 segundos en el alcohol
de 95%, 30 segundos en el alcohol absoluto,
30 segundos en cada xilol, 1 minuto en cada
parafina.
En cuanto a las tinciones y reacciones
histoquímicas se obtuvieron los siguientes
resultados. (Tabla 2, Figura 3).

Figura 2. Ejemplos de procesos de fijación realizados; a) tejido graso/formalina 10%

(x250); b) tejido graso/suero fisiológico (x250); c) próstata/suero fisiológico (x250); d)
próstata/método convencional (x250); e) detalle del glomérulo renal/suero fisiológico
(x500); f) detalle del glomérulo renal/formalina 10% (x500).

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Tabla 2. Resúmen Tinciones y Reacciones Histoquímicas

Nº Pasos
Tinciones Tiempo Convencional Tiempo HMO Calidad
HMO Convencional
PAS 1 1/2 hr 6 min 8 10 +++
Masson 2 1/2 hr 23 min 11 11 ++
Rojo Congo 2 1/2 hr 7 min 7 7 +++
Grocott 2 hr 15 min 12 14 +
Ziehl Neelsen 50 min 5 min 8 8 ++

Figura 3. a) PAS/microondas (x500); b) PAS/convencional (x500); c) Masson/microondas

(x100); d) Masson/convencional (x100); e) Rojo Congo/microondas (x100); f) Rojo
Congo/convencional (x100); g) Grocott/microondas (x500); h) Grocott/convencional (x500);
i) Ziehl Neelsen/microondas (x1000); j) Ziehl Neelsen/convencional (x1000).

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DISCUSIÓN
La utilización de los hornos de microondas
domésticos en los laboratorios de Anatomía
Patológica, supera en calidad y rendimiento a
las técnicas convencionales, especialmente en
la rapidez con que se obtienen los resultados,
que disminuyen de horas a escasos minutos o
segundos. Esto se relaciona con algunos autores
que mencionan esta característica como la
principal ventaja.(4, 6, 9)
Los resultados indican que la temperatura más
alta está en el centro de la bandeja del
microondas, al igual que lo determinaron Piva
et al., (2003) en un estudio sobre tumores de
mastocitos en cánidos(8). Probablemente esto
es debido a la acción de las microondas en las
paredes del horno, las que influyen en la
existencia de una mayor absorción de energía
en esa zona, y principalmente porque el horno
de microondas utilizado en nuestro estudio no
poseía bandeja giratoria, que ayuda a distribuir
mejor la temperatura y permite que la solución
pase por los puntos fríos y calientes dentro del
horno.
Por otro lado, los cortes de grasa mejoraron
notablemente en comparación al método
convencional favoreciendo el corte posterior,
además, el cambio de coloración permite
diferenciarla del tejido linfático que se presenta
más oscuro. En el procedimiento realizado con
suero fisiológico los tejidos no presentan la
dureza que adquieren con la formalina, ya que
este líquido fijador actúa formando puentes de
metileno que provocan cierta rigidez, en cambio
el suero fisiológico mantiene la osmolaridad
dentro del tejido, conservando su estructura.
Por otra parte, los cortes que han sido expuestos
a las microondas y a la formalina se fijan en un
menor tiempo en el horno, debido a que la
utilización de las microondas favorece la difusión
del reactivo y acelera la unión del fijador a las
proteínas del tejido.(24) Por último, es importante
mencionar que utilizando suero fisiológico en los
procedimientos, contribuye a disminuir la
contaminación dentro del laboratorio.
Los resultados no fueron satisfactorios en el
proceso de deshidratación, aclaramiento e
impregnación, por la cantidad de líquidos que
se debían estandarizar (3 alcoholes, 2 xilol y 2
parafinas), por su rápida evaporación al utilizarlos
con calor por las microondas y porque cada
grosor y tipo de tejido necesita un tiempo
diferente. Es preciso un estricto control en cada
uno de los pasos.
En cuanto al mejoramiento de la calidad en la
intensidad de las tinciones y reacciones
histoquímicas, los resultados apoyan esta
1642
afirmación y es concordante con la literatura,(6,17,22)
donde se menciona que se producía un intenso
color utilizando un microondas doméstico.
Se debe considerar que, algunos de los reactivos
ya no pueden seguir utilizándose luego de la
primera exposición a las microondas, como la
Hematoxilina de Weigert, Fucsina ácida Escarlata
de Biebrich, o el Nitrato de Plata Metenamina,
ya que la intensidad que producen es muy baja
o porque precipitan, pero otros pueden ser
usados sin problemas, como el Bouin, Reactivo
de Schiff, Hematoxilina de Mayer, Azul de Anilina,
Rojo Congo, Ácido Crómico o Carbol Fucsina.
Esto debe ser controlado por el Tecnólogo Médico
a cargo de estandarizar los procedimientos. En
este contexto, el tiempo de utilización de los
reactivos es menor, si se consideran los
procedimientos a temperatura ambiente, siendo
reutilizados siete veces en nuestro caso.
Para decidir el mejor horno de microondas se
deben considerar los procedimientos a realizar,
los reactivos que se utilizarán, si posee bandeja
giratoria (ayuda a distribuir mejor la temperatura),
el control de temperatura, la potencia, y la
ventilación en el área de trabajo, ya que es
necesario estandarizar las técnicas en cada
laboratorio en particular; y es posible que un
procedimiento que tiene buenos resultados en
uno resulte diferente en otro.
Por último y como conclusiones, podemos decir
que: 1) La utilización de un microondas doméstico
reduce la cantidad de pasos en los
procedimientos, disminuyendo el costo y la
espera de los resultados en los pacientes. 2) El
procedimiento de fijación con microondas es útil
para todos los tejidos utilizados. Además, es
posible complementarlo con la inclusión y tinción
de los tejidos de forma convencional ya que solo
con acelerar la fijación se reduce el tiempo
considerablemente. 3) El procedimiento de
deshidratación, impregnación y deshidratación,
es muy difícil de estandarizar, porque depende
principalmente del grosor del tejido y de la
cantidad de agua que posee, por lo que los
protocolos deben ser adecuados para cada
grosor de muestra. 4) En relación a las tinciones
y reacciones, se disminuyen los tiempos
considerablemente y aumenta la intensidad de
tinción y reacción, por lo que la aplicación de las
microondas mejora el rendimiento, el contraste
y no afecta el tejido. 5) Es importante mencionar
la toxicidad de los vapores producidos al someter
los diferentes líquidos a la acción de las
microondas, por lo que los riesgos y la protección
de la persona a cargo de los procedimientos
deben tenerse en cuenta. 6) Por último, cabe
mencionar que este trabajo es un apoyo para la
estandarización de los procesamientos utilizados
en histopatología donde se ha pretendido reunir
la información necesaria para la utilización del
horno de microondas doméstico.
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Recibido: 09/08/2011 Aceptado: 05/10/2011

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