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Estas enzimas y las clulas que los poseen se ponen de manifiesto mediante una reaccin enzimtica que
convierte a unos sustratos solubles e incoloros en productos insolubles y coloreados.
Los sustratos son especficos para el enzima y los productos se
depositan en el lugar preciso donde se produjo la reaccin, es
decir, donde se localiza el enzima.
Peroxidasas
Fosfatasas
Deshidrogenasas
Diaforasas
Acetilcolinesterasa
etctera.
Hay que tener en cuenta que cuando queremos
detectar una actividad enzimtica es recomendable no
incluir el material en medios como la parafina puesto
que la deshidratacin y la temperatura elevada
pueden daar la conformacin de la enzima y por
tanto la actividad de su centro activo. Por ello estas
tcnicas se realizan normalmente en secciones
obtenidas por congelacin.
Va fosfatasa y esterasa:
La reaccin enzimtica quita grupos fosfato o naftilo y en este caso el indicador colorimtrico son
sales de diazonio. En el captulo de inmunohistoqumica se muestra de qu manera se utilizan
como marcadores enzimas capaces de hacer cambiar de color un sustrato incoloro.
Las enzimas ms frecuentemente utilizadas son peroxidasa y fosfatasa alcalina. Estas enzimas hacen
cambiar de color los sustratos de diaminobenzidina (color pardo), aminoetilcarbazol (color rojo) y
nitroazul de tetrazolio (color azul). Pueden usarse a la vez, en combinacin.
En casi todas las tcnicas histoqumicas que se han venido utilizando para ver las
enzimas y localizarlas en los tejidos, el producto final de la reaccin debe ser insoluble.
El resultado de estas tcnicas puede ser visible en funcin de tener alguna de las
siguientes propiedades:
Casi todas las tcnicas se realizan con tejido congelado, porque la mayora de las enzimas se inactivan
por fijacin con formol.
Se recomienda congelar las muestras en hielo seco (CO2) a -80 C o en isopentano en un congelador (-
25 C), en un pequeo tubo Eppendorf (biopsias) o bolsa de plstico (resecciones quirrgicas).
La fosfatasa alcalina es una enzima importante en la barrera hematoenceflica, la mucosa dental y el tbulo
proximal del rin.
Una disminucin de la actividad enzimtica de la fosfatasa alcalina indica deterioro funcional grave.
Las reacciones de histoqumica enzimtica ms frecuentemente usadas son ATPasa a pH 4,5 y 9,4,
deshidrogenasa succnica, NADH, fosforilasa y citocromo C oxidasa (COX).