Diagnostico

coproparasitoscópico
Examen macroscópico
Examen Microscópico
Directo ,Concentración y Tinción permanente
 Examen Macroscópico

• Consistencia: correlacionar con estadios de protozoarios.

• Ooquistes pueden estar presentes en heces diarreicas y bien
formadas. A > diarrea > cantidad de ooquistes y < número de
huevos de helmintos.
• Superficie vs fondo
• Color: puede indicar presencia de sangre, bismuto o ingesta
de Fe.
• Presencia de sangre: oscura vs fresca.
• Mucosidades: heces diarreicas con sangre y moco sugieren
presencia de E. histolytica
• Presencia de parásitos macroscópicos.
Examen Microscópico
Directo ,Concentración y Tinción permanente

IDENTIFICAR
• Trofozoitos y quistes de protozoarios
• Ooquistes de coccidios y esporas de microsporidios
• Huevos y larvas de helmintos
• Glóbulos rojos: ulceración u otros problemas
• Glóbulos blancos (PLMN): inflamación, generalmente
asociadas a moco. Predominan en enfermedades
bacterianas
• Eosinófilos: respuesta inmune
• Flora bacteriana
• Células de descamación y cristales
Identificar

• Macrófagos: diferenciar de amebas .

• Cristales de Charcot Leyden: miden de 10 a 30 µ , forma romboidal alargada, con
extremos puntiagudos son producto de la desintegración de eosinófilos
asociados a procesos alérgicos por parásitos u otros orígenes
• Hongos : aumentan cuando hay desequilibrio de la flora bacteriana
• Restos alimenticios de origen vegetal: Almidones (gránulos de formas diversa)
granos de polen, esporas de hongos. Fibra vegetal, raíces, pelos
• Restos alimenticios de origen animal: grasa y fibras musculares
Trofozoititos y quistes de protozoarios

I, j Entamoeba coli
K,l Endolimax nana
M, n Iodamoeba butschlii
O Blastocystis hominis
P Dientamoeba fragilis
Ooquistes de coccidios
Huevos y larvas de helmintos
Cristales de Charcot leyden
y Polimorfonucleares
Macrófagos cristales de Charcot Leyden, levaduras y
Polimorfonucleares
Blastocystis hominis(1,2,4) y levaduras
Granos de polen
Artefactos vegetales en heces
Examen directo
fresco
• Preparación de la muestra: coloque una gota de salina
fisiológica en un portaobjeto. Con un palillo toque la
muestra en diferentes sitios, suspenda en forma
homogénea, y coloque un cubreobjeto procurando que
quede la muestra bien distribuida y con la densidad
adecuada. Selle con parafina.
El examen directo tiene por objeto la detección de
trofozoitos motiles de protozoarios. Esos organismos son
transparentes y pálidos, aparentan ser refráctiles. Para
observarlos se requiere de baja intensidad de luz,
observando sistemáticamene con bajo poder.
Examen directo
tinción rápida

• La muestra directa se prepara con Iodo lugol, o sol D‘Antoni, o Azul

de metileno de Nair, MIF.
• No se obervarán trofozoitos en movimiento
• Establece una coloración de contraste como complemento a la
observación con salina fisiológica.
• Recomendada incluso con muestras preservadas
Examen directo
tinción rápida

La muestra debe permitir

la lectura de un material
impreso

La preparación debe
sellarse si
no se va a observar
de inmediato
Crontol de calidad del examen directo

• Revisar las soluciones de trabajo, deben estar libres de bacterias y

hongos.
• El iodo debe tener un color oscuro.
• El citoplasma de los quistes de protozoarios teñidos con iodo se
observa amarillo oro, el glucógeno marrón, y los núcleos se observan
refractarios.
• El microscopio debe estar calibrado.
 Diagnóstico coproparasitológico
Concentración y Tinción Permanente
Concentración
Sedimentación y Flotación
• El examen de concentración es un procedimiento de rutina que
forma parte del diagnóstico coproparasitológico y que permite
detectar parásitos que están en baja densidad.
• La separación de protozoarios, huevos y larvas de helmintos de los
detritus fecales se realiza por centrifugación o por diferencia de la
gravedad específica (flotación).
 Concentración
• Sedimentación
• Separa los organismos por
centrifugación. Recupera todos
los quistes de protozoos,
ooquistes, larvas y huevos de
helmintos
• Contiene más detritos
• Más fácil
• Menos errores técnicos en su
ejecución
• Flotación
• Utiliza una solución de alta gravedad
específica.(1.18)
• Produce muestras más limpias, los
detritos permanecen en el
sedimento.
• Para algunos huevos (operculados,
no fertilizados de Ascaris)se requiere
mayor gravedad específica, lo que
puede distorsionar los parásitos
• Se debe complementar con
sedimentación.
 Fijación y eliminación por filtración y centrifugación de elementos
gruesos
para ambos métodos
• Suspenda 3-4 g de heces en formalina 5 a 10 %
• Filtre la suspensión con gaza en un tubo de centrífuga de15 ml.
• Centrifugue a 500g por 10 minutos
• Descarte el sobrenadante
• El lavado y centrifugado se repite hasta que el sobrenadante este
claro.
Exámenes de concentración por Flotación

• Método de Willis: Flotación con salmuera.

• Flotación con sol. saturada de sacarosa.( gravedad específica 1.25-
1.27).
• Método de Faust :Flotación con sulfato de zinc gravedad específica
1.18
• La gravedad específica del sulfato de zinc debe ajustarse a 1:20 para heces
preservadas en formalina o a 1:18 para heces frescas.
Flotación con Sulfato de Zinc
• Una vez lavada la muestra
• Re suspenda el sedimento en
aproximadamente 3 ml de sulfato de zinc
• Llene el tubo hasta 3-4 mm de la boca del
tubo.**
• Centrifugue por 2 minutos a 500g
• Dos capas se deben observar
(sedimento/sulfato de zinc)
• Tome la muestra con un asa.
• ** puede llenar el tubo hasta la formación del
menisco y colocar un cubre-objeto, retirar a
los 15 minutos para observar bajo el
microscopio
 Examen de concentración por Flotación con
Sulfato de Zinc
• Control de la Gravedad especifica del Sulfato de Zinc con un hidrómetro
• Muestra: heces frescas o preservadas en formalina SAF o PVA.
• Gravedad especifica mayor a 1:18 o 1:20
• Huevos operculados se abren, llenan de liquido y se van al fondo.
• Quistes de Protozoos y huevos de helmintos de cubierta delgada pueden colapsar y
distorcionarse si no se observa la muestra inmediatamente.
• Algunos coccidios pueden quedar en el sedimento
• Si es el único método se debe revisar el sedimento también
Concentracion por flotación con Azúcar de Sheather

• Similar a Sulfato de Zinc.

• Gravedad específica de la sacarosa debe estar en 1.25 a 1.27
• Recomendada para Cryptosporidium spp y algunos huevos.
Limitaciones de la concentración por flotación

• Los resultados deben confirmarse con la tinción permanente y en

ocasiones con tinciones directas de la muestra concentrada.
• El sulfato de zinc distorsiona la muestra,por lo que debe observarse
inmediatamente.
 Exámenes de concentración por Sedimentación Método de
Ritchie: Sedimentación- centrifugación (formol-ether; Formol-acetato
de etilo)

• Muestras: heces frescas o

preservadas en formalina (5 o
10%, tamponada o no), SAF o
PVA.
• Fijación y eliminación de
elementos gruesos.
• Lavado de la muestra
Extracción de grasa y detritos finales.
• Resuspenda el sedimento en 9 ml de
formalina.
• Agregue 4 a 5 ml de acetato de etilo
(solvente) y mezcle vigorosamente por
30 segundos.
• Retire la tapa para dejar salir la presión
• Centrifugue nuevamente.
• Cuatro capas deben formarse: acetato
de etilo, detritos fecales, formalina, y
sedimento fecal.
• Decante
• Observe una gota de sedimento al
microscopio
Control de Calidad para la concentración por sedimentación o flotación

• Revisar los reactivos cada vez que se van a utilizar. La salina y la

formalina deben estar claras, sin contaminación visible.
• Microscopio calibrado
• Incluir un control positivo cada cuatro meses y después de calibrada
la centrifuga.
• Registrar todos los resultados del control de calidad
• Plan de acción para muestras fuera de control
Concentración por
Sedimentación
Limitaciones de la concentración por sedimentación

• Los resultados se deben confirmar con la tinción permanente y en

ocasiones con tinciones directas de la muestra concentrada.
• La velocidad y tiempo de centrifugación es crítica para ooquistes de
Cryptosporidium y esporas de microsporidios.
• Mejores resultados con muestras preservadas con formalina que con
las preservadas con PVA.
Tinción Permanente

• La detección y correcta identificación de muchos protozoarios

depende de la tinción permanente observada con aceite inmersión y
objetivo de 100X.
• Es un registro permanenete de protozoarios identificados.
• Sirve de material de consulta entre especialistas cuando hay
características morfológicas no usuales.
Tinción Permanente

• Principio: Provee colorante de contraste, para el fondo, detritus y

protozoarios parásitos presentes.Permite observar detalles
morfológicos al máximo aumento.
• Muestra: fresca o preservada
• Técnica: HF, tricrómica, HF modificada, policromo IV, clorazol negro.
• Examen: revisar al menos 300 campos, o más hasta confirmar la
presencia de organismos observados en el directo y la concentración.
Tinción Permanente
Limitaciones
• Las mas comunes son HF y la tinción tricrómica
• No recomendable para huevos y larvas de helmintos.
• Ooquistes de coccidios y esporas de microsporidios requieren
tinciones especiales.
• Las observaciones en bajo poder y alto poder seco no son útiles.
Deben examinarse en alto poder con aceite de inmersión.
• Es un examen complementario y de confirmación
Hematoxilina férrica de Heidenhain
• Fijación
• Fijador (Schaudiin , PVA o SAF)
• Eliminación de restos de fijador : alcohol yodado,
• Hidratación : alcohol al 70%, 50%, 30%
• Preparación para el tinte
• mordiente (sulfato férrico amoniacal), agua destilada,
mordiente, agua, Hematoxilina
• Eliminación de exceso de colorante: agua, mordiente,
• Deshidratación : alcohol 30%,50%, 70%, 90% y 95%, xilol,
• Montaje de la muestra: bálsamo de Canadá.
Tinción tricrómica

• Fijador
• Cromotropo 2R
• Verde claro 2R
• Verde brillante FCF
• Acido fosfotungstico
• Ácido acético glacial
• Agua destilada