Preparaciones microbiológicas

•Preparaciones en fresco (microorganismos vivos)

•Preparaciones fijas y teñidas (microorganismos muertos)
Preparaciones microbiológicas
Refracción: Desviación del rayo de luz en la interfase
entre dos medios distintos.

Resolución: Distancia mínima entre dos objetos, que los

revela como entidades separadas.

d = 0.5 λ / n sen 

En donde:
d es resolución,
λ es longitud de onda
n es el índice de refracción
 es la mitad del ángulo del cono de luz que entra en un
objetivo
 Frotis
Consiste en una capa delgada de muestra extendida sobre un
portaobjetos que permite el paso de la luz a través de ella.

•Impronta •Gota de cultivo líquido •Cultivo sólido

resuspendido

•Frotis sanguíneo •Cinta adhesiva transparente •Hisopo

 Tinciones
•Positivas
Se observa teñida la célula
sobre un fondo claro.
Frotis Sanguíneo
•Negativas
El fondo se tiñe de oscuro
para observar células o
estructuras refringentes.
Cryptococcus neoformans
Tinciones
Bacillus
megaterium. Tinción
simple con cristal
violeta.
•Simples
Se utiliza un sólo colorante
(básicos). Frotis sanguíneo con
- Azul de metileno Yersinia pestis.
- Safranina Tinción de Wrigth.
- Cristal violeta
•Compuestas
Se utilizan dos ó más Médula ósea.
colorantes. Pueden usar Tinción de May
mordentes y decolorantes Grünwald-
Giemsa.
- Giemsa
- Wrigth
- May Grünwald
Trypanosoma sp
(Eosina-Azul de metileno) en sangre.
Tinción de
Wrigth.
 Tinciones
Tinción de
•Selectivas cápsula.
Bacillus
Son utilizadas para teñir anthracis
partes específicas de los
microorganismos
- Cápsula
- Endosporas Tinción de
- Flagelo endosporas.
- Núcleo Bacillus subtilis.

Tinción de
flagelos.
Proteus vulgaris

Tinción de núcleo.
Leucemia megacariocítica
 Tinciones
Tinción de Ziehl-
Neelsen.
Mycobacterium
•Diferenciales bovis
Permiten distinguir entre dos
tipos de pared celular.
Debido a su composición, Tinción de
Gram.
reaccionan de manera
diferente entre las distintas
clases de bacterias.
- Ziehl-Neelsen
- Gram Tinción de
Gram.
 Colorantes
Son compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias
les imparten color. Están formados por un grupo cromóforo que es el
responsable del color, y un grupo auxócromo que al formar sales le
permite disociarse y combinarse. Mordente es un compuesto
químico intensificador de color.

•Ácidos. •Básicos.
El cromóforo es el anión de El cromóforo es el catión
la molécula. de la molécula.
Br Br
NaO O O Cl-
N
Br Br
(CH3)2N S N(CH3)2
COO- Na + +

Azul de metileno
Eosina
 Técnicas de tinción
Frotis

•Tinción simple
Colorante básico
(1 minuto)

Enjuagar con agua

Penicillium sp. Neisseria Pseudomonas Staphylococcus

Tinción simple con gonorrhoeae. aeruginosa. aureus.Tinción
azul de algodón. Tinción simple con Tinción simple simple con azul
safranina. con safranina. de metileno.
 Técnicas de tinción: selectivas
•Tinción de cápsula

Bacillus cereus

Extendido

Muestra + tinta china o

nigrosina

Secar al aire

Acinetobacter calcoaceticus Safranina de Gram o

Cristal Violeta (1 minuto)
 Técnicas de tinción: selectivas
•Tinción de endosporas

Verde de malaquita 5%
con emisiones de vapor
de agua (10 minutos)

Bacillus subtilis Lavar con agua

Safranina 0.5% (1minuto)

Clostridium botulinum
 Técnicas de tinción: selectivas

•Tinción de flagelo

Colorante primario. Para-

rosa anilina
Vibrio cholerae

Mordente. Ácido tánico

Colorante de contraste. Azul

de metileno

Salmonella typhi
 Técnicas de tinción: diferenciales
•Tinción de Gram
Colorante primario. Cristal
violeta 1% en solución de
oxalato de amonio al 0.85%
(1 minuto)

Mordente. Lugol I2/KI 1g/2g Streptococcus mutans

en 300 mL de agua (1 minuto)

Decoloración. Alcohol-Acetona
70:30. Hasta eliminar el exceso
de colorante

Colorante de contraste. Escherichia coli

Safranina 0.25% (1 minuto)
 Técnicas de tinción: diferenciales

•Tinción de Ziehl-Neelsen

Colorante primario. Fucsina

fenicada con emisiones de
vapor de agua (10 minutos)

Mycobacterium bovis
Decoloración. Alcohol-Ácido
(etanol-HCl) 97:3. Hasta eliminar
el exceso de colorante

Colorante de contraste.
Azul de metileno de Loeffler
(1 minuto)
Mycobacterium tuberculosis
Microscopía
Microscopía
Microscopía óptica y electrónica
 Tipos de microscopías
•Óptica de campo claro •Óptica de campo oscuro

•Contraste de fases •Diferencial de contraste

de interferencia (DIC).
 Tipos de microscopías
•Confocal •De fluorescencia

•Electrónica de barrido •Electrónica de transmisión