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COLOREADOR AUTOMATICO

UNIVERSADAD PERUANA LOS ANDES


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA
ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA

COLOREADOR AUTOMATICO

CATEDRATICA: AYALA IDALGO MAGALY


CATEDRA: HISTOPATOLOGIA
ESTUDIANTES:
CONTRERAS VALLADARES BRENDA LIA
HUATUCO GARCIA SHEYLA DAYSI
RAFAEL MUCHA ERICK
CICLO: VI
HUANCAYO – PERU
2017

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INTRODUCCIÓN

La técnica histológica de tinción es el método más utilizado para el procesamiento


de tejidos, estos procesos experimentales son necesarios para obtener secciones
teñidas y estas a su vez estén listas para observar al microscopio partiendo de
tejidos vivos extraídos de seres humanos

La mayoría de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para


su observación con el microscopio, bien sea éste óptico o electrónico. Ello es
debido a que la estructura de los tejidos está basada en la organización de los
tipos de células que los componen y, salvo contadas ocasiones, las características
morfológicas de las células sólo se pueden observar con estos aparatos.

Los tejidos animales son en su gran mayoría incoloros, excepto aquellos que
poseen algún tipo de pigmento como hemoglobina de la sangre o la melanina de
la epidermis.

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AGRADECIMIENTO

A nuestros padres y profesores quienes me


apoyan y orientan incondicional y
permanentemente. Sin el apoyo de ellos no
hubiéramos llegado a la conclusión de este
trabajo monográfico que es fruto del esfuerzo y
dedicación de todos los integrantes de este
grupo, para compartir el conocimiento obtenido
durante la investigación de este trabajo.

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INDICE
INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................. 2
AGRADECIMIENTO ........................................................................................................................ 3
CAPITULO UNO ............................................................................................................................... 6
1. DEFINICIONES ...................................................................................................................... 6
1.1. TINCION ..................................................................................................................... 6
1.2. TÉCNICA HISTOLÓGICA ........................................................................................ 6
1.3. HEMATEÍNA .............................................................................................................. 6
1.4. TINCIÓN ARGÉNTICA ............................................................................................. 6
CAPITULO DOS ............................................................................................................................... 7
2. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS ............................................................................................... 7
2.1. Tinciones generales .................................................................................................. 7
2.2. Histoquímica. ............................................................................................................. 7
2.3. Lectinas....................................................................................................................... 7
2.4. Inmunocitoquímica. ................................................................................................... 7
2.5. Hibridación.................................................................................................................. 7
CAPITULO TRES ............................................................................................................................. 8
3. COLORACIÓN........................................................................................................................ 8
3.1. PRINCIPIOS GENERALES DE LA COLORACIÓN............................................. 8
3.1.1. Básicos: .......................................................................................................... 8
3.1.2. Ácidos: ............................................................................................................ 8
3.1.3. Neutros: .......................................................................................................... 8
CAPITULO CUATRO ....................................................................................................................... 9
4. HEMATOXILINA-EOSINA .................................................................................................... 9
4.1. Método de la hematoxilina-eosina .......................................................................... 9
4.1.1. Soluciones: .................................................................................................... 9
4.1.2. PASOS: ........................................................................................................ 10
4.2. RESULTADOS ESPERADOS CON LA COLORACIÓN ................................... 10
CAPITULO CINCO ......................................................................................................................... 11
5. TEÑIDORES AUTOMÁTICOS ........................................................................................... 11
5.1. LEICA AUTOSTAINER XL..................................................................................... 11
5.2. MYREVA SS-30....................................................................................................... 14

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5.2.1. CARACTERISTICAS ................................................................................. 14


CAPITULO SEIS............................................................................................................................. 16
6. OBSERVACIONES .............................................................................................................. 16
CONCLUSIONES ........................................................................................................................... 17
BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................................... 18

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CAPITULO UNO
1. DEFINICIONES

1.1. TINCION

Técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la


imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en
tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos
de microscopios.

1.2. TÉCNICA HISTOLÓGICA

Es el conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada


(tejido biológico), a fin de que sea posible su estudio por medio
del microscopio, posibilitando la observación de estructuras no visibles al
ojo humano.

1.3. HEMATEÍNA

Sustancia o compuesto de origen químico de color azul, derivado de la


hematoxilina que se emplea por lo general en la tintorería y es el resultado
de la oxidación de este elemento obtenido de una planta leguminosa
llamado el palo de campeche.

1.4. TINCIÓN ARGÉNTICA

Es el uso de plata (en latín, Argentum) para modificar selectivamente el


color o la apariencia de un objeto. Es una técnica frecuente de tinción
en histología donde se utiliza para revelar detalles extremadamente finos.

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CAPITULO DOS
2. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

2.1. Tinciones generales.

Aquellas que usan sustancias coloreadas que se unen a componentes


tisulares por afinidad química.

2.2. Histoquímica.
Son aquellas técnicas de tinción que implican la modificación química de
algunas moléculas tisulares para posteriormente ponerlas de manifiesto con
colorantes. En este apartado incluiremos también a los métodos de tinción
basados en la capacidad catalítica de algunas enzimas presentes en los
tejidos que queremos estudiar.

2.3. Lectinas.
Las lectinas son dominios de proteínas, como las selectinas, que son
capaces de reconocer glúcidos que forman parte de polisacáridos. Tienen
una gran especificidad y se usan para determinar el tipo de glúcido que
aparece en las glucoproteínas de las células o de la matriz extracelular de
los diferentes tejidos.

2.4. Inmunocitoquímica.
Son técnicas histológicas muy potentes basadas en la alta especificidad de
unión de los anticuerpos a los antígenos contra los que se produjeron.
Estos antígenos pueden ser cualquier molécula tisular que, purificada en
inyectada en un animal, sea capaz de desarrollar una respuesta inmune.
Estos anticuerpos añadidos a una sección de tejido reconocerán y se unirán
específicamente a dicha molécula.

2.5. Hibridación.
Son técnicas basadas en la unión complementaria de las bases de ácidos
nucleicos (adenina con la timina, o con el uracilo, y de la guanina con a la
citosina). Esto hace que dos cadenas complementarias de ácidos nucleicos
se unan entre sí de forma muy específica, es decir, hibriden. Siguiendo este
principio se pueden sintetizar sondas marcadas, cadenas de ADN o ARN
con una secuencia de bases determinada que llevan una molécula unida
para poder detectarlas. La secuencia de bases de la sonda es

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complementaria a otra que está presente en la célula, normalmente en


forma de ARNm. Con ello podemos observar qué células expresan un
determinado gen.

CAPITULO TRES
3. COLORACIÓN

3.1. PRINCIPIOS GENERALES DE LA COLORACIÓN

En términos genéricos, los tejidos de origen animal son incoloros, la


finalidad de utilizar coloraciones en los preparados histológicos es poder
contrastar y diferenciar estructuras que por lo general no poseen color
propio.

El fundamento de cualquier método de tinción radica en la propiedad que


poseen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas
sustancias coloreadas llamadas colorantes.
Las tinciones son sales, pero se los clasifica en:

3.1.1. Básicos:

En donde la molécula de sal que colorea es la base como por


ejemplo el azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina.

3.1.2. Ácidos:

Donde la molécula de sal que colorea es el ácido como por ejemplo


la eosina.

3.1.3. Neutros:

Donde las dos partes de la solución salina proporcionan color, es


un ejemplo de esta el eosinato de azul de metileno.

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CAPITULO CUATRO

4. HEMATOXILINA-EOSINA

Una de las tinciones más comúnmente usada en histología es la hematoxilina-


eosina que se aplica sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un colorante
básico y otro ácido para teñir de diferente color a las estructuras ácidas y
básicas de la célula. Antes de proceder a la tinción, si partimos de cortes de
parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las
secciones como es el des-parafinado, y la hidratación puesto que estos
colorantes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no se lleva
a cabo.

4.1. Método de la hematoxilina-eosina

Existen múltiples variantes, según se emplee un tipo u otro de eosina y de


hematoxilina (generalmente se emplea la de Harris, aunque también se
emplean la de Mayer y la de Ehrlich). Por lo común, este método siempre
consta de una etapa inicial, en la que se colorean los núcleos celulares con
la hematoxilina, y una fase ulterior de contraste citoplasmático y de los
componentes extracelulares con la eosina.

Para las biopsias de piel, riñón, hígado y médula ósea se utilizarán de


rutina, además de H&E, las coloraciones de PAS y tricrómico de Masson,
hierro, reticulina, mucicarmin, Giemsa, Pas alcian blue, fibras elásticas, rojo
congo, plata (Jones) etc.

En las biopsias pulmonares, además de las tinciones rutinarias H&E, fibras


elásticas, tricrómico deben emplearse las tinciones para hierro y otros.
4.1.1. Soluciones:

 Xilol
 Alcohol isopropílico al 95 %
 Agua corriente
 Hematoxilina
 Eosina
 Xilol/Alcohol

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4.1.2. PASOS:

Pasos que siguen durante una tinción general de


hematoxilina-eosina.

4.2. RESULTADOS ESPERADOS CON LA COLORACIÓN

Núcleos Azul/negro.
Eritrocitos Naranja a rosado.
Restantes estructuras Rosado a rojizo.

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CAPITULO CINCO
5. TEÑIDORES AUTOMÁTICOS

5.1. LEICA AUTOSTAINER XL

El sistema probado Autostainer XL de Leica sigue ofreciendo una tinción


reproducible, uniforme de alta calidad y mayor rendimiento de la carga de
trabajo. Además, combínelo con el montador de cubres de cristal
CV5030 de Leica para crear una estación de trabajo que elimina la
manipulación manual de los portaobjetos entre el proceso de tinción y el de
montaje.

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Panel frontal
1. Brazo robot de transporte
2. Estaciones de lavado
3. Estufa
4. Manual para anotar protocolos de tinción
5. Profundidad para colocar el manual
6. Interruptor ON/STOP

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7. Pantalla
8. Panel de mandos
9. Indicadores LED
10. Soporte de portas
11. Tapa para recipiente de reactivos
12. Recipiente de reactivos
13. Cajón de carga
14. Indicador LED y tecla de mando para el cajón de carga
15. Cajón de descarga
16. Tapa con entalladuras
17. Indicador LED y tecla de mando para el cajón de descarga
18. Esquema de las estaciones de procesamiento
19. Dispositivo de soporte de la tapa del equipo
20. Tapa del equipo
Panel posterior
21. Alimentación de agua
22. Desagüe
23. Puerto serial
24. Bloque de alimentación
25. Selector de tensión para fusibles y calefacción
26. Interruptor principal (ON/OFF)
27. Conexión a la red
28. Patas del equipo, ajustables en altura
29. Cable de puente 30. Entrada del bloque de alimentación
31. Placa indicadora de tipo con indicaciones de tensión y no. de serie
32. Conexión para alarma a distancia, Max. 50 V 1 A

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33. Conexión para accesorios


34. Salida de aire
35. Salida del bloque de alimentación

5.2. MYREVA SS-30

El sistema automático de tinción MYREVA, debido a su flexibilidad,


permite la tinción automática y simultanea de varios cestillos con
diferentes protocolos de tinción.

Es ideal para las tinciones con Hematoxilina y Eosina (H&E),


Papanicolau (PAP), así como otras tinciones o protocolos definidos por
el usuario.

5.2.1. CARACTERISTICAS

Tipo de muestras: Muestras histológicas y citológicas.


Capacidad de Hasta 5 cestillos simultáneos, en función
procesamiento: de los programas, frecuencia de carga y
configuración del equipo.

Realización simultánea de varios


protocolos de tinción.

Capacidad de los 30 portaobjetos.


cestillos:
Numero de programas: Hasta 20 programas cada uno de hasta
50 pasos.
Numero reactivos en Máximo 52 (32 programados y 20
memoria: configurables por el usuario).

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Periodo de inmersión: Desde 1 s. hasta 59 min. 59 s. por paso.


Agitación: Sistema de agitación programable e
independiente para cada estación.
Parámetros Amplitud, velocidad y número de
seleccionables: agitaciones.
Escurrido (“Drain”) Función que minimiza el arrastre de
reactivos.
Número de estaciones: 20 contenedores con tapa individual.
Estaciones de reactivo: Máximo 19.
Volumen de las cubetas 300 ml.
reactivo:
Estaciones de lavado: Máximo 3.
Estaciones de carga: Máximo 2.
Estaciones de descarga: Máximo 3 (2 si tiene estación de secado).
Estación de secado:
1 (opcional).
Temperatura estación de 30 a 70ºC.
secado (incremento de
grado en grado):
Extracción de vapores: Filtro de carbón activo.
Alimentación eléctrica: 100-240 VAC / 50-60 Hz.
Autonomía batería: 2h.
Dimensiones: 1.200 x 440 x 368 mm (largo x ancho x
alto).
Peso sin carga: 55 kg.
Referencia Equipos
SS-30-Teñidor 100-240v/50-60 Hz
automático de Tejidos:
SS-30H-Teñidor 100-240v/50-60 Hz
automático de tejidos con
cámara de secado:
Accesorios Opcionales
SS30-059 Adaptador cestillo THERMO-MICROM 30
portas
SS30-200 Cubeta de carga cestillos LEICA
SS30-200B Tapa cubeta carga cestillos LEICA
SS30-201 Adaptador cestillo plástico LEICA 30
portas

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SS30-201B Adaptador cestillo metalico LEICA 30


portas
SS30-202 Adaptador cestillo SAKURA 20 portas
SS30-204 Adaptador cestillo MEDITE 20 portas
SS30-205 Adaptador cestillo MEDITE 30 portas
SS30-210 Adaptador megaslides

CAPITULO SEIS

6. OBSERVACIONES

La causa más común de una tinción inadecuada en la técnica hematoxilina-


eosina es la mala fijación tisular. Otras causas a considerar son el exceso o
defecto de oxidación de la hemateína o de diferenciación de la coloración y el
empleo de una hematoxilina vieja o utilizada excesivamente.

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La hematoxilina y la eosina se utilizan en histología principalmente para poner


en evidencia las características estructurales.

A pesar de los méritos de la tinción con H-E, este procedimiento no permite ver
en forma adecuada ciertos componentes estructurales de los cortes
histológicos, a saber, elastina, fibras reticulares, membranas basales y lípidos.
Cuando se desea estudiar estos componentes pueden utilizarse otros métodos
de tinción, en su mayoría selectivos, que incluyen la coloración con orceína y
fucsina-resorcina para el material elástico y la impregnación argéntica para las
fibras reticulares y las membranas basales. Pese a que el fundamento químico
de muchos no siempre se comprende, estos procedimientos sirven. En
cualquier caso, es más importante saber lo que el método permite observar que
conocer su mecanismo íntimo de acción.

CONCLUSIONES

 La técnica Hematoxilina-Eosina es una técnica histológica que permite


identificar o diferenciar los pastes de un tejido.

 Hoy en día es muy útil para estudiar los tejidos de los órganos y observar
anormalidades como es el caso del cáncer cérvico uterino (Papanicolau).

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 Debido a q es uno de los métodos de tinción más utilizado es necesario que


prendamos a realizarlo de la mejor manera y al mismo tiempo es muy
importante saber cómo quedaría la muestra si no realizamos el proceso de
la forma correcta.

BIBLIOGRAFIA

 https://med.unne.edu.ar/sitio/multimedia/imagenes/ckfinder/files/files/histolo
gia_med_cat2/GUIA%201%20%202013.pdf

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 Celani M. S., Fernández Surribas J., von Lawzewitsch I. Lecciones de


Histología Veterinaria. Volumen I Microscopia y Técnicas Histológicas. I.
Ed. Hemisferio sur S. A. 3ra. Ed. 1984.

 http://www.netlab.com.ec/publicaciones/MANUAL-PROCEDIMIENTOS-
ANATOMIA-PATOLOGICA.pdf

 Luna L. G. Edited. Manual of Histologic Staining Methods of the Armed


Forces. Institute of Pathology. Mc Graw Hill Book company. 3 ed. 1992.

 http://dea.unsj.edu.ar/biologia1/th.pdf

 Stohr P. H. Manuel technique d’Histologie. Paris G. Steinheil, Editeur. 1904

 http://www.pdfmanuales.com/manuals/565527/leica-biosystems-st5010-
autostainer-xl.html

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