HISTOLOGIA Y SUS

METODOS DE
ESTUDIO
Direccin de Calidad Educativa

PRESENTADO POR:
LIC. TM. SHAROL Y. ALIAGA CORDOVA
PROPSITO

Sintetiza la importancia de la
histologa y mtodos de estudio
usados para observar la clula
mediante el uso del microscopio.

Fundamenta los pasos para

preparacin de tejidos.

SHAROL ALIAGA CORDOVA

QU ES HISTOLOGA?

Estudia los tejidos de plantas y

animales, incluyendo estructura
microscpica de los tejidos sino
tambin la de la clula, rganos y
sistemas.

La histologa guarda una relacin

directa con otras disciplinas,
biologa celular, bioqumica,
fisiologa, patologa.

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LA CLULA

SHAROL ALIAGA CORDOVA

MICROSCOPIA

SHAROL ALIAGA CORDOVA

PREPARACIN DE TEJIDOS
TECNICAS HISTOLOGICAS

Comprenden la preparacin de tejidos para su

estudio microscpico, sometiendo el tejido por
examinar a una serie de procesos fsicos-
qumicos.

El objetivo es que se pueda llegar a

conclusiones analticas concretas y el anatomo-
patlogo pueda realizar un diagnstico en la
determinacin de la patologa.

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 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
MX. Y SOLICITUD CORTES DE TEJIDO
MDICO DEL PACIENTE FIJADOS EN
FORMOL.

Recepcin y
INGRESAR LA
rotulacin de NO SE
FICHA A BASE
DE DATOS
la muestra, INFORMA
Mx. debidamente adecuado
rotulada, envasada
y fijada.
SI

MACROSCOPIA
INFORME DE OBTENCIN DE
ENTREGA DE LA MUESTRA CORTES DEL TEJIDO
RESULTADO
S
INICIO DEL PROCESO

MUESTRAS PUESTAS
EN EL PROCESADOR
FIJACIN DE TEJIDOS
DESHIDRATACION
ACLARAMIENTO
INFILTRACION INCLUSION EN PARAFINA Y
CONFECCION DE BLOQUES

MICROTOMIA, COLORACION,
RESULTADOS
ELABORACION Y MONTAJE Y SECADO
VALIDACION DEL
INFORME
LECTURA
 Las muestras pueden ser obtenidas por:

Extendido
Puncin con trocar
Autopsia

Biopsia

Es un procedimiento diagnstico que consiste en la extraccin

de una muestra de tejido obtenida por diferentes mtodos
especiales, para examinarla al microscopio.

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 PROCESAMIENTO DE TEJIDOS
TECNICAS HISTOLOGICAS

1. FIJACIN
FORMOL AL 10 %
Conservacin selectiva de estructuras VELOCIDAD TIEMPO
DE DE
y componentes de las clulas y PENETRACIN INMERSIN
tejidos. Preserva los tejidos T
deteniendo la autlisis
pH
Permite que los tejidos permanezcan
sin cambios luego de subsecuentes
tratamientos. DISTANCIA
DE
PENETRACIN

El fijador, no debe encoger, ni

hinchar, ni disolver, ni distorsionar el SI LAS CLULAS NO FUERAN
tejido, debe destruir bacterias y FIJADAS, SE PERDERAN POR
hongos. SOLUCION SIMPLE, DIALISIS E
INGURGITACIN OSMOTICA.
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PROCESADOR DE TEJIDOS

100%
100 % XILOL

1h
1h 1h
96 % XILOL
1h
1h

1 h PARAFINA
90 % 1h 1
1h
1h
PARAFINA
80 % . 1h 2
.
PARAFINA
AGUA
1 3
FORMOL
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 2. DESHIDRATACIN
Se realiza con alcoholes
Debido a que una gran parte del tejido est constituida por agua, se
aplica una serie gradual de alcoholes (agente deshidratante) que van de
menor a mayor grado de concentracin.

Se aplica alcohol desde el 70%, 80%, 90%, 96% y alcohol al 100 % para
eliminar el agua.

Debe ser gradual, porque si el agua sale muy rpido del tejido se deforma
y distorsiona.

SALIDA DEL
AGUA DE LA
CELULA

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 3. ACLARAMIENTO
Permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado
por un lquido que disuelva la parafina, con la cual el
tejido va a ser impregnado.

El tejido se torna transparente o claro en el xilol, esto

se debe a que cambia su ndice de refraccin.

LES
Se usa el Xilol, por la inclusin rutinaria en parafina, por
su compatibilidad en muchos tipos y tamaos de
tejido.

XILOL: Es un disolvente,
lquidos incoloros e inflamable.

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4. INFILTRACIN

Se coloca el tejido en un recipiente adecuado

con parafina fundida hasta que se infiltra por
completo.

Lo recomendable es utilizar el tipo de parafina

segn el tejido que se tenga.

PARAFINA:
Sustancia slida, ceroso, blanca, Inolora.
Punto de fusin tpico entre 47 C a 64 C.
Es insoluble en agua, aunque si es soluble en eter,
benceno, y algunos esteres.

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 5. INCLUSIN
Se impregnan los tejidos con un medio que llene todas las cavidades naturales, espacios
e intersticios tisulares y espacios intracelulares, que proporcione la consistencia firme
necesaria para hacer cortes bastante delgados sin provocar distorsin en el tejido.

Ya que son especmenes pequeos se debe encerrar en un bloque o una masa de

material de inclusin, que permita manejar las muestras y cortar con el micrtomo.

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 INCLUSIN
Son tres tipos de medios en los
cuales podemos incluir el tejido:

Parafina
Celoidina (ojos, embriones
grandes): lento y tedioso, difcil
corte.
Gelatina (uso cuando debe
evitarse la deshidratacin)

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Inclusin en parafina
6. SECCIN
El micrtomo, permitir obtener series ininterrumpidas de
cortes de grosor determinado y uniforme.
Tipos:

DE MANO: DE DESLIZAMIENTO:
Corta tejido vegetal.
Cortes incluidos en
celoidna, corta secciones
entre 5 10 um.

DE ROTACIN O MINOT:
La cuchilla permanece fija y perpendicular
al portabloques, en posicin vertical.
Cortes de gran presicin entre 3 - 5 um.

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 MICROTOMIA:
Cortes y Secciones

CUCHILLAS PARA No deben tener amelladuras

EL MICROTOMO ni irregularidades.
Y se debe cortar con un
angulo de 5 -10.

GROSOR DE LAS Lo usual es un grosor de 6

SECCIONES um, pero el grosor
apropiado es 4 um, esto
reduce la superposicin de
los ncleos.

ORIENTACIN DEL Bloque correctamente

BLOQUE orientado, para que el corte
incluya toda la superficie del
tejido. Libres de
desgarramientos, lneas,
dobleces o distorsin
celular. SHAROL ALIAGA CORDOVA
 MICROTOMIA

REBANAMIENTO Eempapamiento hace que el tejido

INICIAL y aumente de tamao.
EMPAPAMIENTO

CREACIN DE Cuando se este creando una cinta,

CINTAS la rueda de mano debe hacerse girar
uniforma y lentamente. Si se hace
girar rpido, salen de distinto
grosor. Colocar la cinta en la
superficie del bao de flotacin.

FLOTACIN Debe estar a una temperatura de

unos cuantos grados por debajo del
punto de fusin de la parafina. El uso
de agua destilada en la bao de agua
ayuda a eliminar burbujas de aire.

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7. MONTAJE
Los cortes de parafina se
montan en portaobjetos de
vidrio. Y luego se llevan a
eliminar la parafina. SHAROL ALIAGA CORDOVA
 8. TINCIN

Los cortes de tejido se teirn con colorantes de preferencia hidrosolubles.

Va a permitir estudiar y conocer las caractersticas fsicas de los tejidos, y las

relaciones entre las clulas que la constituyen.

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 TINCIN
Tipos de colorantes

1. Colorantes que diferencian los componentes

cidos bsicos de la clula.

2. Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz extracelular

3. Sales metlicas que se precipitan en los tejidos y

forman depsitos de metales en ellos.

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 TINCIN
Las tinciones mas utilizadas con las siguientes:

La hematoxilina-hematena, tie Giemsa (col. +/-)

estructuras cidas Hematoxilina
como el ncleo (color azul), y la Eosina
eosina tie citoplasma y
estructuras extracelulares (color
rosa).

Tricrmicos Papanicolau
Fib. Col. Conj. 4
 XILOL XILOL

XILOL XILOL

ALCOHOL ALCOHOL
100% 100%

ALCOHOL ALCOHOL
100% 100%

ALCOHOL ALCOHOL
TINCIN: Proceso

95% 96%

ALCOHOL ALCOHOL

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95% 96%

ALCOHOL
EOSINA 80%

AGUA AGUA
CARBONATADA DESTILADA
Azulamiento

AGUA HEMATOXILINA
ACIDA
CORRIENTE
AGUA

Diferenciacin
9. MONTAJE, SECADO y LECTURA

Si se examina al microscopio un corte teido sin montar, es

difcil percibir los detalles por la gran diferencia que existe
entre la refraccin de la luz en el portaobjetos, el tejido y el
aire. Adems la dispersin de la luz es distinta.
Es por esas razones que se utiliza como medio de montaje el
Blsamo de Canad.

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 PROCEDIMIENTOS AVANZADOS DE
OBSERVACIN
HISTOQUIMICA
INMUNOCITOQUIMICA
MICROSCOPIA ELECTRONICA

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Elabor un flujograma sobre
la preparacin de tejidos,
fundamentando sus distintas
etapas.

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