LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL UNIVERSIDAD DEL VALLE

ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE

Castillo Jorge Luis (1827089); Gómez Pérez Laura (1826356)

castillo.jorge@correounivalle.edu.co , laura.gomez.perez@correounivalle.edu.co

Universidad del Valle.

Departamento de Química, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas
Laboratorio de Análisis Instrumental

Profesor Harold Humberto Díaz Segura

Fecha de la practica: 27/02/2021
Fecha de entrega: 8/03/2021

1) Resumen: El objetivo de la practica fue la determinación del naranja de metilo por espectrofotometría, el cual se
realizó por medio de una curva de calibración. Para esto se preparan dos soluciones madre. Cada una con 10 mL
de Naranja de metilo y posteriormente aforándose a 250mL. Una de las soluciones madre se llevó a pH 3.0 y la
otra a pH 7.0. Se ajusto el pH con una solución diluida de NaOH y una solución diluida de HCl. Posteriormente
se sacaron alícuotas de 5,10,15,20 y 25 mL de las dos soluciones madres y se aforaron a 100 mL donde se
determio la absorbancia y la concentración de la especie protonada y desprotonada del naranja de metilo, Esta
absorbancia se determinaron en 2 rangos de longitudes de onda. (400nm-465nm) y (510nm-540nm) Donde se
encontró que para pH 7.00 la curva de calibración más útil era la de la especie desprotonada en el rango de
longitud de onda de (510nm-540nm) y para pH 3.00 la curva de calibración más útil es la curva de calibración de
las dos especies en el rango de longitud de onda 400nm-465nm. Donde se concluye que las curvas de calibración
se deben de realizar en el máximo de absorbancia para minimizar errores instrumentales.

Palabras Claves: Espectrofotometría, absorbancia, longitud de onda

2) Datos, Cálculos y Resultados

2.1) Curvas de calibración a pH 7.0 Curva de calibracion
A continuación, se presentan las diferentes curvas de 0,300
calibración de las especies protonada y despretonadas del 0,250 y = 6E+07x + 0,0024
Absorbancia

naranja de metilo a dos longitudes de ondas las cuales 0,200 R² = 0,9997

presentan sus respectivas absorbancias. 0,150
0,100
2.1.1) Curva de calibración especie protonada longitud de
onda (400-465nm) 0,050
A continuación, se presenta la curva de calibración 0,000
concentración vs absorbancia de la especie protonada del 0,00E+00 1,00E-09 2,00E-09 3,00E-09 4,00E-09 5,00E-09
naranja de metilo a una longitud de onda de 400-465nm, a esta Concentracion
longitud de onda se presenta el máximo de absorbancia, la Grafica 1. Curva de calibración especie protonada Naranja
concentración de la especie protonada a este pH se considera de metilo
despreciable debido a la gran diferencia que posee con 2.1.2 Curva de calibración especie protonada longitud de
respecto a la concentración de la especie desprotonada del onda (510-540nm)
naranja de metilo. A continuación, se presenta la curva de calibración
concentración vs absorbancia de la especie protonada del
naranja de metilo a una longitud de onda de 510-540nm, a esta
longitud de onda se presenta el mínimo de absorbancia.
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Curva de calibracion
0,300
Curva de calibracion
0,250 y = 21844x + 0,0031
0,04
R² = 0,9998

Absorbancia
0,035 y = 8E+06x + 3E-05 0,200
0,03 R² = 0,9991 0,150
Absorbancia

0,025
0,100
0,02
0,015 0,050
0,01 0,000
0,005 0,000E+00 5,000E-06 1,000E-05 1,500E-05
0 Concentracion
0,00E+00 1,00E-09 2,00E-09 3,00E-09 4,00E-09 5,00E-09 Grafica 4. Curva de calibración especie desprotonada
Concentracion Naranja de metilo
Grafica 2. Curva de calibración especie protonada Naranja
de metilo 2.1.5 Determinación de variables de grafica por medio de
mínimos cuadrados
2.1.3 Curva de calibración especie desprotonada longitud La curva de calibración más útil a pH 7.00 es la presentada en
de onda (400-465nm) la gráfica 4. El motivo se presenta en la sección de discusión.
A continuación, se presentan los cálculos del intercepto,
Como se mencionó previamente, a pH 7.0 predomina la pendiente y las desviaciones del intercepto y de la pendiente
especie desprotonada, por lo que se puede afirmar que la de la gráfica 4.
absorbancia que presenta la solución en los dos rangos de
longitudes de onda se atribuye solo a la concentración de la SXX SXY SYY Vprom Yprom
especie desprotonada, ya que la concentración de la especie 5,63E-11 1,23E-06 0,027 6,28E-06 0,140
protonada es insignificante. Del mismo modo, a esta longitud
de onda se presenta la máxima absorbancia. Tabla 1. Datos obtenidos mínimos cuadrados

Curva de calibracion Mediante la ecuación 1 se puede determinar el valor de la

0,04 pendiente.
𝑠𝑥𝑦
y = 3216x + 0,0001 𝑏=
0,03 𝑠𝑥𝑥
Absorbancia

Ecuacion.1 Pendiente
0,02
1,22𝑥10−6
𝑏= = 21844
0,01 5,63𝑥10−11

0 Mediante la ecuación 2 se puede determinar el intercepto de

0,000E+00 5,000E-06 1,000E-05 1,500E-05 la gráfica.
Concentracion
A= Yprom- (b*Xprom)
Grafica 3. Curva de calibración especie desprotonada
Naranja de metilo ecuación 2. Intercepto.
2.1.4 Curva de calibración especie desprotonada longitud
de onda(510-540nm) A= 0,140-(21844* 6,28x10−6)=0,0031
A continuación, se presenta la curva de calibración
Mediante la ecuación 3 se puede determinar el r de la
concentración vs absorbancia de la especie desprotonada del
naranja de metilo a una longitud de onda de 510-540nm, a esta curva de calibración
longitud de onda se presenta el mínimo de absorbancia. 𝑆𝑥𝑦
𝑟=
√𝑆𝑥𝑥 ∗ 𝑆𝑦𝑦

ecuación 3 R de la grafica
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1,22𝑥10−6 2,57 ∗ 0,00116

𝑟= = 0,9998 𝐼𝐶 = 0,0031 ± = 0,001
√5,63𝑥10−11 ∗ 0,027 √6

Mediante la ecuación 4 se puede determinar la IC = 0,0031 ± 0,002

desviación de r
A continuación, se presenta una resumiendo todos los datos
𝑆𝑦𝑦 − 𝑏 2 ∗ 𝑆𝑥𝑥 obtenidos de la gráfica 4.
𝑆𝑟 = √ Para metro Resultado
𝑛−2
a 0,003±0,001
Ecuación 4. Desviacion r b 21844±174
𝑟2 0,9998
Sa 0,00116
0,027 − 218442 ∗ 5,63𝑥10−11 Sb 166,46
𝑆𝑟 = √ = 0,0012
6−2 Sr 0,0012

Mediante la ecuación 5 se puede determinar la desviación de Tabla 2. Resumen datos obtenidos mínimos cuadrados
la pendiente.
𝑆𝑟 2.2) Curvas de calibración a pH 3.0
Sb= A diferencia de las curvas de calibración presentadas a lo largo
√𝑠𝑥𝑥
de la sección 2.1 donde se consideraba la concentración de una
ecuación 5. Desviacion pendieren de las especies despreciable debido a ser tan baja su
0,0012 concentración. En este caso no se puede considerar lo mismo.
Sb= = 166,46 Ya que ambas especies poseen concentraciones similares. Por
√5,63𝑥10−11
lo que siguiendo las propiedades de la ley de Beer-Lambert-
Mediante la ecuación 6 se puede determinar la ecuación del Bouguer la absorbancia que presenta la solución a este pH es
intercepto. debido a la suma de las concentraciones de la especie
protonada y desprotonada del naranja de metilo. [2]
𝑋𝑝𝑟𝑜𝑚2 1
Sa=Sr√ 𝑠𝑥𝑥
+
𝑛
2.2.1) Curva de calibración longitud de onda. (510nm-
Ecuación 6. Desviacion intercepto 540nm)
A continuación, se presenta la curva de calibración de la
(6,28𝑥10−6 )2 1
Sa=0,0012√ + = 1,16𝑥10−3 concentración vs absorbancia de la especie protonada y
5,63𝑥10−11 6 desprotonada del naranja de metilo a una longitud de onda de
Del mismo modo se procede a calcular el intervalo de 510-540nm, a esta longitud de onda se presenta el máximo de
absorbancia.
confianza de la pendiente y del intercepto mediante la ecuación
7. El valor de t para 6 datos con 5 grados de libertad en un 95%
de confianza es de 2,57. [1]
𝑡 ∗ 𝑆𝑥
𝐼𝐶 = 𝑋 ±
√𝑛
ecuación 7. Intervalo de confianza

Se presenta el cálculo del Intervalo de confianza de la

pendiente
2,57 ∗ 166,46
𝐼𝐶 = 21844 ± = 392
√6
IC = 21844 ± 174

Se presenta el cálculo del intervalo de confianza del intercepto Grafica 5 Curva de calibración a (510nm-540nm)
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De los dos pH`s a los cuales se realizó las curvas de calibración

se ha escogido la más útil por cada pH, de esas dos la más útil
es la presentada en el grafio 5. Los motivos se discuten en la
2.2.2) Curva de calibración longitud de onda. (400nm- sección de discusión.
465nm)
A continuación, se presenta la curva de calibración de la 2.3) Determinación de concentracion.
concentración vs absorbancia de la especie protonada y Mediante la ecuación de la recta de la curva de calibración
desprotonada del naranja de metilo a una longitud de onda de presentada en la gráfica 5. Se puede determinar las
510-540nm, a esta longitud de onda se presenta el mínimo de concentraciones de la muestra problema con sus respectivas
absorbancia. absorbancias 0,500, 0,050 y 0,005. El cálculo se presenta a
continuación.
𝑦 = 30773𝑥 + 0,0002
0,500 = 30773𝑥 + 0,0002
0,500 − 0,0002
𝑥= = 1,62𝑥10−5 𝑀
30773
A continuación, se presenta una tabla con el resumen de los
datos obtenidos.
Absorbancia Concentración
0,500 1,62𝑥10−5
0,050 1,61𝑥10−6
0,005 1,61𝑥10−7
Tabla 4. Concentraciones determinadas mediante curva de
calibración

Grafica 6. Curva de calibración a (400nm-465nm) 3. Discusión de Resultados

De las dos curvas de calibración presentadas a pH 3.0 la más Se obtuvieron 4 curvas de calibración a pH 7.00, de estas
útil es la presentada en la gráfica 5. El motivo se explica en la curvas de calibración, se descartaron las curvas de calibración
sección de discusión. de la especie protonada del Naranja de metilo. Esto debido a
Los cálculos de mínimos cuadrados para determinar la que la concentración presente en solución se considera
pendiente, intercepto, desviación de pendiente, desviación del despreciable. Por lo que estas curvas de calibración se
intercepto se hacen mediante las ecuaciones 1, 2, 5 y 6 consideran ineficientes. Ahora bien, se poseen dos curvas de
respectivamente. El cálculo del intervalo de confianza de la calibración de la especie desprotonada del Naranja de metilo
pendiente y del intercepto se realiza mediante la ecuación 7. la mejor curva de calibración entre las dos es la que se realizó
Estos cálculos se hacen de manera sistemática. Por ende, se a la longitud de onda donde presenta mayor absorbancia, esto
toma como ejemplo los cálculos realizados en la sección 2.1.5. debido a que, si se presenta algún error sistemático, la
A continuación, se presenta una tabla con los resultados absorbancia no se verá afectada significativamente en ningún
obtenidos de los valores de mínimos cuadrados de la gráfica 5. punto, también se observará constante la absorbancia a lo largo
de la banda de longitudes de onda y se aumenta la sensibilidad
Parámetro Resultado del análisis. [3]
PromX 6,991E-06 A pH 3.00 se obtuvieron 2 curvas de calibración, de la cual la
PromY 0,215
más útil es la que se realizó a la longitud de onda donde
sxx 6,986E-11
presenta una mayor absorbancia. El por que de esto ya se
syy 0,066
sxy 2,150E-06 explico previamente. De estas dos curvas de calibración
b 30773±247 resultantes se debe escoger la mejor de ellas. Para ello nos
a 0,0002±0,0002 podemos basar en la gráfica 7. Donde la línea naranja
R 0,9998 representa la curva de calibración más útil a pH 7.00 y la línea
SR 0,0019 azul la curva de calibración más útil pH 3.00. Se evidencia de
Sb 236,291 que la curva de calibración que posee una mayor absorbancia
Sa 0,0018 es la obtenida a pH 3.00 por lo que según la ley de Beer se
Tabla 3. Resumen datos obtenidos mínimos cuadrados puede afirmar que esta es la curva de calibración más adecuada
para este análisis
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Curvas de calibracion
0,4
0,35
0,3
Absorbancia
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,000005 0,00001 0,000015
Concentracion
Grafica 7. Curvas de calibración a pH 3.00 y pH 7.00
El motivo por el cual varia el máximo de la longitud de onda
en función del pH de un mismo compuesto en cuestión
(Naranja de metilo) es debido al efecto de este sobre la
ionización del compuesto. Por ejemplo, a pH 3.00 se
encuentran a la misma concentración las dos especies del
naranja de metilo (Protonado y desprotonado) Estas dos
especies presentan su máxima absorbancia a una longitud
determinada. Sin embargo, a pH 7.00 solo se considera que la
absorbancia presentada es debido a la concentración de la
especie desprotonada, la cual presenta su máxima absorbancia
a otra longitud de onda con respecto a la de pH 3.00
4. Preguntas y respuestas
a) ¿Por qué se escoge el pico de máxima
absorbancia para hacer el análisis?
R// Se debe escoger el pico de máxima absorbancia
ya que, si se presenta algún error sistemático, la
absorbancia no se verá afectada significativamente en
ningún punto, también se observará constante la
absorbancia a lo lago de la banda de longitudes de
onda y se aumenta la sensibilidad del análisis [3]
b) ¿Cuáles son los posibles interferentes en las
determinaciones espectrofotométricas?
R//Las posibles interferencias se puede presentar por
las asociaciones o disociaciones del analito en
solución, se puede presentar reacciones del analito
con el solvente o la presencia de otros componentes
en la muestra que pueden absorber luz incidente [4]
c) ¿Qué efecto tiene el pH en la determinación
espectrofotométrica de la concentración del analito?
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R// Lo ideal es que el pH se mantenga constante más que
todo si el analito interviene en un equlibrio, ya que se puede
perder la linealidad en las gráficas, lo cual indicaría que la
absorbancia tenga variaciones con respecto a la longitud de
onda [4]
d) ¿Qué es un efecto batocrómico e hipsocrómico?
Batocrómico: Se da cuando hay un incremento en la
longitud de onda para que haya un máximo de absorbancia.
Es por esto por lo que algunos iones o moléculas que no
deberían presentar coloración la presentan
•Hipsocrómico: Se da cuando hay un decrecimiento en la
longitud de onda [5]
e) ¿Qué se debe tener en cuenta para disminuir dichas
interferencias en la exactitud de la determinación?
R// Para disminuir las interferencias lo ideal sería preparar
un blanco, controlar el pH de disolución, la adición de
agentes enmascarantes, preparar también una serie de
patrones para realizar una curva de calibrado [3]
f) ¿Cuáles son las limitaciones de la ley de Beer?
R// Una de las limitaciones de la ley de Beer en trabajar a
altas concentraciones ya que la recta se deja de comportar
ideal mente, por ejemplo, Si la concentración es mayor a 0,01
M se pierde la relación lineal de la absorbancia y la
concentración, ya que las moléculas muy próximas entre si
comienzan a interferir entre ellas en el proceso de absorción
de energía [4]
5) Conclusiones
La concentración y la absorbancia, depende del pH ya que
dependiendo de las especies protonadas y desprotonadas se
va a determinar la concentración en solución y dependiendo
de la concentración habrá una mayor o menor absorbancia
Las concentraciones de las muestras problemas se deben
calcular con la ecuación de la recta donde se haya observado
una mayor absorbancia ya que esto disminuye las posibles
interferencias que puedan existir en el análisis
6) Referencias
[1] Harris, D. Estadística en: Análisis Químico
Cuantitativo EDITORIAL REVERTÉ; Barcelona. 2003.
Tercera edición. Pag 66
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[2] Harris, D. aplicaciones de la espectrofotometría en:

Análisis Químico Cuantitativo EDITORIAL REVERTÉ;
Barcelona. 2003. Tercera edición. Pag 434oye

[3] Harris, D. Fundamentos de espectrofotometría en:

Análisis Químico Cuantitativo EDITORIAL REVERTÉ;
Barcelona. 2003. Tercera edición. Pag 407-430

[4] Villegas, W. Acereto, P. Vargas, M. Espectroscopia UV-

Visible molecular en: Análisis UV-Visible. EDITORIAL DE
LA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE YUCATAN;
México. 2006. Primera edición. Cap 4. Pag 16 y 17

[5] D. Olsen, E. Espectrofotometría Ultravioleta visible en:

Métodos Ópticos de Análisis. EDITORIAL REVERTE, S.A.
Barcelona. 1990. Pag 95.