Instituto Tecnológico de Durango

Ingeniería Bioquímica

Análisis Instrumental

Graciela Enríquez Flores

Practica No. 1
Determinación de la
longitud de onda de
máxima absorbancia
para un analito
colorido

Ana Karen Gallardo Hernández 22040076

Noelia Michelle Graciano Domínguez 22040081
Sonia Lorena García Espinoza 22040078

Victoria de Durango, Durango, México, 11 de septiembre de

2023
 Introducción

La mayoría de los problemas analíticos reales comienzan con una compleja mezcla a partir
de la cual es necesario aislar, identificar y cuantificar uno o más componentes de esta.
Se pueden plantear las siguientes cuestiones: una, de carácter cualitativo (¿de qué
componente se trata?), y otra de carácter cuantitativo (¿cuánto hay de ese componente?).
Para ello, se puede utilizar el método instrumental de análisis, como es la espectrofotometría
para medir la absorción de radiación ultravioleta y visible que interactúa con la materia
(átomos y moléculas), la misma es considerada una técnica cualitativa y cuantitativa
basándose en la medición del color o de la longitud de onda de una radiación e intensidad
de esta.Se hará una descripción del método espectrofotométrico para dar al lector una idea
del empleo de este y su utilidad en los ensayos de sustancias. DAMA. (1997).

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la

detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado
de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos fisicoquímicos de la
espectrofotometría son relativamente sencillos. Las moléculas pueden absorber energía
luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se inicien ciclos
vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La
Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles
tiene una energía. DAMA. (1997).

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía

interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la fotosíntesis en plantas
y bacterias. Cuando la luz considerada como energía es absorbida por una molécula se
origina un salto desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado de mayor
energía (estado excitado), E2. Y sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado
excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue
del resto de moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda
presenta una molécula esto es, su espectro de absorción constituye una seña de identidad
de esta. Por último, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado
energético fundamental.

En esta práctica se darán a conocer las

características generales y
conceptos relacionados con la
espectrofotometría. A continuación, y tras
la explicación del funcionamiento del
espectrofotómetro se hará
espectros de absorción con el fin de
determinar la longitud de onda
donde la muestra presenta la máxima
absorción, y tras realizar las
correspondientes rectas de calibrado se cuantificarán las
concentraciones de distintas biomoléculas. Flores Mariños, B. M. (2011).
 Objetivo

Determinar la absorbancia máxima de una solución colorida a una concentración indicada.

Materiales

➢ Sulfato cúprico(sustancia color verde agua)

➢ Matraz aforado
➢ Agua destilada
➢ Celda
➢ Pipeta
➢ Espectrofotómetro

Procedimiento

1. Calculamos sulfato cúprico a 0.05N aplicando y despejando la fórmula de Normalidad

2. Pesamos el resultado que fue 0.3121 de sulfato cúprico
3. Disolvimos la en agua destilada y comenzamos a agitar para una mayor
concentración
4. Con la pipeta medimos y tomamos 1.4 de solución y la pasamos a colocar en una
celda cuidando en no tocar la parte de abajo
5. La introducimos en un espectrofotómetro y por último medimos su absorbancia en
una longitud de onda de 400 a 700nm
6. Al introducir una longitud de onda diferente se debe calibrar con una celda con agua
destilada, cuando este en calibración se coloca la celda con el sulfato cúprico
nuevamente.

Resultados
Tabla de absorbancia
Longitud de onda Absorbancia
400 -0.008 A
430 0.017 A
460 -0.009 A
490 -0.008 A
520 0.015 A
550 0.019 A
580 0.027 A
610 0.042 A
640 0.066 A
670 0.111 A
700 0.051 A
 Grafica
Determinar el punto de máxima absorbancia

valores Y (Adsorbancia )
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
-0.02 0 100 200 300 400 500 600 700 800

Fotos de la práctica

Figura 1.1 Figura 1.2

Figura 1.3
 Discusiones
En las evidencias fotográficas podemos mostrar algo del proceso que llevamos acabo para
poder determinar la longitud de onda que se nos presentó a partir de nuestra muestra de
sulfato cúprico, y fue así que cada vez que era nuestro turno medir una nueva cantidad
nuestros datos se iban complementando, también es importante decir que al equipo nos
tocó calibrar el espectrofotómetro con el blanco y esta parte es muy interesante ya que es
bueno saber que es lo que se debe de hacer cada vez que queramos medir una onda con
diferente medición de nanómetros y comenzar de ceros, hacer desde el pasaje hasta vertirlo
en la celda es un proceso muy interesante, para el equipo fue de buen conocimiento y trabajo
en equipo.

Conclusiones

Sonia: Llegue a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico indirecto

porque se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones, es de
gran utilidad en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema,
ya que las valoraciones fotométricas han favorecido el desarrollo y han proporcionado una
serie de ventajas como son exactitud y precisión, unido a la simplicidad de la metodología.

Noelia: Llegue a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico indirecto

porque se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de
gran utilidad en la actualidad para la identificación de un analito en una muestra problema.

Karen: En esta práctica pudimos obtener más conocimiento sobre los materiales del
laboratorio, y refrescar nuestro conocimiento para hacer los cálculos indicados, también
aprendimos que la Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada
uno de los cuáles tiene una energía, el máximo de absorbancia obtenido en el espectro de
absorción de un analito, nos dará la longitud de onda que proporciona la mayor sensibilidad
posible.
 Referencias bibliográficas

1. DAMA. (1997). Resolución 1074 . Bogotá D.C.

2. Flores Mariños, B. M. (2011). Diseño y validación de un método de análisis por
espectrofotometría UV-vis para zinc (II) y mercurio (III) en muestras acuosas.
Pontificia Universidad Católica del Perú .
3. Kalpakjian, Serope. Schmid, Steven. Manufactura, ingeniería y tecnología. México,
2002. 4ta. Ed. Prentice Hall
4. Yuan, D., Fu, D., Wang, R., & Yuan, J. (2008). Rapid determination of(VI) in electroplating
waste water by use of a spectrophotometric flow injection
system. Spectrochimica , 276-279