PRÁCTICA 1: Espectrofotometría molecular

1.Objetivos

Conocer la base teórica y el uso del espectrofotómetro para obtener espectros de absorción
de compuestos. Saber realizar medidas cuantitativas de absorbancia para la determinación de
concentraciones de sustancias en mezclas: determinación del coeficiente de absorción molar.

2. Introducción

La espectrofotometría es una técnica experimental muy usada hoy en día para la detección
específica de moléculas. Se caracteriza por su sencillez de manejo, su precisión, sensibilidad y
su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y
estados de agregación (sólido, líquido, gas).

Máquina muy similar a la utilizada para realizar la espectrofotometría

Fundamentos físico-químicos

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.
Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la
fotosíntesis en plantas y bacterias.

La luz es una radiación electromagnética formada por fotones cuya energía, Ef, viene dada por
la siguiente expresión:

Ef = h = h c 

donde c es la velocidad de la luz (2.999 108 m/s) ,  la frecuencia,  la longitud de onda y h la

constante de Planck (6.6 10-34 Js).

A la zona del espectro electromagnético comprendida entre los 5*1014 s-1 y los 1017 s-1 se le
denomina zona ultravioleta-visible, siendo la zona del visible la de menor frecuencia, la que
está comprendida entre los 800 y los 450 nm, aproximadamente.
Cuando una sustancia química absorbe un fotón de luz en la zona espectral UV-visible se
excita, pasando de un orbital de energía fundamental a otro excitado y almacenando, por
tanto, la energía de ese fotón.

Esquema del funcionamiento de la espectrofotometría

En esta práctica se utiliza un espectrofotómetro de doble rayo que permite medir en la zona
UV-visible. El instrumento consta de dos lámparas (deuterio y tungsteno) que permite obtener
un espectro de emisión continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda (UV de 200 a
350 nm, visible de 350 a 900 nm) y de un monocromador (red de difracción) que actúa como
filtro óptico transmitiendo un haz de luz de longitud de onda fija  e intensidad I0. La radiación
seleccionada en el monocromador se bifurca, a través de un dispositivo óptico, en dos rayos
que incidirán en la cubeta de medida y la cubeta de referencia. A partir de la señal recibida en
los detectores 1 y 2 se puede obtener información del espectro UV-vis de la sustancia disuelta
en la cubeta de medida.

3. Material y reactivos

o Pesa sustancias
o Espátula
o Matraz aforado de 250 ml
o 5 Matraces aforados de 50 ml
o Pipeta graduada de 5 ml
o Vaso de precipitados de 100 ml
o Vaso de precipitados de 50 ml
o Pipetas Pasteur de plástico
o Cubetas de metacrilato para espectrofotómetro de 1.00 cm de paso óptico
o Aspirador para pipetas
o Balanza
o Espectrofotómetro
 Material usado en la práctica

4. Reactivos y seguridad

Reactivo: Permanganato R: 8-22-50/53

potásico S: 2-60-61
Fórmula: KMnO4
Peso molecular: 158.03 g/mol
CAS: 7722-64-7

5. Procedimiento experimental

Preparación de la disolución madre

Calculamos la cantidad de KMnO4 necesaria para preparar 250ml de una disolución en agua
destilada de una concentración aproximada de 0’005 M:
0′ 005𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 158′ 04𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4
250 ml KmnO4 1000 𝑚𝑙 1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4
= 0’197 g KMnO4

Concentración real:
1 𝑚𝑜𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
0’29 g KMnO4158′ 04𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 25𝑙 = 0’00506 M

Preparación de disoluciones intermedias

Hemos preparado, a partir de la dio inicial, otras 5 disoluciones intermedias de

concentraciones molares aproximadas:
 1∗10−4 1000 𝑚𝑙
50 ml 1000 𝑚𝑙 0′ 00506 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4
= 0’988 ml KMnO4
1∗10−4 1000 𝑚𝑙
50 ml 1000 𝑚𝑙 0′ 00506 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4
= 1’976 ml KMnO4
1∗10−4 1000 𝑚𝑙
50 ml = 2’964 ml KMnO4
1000 𝑚𝑙 0′ 00506 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4
1∗10−4 1000 𝑚𝑙
50 ml 1000 𝑚𝑙 0′ 00506 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4
= 3’953 ml KMnO4
1∗10−4 1000 𝑚𝑙
50 ml 1000 𝑚𝑙 0′ 00506 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4
= 4’941 ml KMnO4

Las 5 disoluciones preparadas, numeradas de A a E

Recálculos concentración molar:

0′ 00506𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
1 ml 1000 𝑚𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 05𝑙
= 1’012*10-4 M

0′ 00506𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
2 ml 1000 𝑚𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 05𝑙
= 2’024*10-4 M

0′ 00506𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
3 ml 1000 𝑚𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 05𝑙
= 3’036*10-4 M

0′ 00506𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
4 ml 1000 𝑚𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 05𝑙
= 4’048*10-4 M

0′ 00506𝑚𝑜𝑙𝑠 𝐾𝑀𝑛𝑂4 1
5 ml = 5’06*10-4 M
1000 𝑚𝑙 𝐾𝑀𝑛𝑂4 0′ 05𝑙
Registro de un espectro de absorción

Colocamos las muestras/disoluciones preparadas en cubetas, numerándolas para saber

identificarlas.

Cubeta de metacrilato

Cogemos todas las cubetas con las disoluciones y una de referencia que contenga agua
destilada. Realizamos el espectro de absorción de cada disolución entre 750 nm y 400 nm.

Medidas de absorbancia a max:

A→ 0’1891

B→ 0’4617

C→ 0’7994

D→ 1’0624

E→ 1’3741

Luego, con la muestra problema proporcionada por la profesora, realizamos una lectura de la
absorbancia de esta disolución a max:

Absorbancia muestra problema: 1’1095 mDO

6. Resultados

1. Represente Absorbancia frente a longitud de onda () para la disolución 3·10-4 M de

permanganato ¿Cual es el valor de la longitud de onda para la que se obtiene la máxima
absorción (max) de las disoluciones de permanganato?
 Absorbancia-Longitud de onda
800

700

600
Longitud de onda

500

400

300

200

100

0
-0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
Absorbancia

El valor de longitud de onda para la que se obtiene la máxima absorción es 545 nm y 545’2nm,
donde el valor de la absorbancia es de 1’0423.

2. Construya una tabla en la que se recojan los valores de concentración de las disoluciones
de permanganato preparadas y sus absorbancias a max. Realice la representación de
Lambert-Beer con los datos anteriores. En el eje de ordenadas (Y) se representan los valores
de la absorbancia y en el eje de abscisas (X) se representan los valores de la concentración.
Con la ayuda de una hoja de cálculo, realice la representación gráfica y el ajuste de los
resultados a la ecuación de una línea recta. El valor calculado de la pendiente de la recta
debe coincidir con max l. Puesto que l=1 cm, el valor calculado de la pendiente es el
coeficiente de absorción molar buscado6 . Compare los valores obtenidos de max y de
max para el permanganato con valores bibliográficos (Handbooks, bases de datos o tablas
de libros de texto).

VALOR DE ABSORBANCIA A max (525’20

DISOLUCIÓN (M)
nm)
1,01E-04 0,1891
2,02E-04 0,4617
3,04E-04 0,7994
4,05E-04 1,0624
5,06E-04 1,3741
 REPRESENTACIÓN CONCENTRACIÓN-
ABSORBANCIA
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0,000E+00 1,000E-04 2,000E-04 3,000E-04 4,000E-04 5,000E-04 6,000E-04

3. ¿Cuál es la concentración de la disolución problema de permanganato potásico?

Usaremos la siguiente ecuación:

A = *c*l

donde  es el llamado coeficiente de extinción molar, coeficiente de absorción molar o

absortividad molar, c es la concentración molar y l el paso óptico

c = A  (* l)

c = 1’1095 mDO / (2235 * 1 cm) = 4’96*10-4 M

7. Cuestiones

1. Si el permanganato muestra un color púrpura ¿de qué color es la radiación

electromagnética absorbida que produce los tránsitos electrónicos?

La radiación electromagnética absorbida es de todos los colores excepto el púrpura. Esto

quiere decir que los tránsitos electrónicos son producidos por radiación electromagnética de
una longitud de onda que la molécula absorba, y la radiación que no absorbe a nivel molecular
es emitida o reflejada hacia el espectador, y es lo que conocemos como el color.

2. ¿Por qué debe registrar la absorción de la referencia (“blanco”) si quiere realizar una
buena medida cuantitativa de la absorbancia de un compuesto en disolución?

Porque sirve para indicarle al instrumento que la radiación que el disolvente puede absorber a
esa determinada longitud de onda es cero, es decir, que no la tenga en cuenta, puesto que es
el mismo disolvente que se utiliza en la muestra, y si el equipo lo tuviera en cuenta, la medida
de la absorbancia de la muestra no sería en realidad solamente la absorbancia de la muestra,
sería la de la muestra y la del disolvente.
3. ¿Por qué se elige siempre la longitud de onda de máxima absorción espectral para realizar
las medidas cuantitativas para la determinación de las concentraciones del soluto?

Si se utilizara una longitud de onda de poca absorción de una sustancia, independientemente

de la concentración de la sustancia, en todas las mediciones la absorción sería baja, y nos se
podría aplicar la ley de Lambert-Beer. Por el contrario, si se elige la máxima absorción, se ve
claramente la diferencia de absorción de una muestra en función de la concentración,
pudiéndose aplicar la ley de Beer, que es lo que interesa en el análisis cuantitativo.

4. La ley de Lambert-Beer establece que la variación de la absorbancia con la concentración

es una relación lineal ¿Cómo es la relación entre la transmitancia y la concentración?
Establece la ecuación matemática que relaciona ambas magnitudes.
5. Un procedimiento habitual para determinar Mn en diversos tipos de muestras
ambientales, en las que es un componente minoritario, consiste en provocar la oxidación en
medio ácido del Mn2+ a permanganato, MnO4 - , con peryodato IO4 - que se reduce a
yodato, IO3 - , según la reacción: 2 Mn2+ + 5 IO4 - + 3 H2O = 2 MnO4 - + 5 IO3 - + 6 H+

Una muestra de 0.100 g fue analizada por dicho procedimiento; se disolvió, se oxidó y se
diluyó a 100 ml y el valor de la absorbancia de esta disolución a 520 nm fue 0.520. Utiliza el
valor del coeficiente de absorción molar determinado por ti en esta práctica y calcula cual es
la concentración del manganeso en la muestra problema (% en peso).

8. Conclusiones

En esta práctica hemos aprendido a utilizar un espectrofotómetro y su complejo

funcionamiento.

También hemos realizado medidad cuantitativas de absorbancia para la determinación de

concentraciones de sustancias en mezclas, es decir, determinar el coeficiente de absorción
molar.