INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

MÉTODOS CUANTITATIVOS
PRÁCTICA 13 “Análisis cualitativo y cuantitativo de uno y
multicomponentes de compuestos orgánicos e inorgánicos mediante
espectrofotometría visible”

Profesores:
• Dra. Velia Palmiro Ascencio Rasgado GRUPO:3BM2
• Dr. Juan Ramírez Balderas
Equipo 5:
• Pérez Guerrero Juan Daniel
• Pérez Reyes Erick Maximiliano
• Porcayo Marcos Marisol
• Reséndiz Pineda Dulce Alba
• Teodosio Jiménez Juliana
INTRODUCCIÓN
La espectroscopia es una técnica analítica utilizada en
diversas áreas de la ciencia para estudiar la interacción de la
luz con la materia y de la cual consiste en la medición de
análisis de la radiación electromagnética emitida, absorbida
o dispersada por una muestra.

Por otro lado, la espectrofotometría, es una técnica

específica dentro de la espectrometría que se centra en la
medición de la cantidad de luz absorbida por una muestra
en diferentes longitudes de ondas.
 Radiación
electromagnética
Es una forma de energía que se propaga o transmite a través del
espacio en forma de ondas electromagnéticas y del cual abarca un
amplio rango de longitudes de onda y frecuencia conocido como el
espectro electromagnético.
Espectrofotometría
Transmitancia “Magnitud que expresa la cantidad de luz que atravesó”
𝑃 P=potencial del haz transmitido ( cantidad de luz que
𝑇= atravesó)
𝑃0
=Potencial del haz incidente ( cantidad de luz que se hizo
incidir o entró)

Absorbancia “Medir que tanto se absorbe”

T=transmitancia
A
Ley de Beer-Lambert “Relación matemática entre la concentración de una
sustancia en una muestra y la absorción de luz por esa sustancia”
=constante que depende del soluto que
A se esté usando.
b= longitud que atraviesa la luz.
y= m x c= concentración
Abs

0.5

0.25

C
0 .1 .2 .3
 Desarrollo
experimental
Desarrollo experimental
Obtención del espectro de absorción de los colorantes

Preparar una serie de disoluciones Preparar una serie de disoluciones

de 10 mL de VB cuyas de 10 mL de AM cuyas
concentraciones sean de 10, 15, concentraciones sean de 2, 4, 6, 8
20, 25 y 30 ppm. y 10 ppm.

Obtener el espectro de absorción

Obtener el espectro de absorción de
de la disolución de 6 ppm de
la disolución de 15 ppm de VB,
AM, realizando un barrido de
realizando un barrido de longitud de
longitud de onda en el intervalo de
onda en el intervalo de 400 a 500 nm.
450 a 550 nm. Trazar el diagrama
Trazar el diagrama de absorbancia y
de absorbancia y obtener la
obtener la longitud de onda máxima
longitud de onda máxima ​.
Desarrollo experimental
Obtención de la curva de calibración de cada uno de los colorantes

A las dos longitudes de onda

máxima, leer la absorbancia para la
serie de disoluciones de cada uno de
los colorantes
 Datos
experimentales
Longitud de onda máxima para cada uno de los colorantes

Colorante Longitud de onda máxima [nm]

Anaranjado de metilo 508
Verde de bromocresol 442

Figura 1. Curva de anaranjado de metilo

Tabla 1. Absorbancias experimentales para una serie de
disoluciones de verde de bromocresol en HCl 0.1M

[ppm] =508 =442

10 0.097 0.275
15 0.151 0.429
20 0.180 0.507
25 0.220 0.638
30 0.304 0.906

Tabla 2. Absorbancias experimentales para una serie de

disoluciones de Anaranjado de metilo en HCl 0.1M

[ppm] =508 =442

2 0.294 0.054
4 0.526 0.106
6 0.735 0.156
8 0.997 0.205
10 1.271 0.252
Memoria de
cálculo
 Concentración de las disoluciones de verde de bromocresol
de ppm a

PM de VB = 698.01
10 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.00001433
𝐿 1000 𝑚𝑔 698.01 𝑔 𝐿

15 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000214
𝐿 1000 𝑚𝑔 698.01 𝑔 𝐿

20 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000286
𝐿 1000 𝑚𝑔 698.01 𝑔 𝐿

25 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000358
𝐿 1000 𝑚𝑔 698.01 𝑔 𝐿

30 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000429
𝐿 1000 𝑚𝑔 698.01 𝑔 𝐿
 Concentración de las disoluciones de anaranjado de metilo
de ppm a

PM de AM = 327.33
2 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.00000611
𝐿 1000 𝑚𝑔 327.33 𝑔 𝐿

4 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000122
𝐿 1000 𝑚𝑔 327.33 𝑔 𝐿

6 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000183
𝐿 1000 𝑚𝑔 327.33 𝑔 𝐿

8 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000244
𝐿 1000 𝑚𝑔 327.33 𝑔 𝐿

10 𝑚𝑔 1𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
൬ ൰൬ ൰൬ ൰= 0.0000305
𝐿 1000 𝑚𝑔 327.33 𝑔 𝐿
Curva de calibración para el verde de bromocresol
usando la concentración de mol/L
Curva de calibración para el anaranjado de metilo
usando la concentración de mol/L
F) Calcular los coeficientes de absortividad molar en
L/ (cm⋅mol) del verde de bromocresol y el anaranjado de metilo
a las dos longitudes de onda máximas
Absorbancia de la mezcla problema a cada longitud de onda
Absorbancia
0.785
0.903

Ecuación 1

Ecuación 2
 Sustituyendo valores en las ecuaciones
• Ecuación 1

• Ecuación 2

Solución

− 13235.479
𝐶 𝐴𝑀 =
−724312420.6
Concentración de anaranjado de metilo de la mezcla problema

Concentración de verde de bromocresol de la mezcla problema

 Conclusiones
El método de adición de absortividades y la Ley de Beer permite
determinar las concentraciones y coeficientes de absortividad de
los componentes en una mezcla a cierta longitud de onda. Es por
esto que, según estas leyes, en un sistema de 2 componentes
logramos calcular las concentraciones exactas de los indicadores
anaranjado de metilo y verde de bromocresol.
Nuestros coeficientes de absortividad para los componentes
estudiados fueron los siguientes valores: E1 λ442 = 20513
L/mol*cm, E2 λ442= 8249.9 L/mol*cm, E1 λ508= 6736
L/mol*cm, E2 λ508= 38019 L/mol*cm.
La concentración para el verde de bromocresol es 21.6 ppm ó
3.09x10^-5 mol/L y para el anaranjado de metilo la
concentración es de 5.98 ppm ó 1.8273x10^-5. mol/L.
 Referencias
bibliográficas