Universidad de Los Andes

Facultad de Ingeniería
Escuela de Ingeniería Química
Departamento de Química Industrial y Aplicada
Laboratorio de Análisis Instrumental

Espectrometría de absorción de Luz Visible para la Determinación

de Soluciones Acuosas de Cromo
Lobo Abel, Noguera Yoselin, Zambrano Jonathan

Fecha de Realización de la Práctica: 28-01-2016.

Fecha de Entrega del Informe: 04-02-2016.

Resumen

Los métodos ópticos se fundamentan en varios fenómenos, de los cuales se

destacan la emisión, absorción y difracción de la radiación electromagnética. Uno
de estos métodos es la espectrometría por absorción molecular en las regiones
ultravioleta y visible del espectro, el cual se usa ampliamente en la determinación
cuantitativa de una gran cantidad de especies inorgánicas, orgánicas y biológicas.
En este trabajo experimental, se determinó la concentración de una muestra
problema de cromo, mediante las mediciones de absorbancia de distintas
longitudes de onda de una muestra de nitrato de cromo (III), de concentración
conocida, que permitió la selección de ciertas longitudes de onda, que
posteriormente, permitieron la medición de absorbancia de la misma muestra pero
a distintas concentraciones, y con ello, construir curvas de calibración, de
variación de absorbancia con la concentración para cada longitud de onda.
Seleccionando, la que mejor se ajusta a la Ley de Lambert-Beer (comportamiento
lineal), siendo esta 560 ƞm. A partir de esta longitud de onda se obtuvo que la
concentración de la muestra problema es de 0,038287±0,00886014 M.

Introducción

La espectroscopia es una técnica analítica que se basa en la capacidad de las

moléculas para absorber radiaciones de luz visible, en donde las longitudes de
ondas de las radiaciones dependen de la estructura atómica y del sistema en el
que se encuentran. [1]
 La aplicabilidad del método radica en la elevada sensibilidad y facilidad de la
medida a la hora de los análisis cuantitativos de diferentes sistemas. Su aplicación
es común en la identificación de los grupos funcionales de una molécula, así,
como en la determinación cuantitativa de compuestos que contienen grupos
absorbentes.

Es importante acotar, que las moléculas pueden absorber energía luminosa y

almacenarla en forma de energía interna. Durante el proceso de absorción de luz
por parte de las moléculas se origina un salto desde el estado energético basal o
fundamental a un estado de mayor energía. Cada molécula tiene una diversidad
de estados excitados que las distinguen de las demás, por ende, la absorción a
distintas longitudes de onda que presenta una molécula, contribuye a la definición
de las características de la misma. [2]

Continuando en el mismo orden de ideas, cuando un rayo de luz de una

determinada longitud de onda de intensidad incide perpendicularmente sobre una
determinada disolución de un compuesto químico que absorbe luz, el compuesto
absorberá una parte de la radiación mientras que dejara pasar la cantidad de luz
restante. [1]. La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa
la luz a través de la solución del analito y de la concentración de éste.

De tal forma, la espectrometría por absorción molecular se basa en la

medición de la transmitancia (T), la cual expresa la cantidad de energía que
atraviesa un cuerpo en una unidad de tiempo, o de la absorbancia (A) relacionada
a la intensidad de la luz con una longitud de onda específica tras haber atravesado
una muestra y antes de hacerlo (intensidad de la luz incidente), de soluciones que
están en celdas transparentes que tienen una longitud de trayectoria de b cm.

Asimismo, se tiene que la Ley de Lambert-Beer expresa la relación que

existe entre la absorbancia de luz monocromática y la concentración del analito en
una disolución; esta ley es ampliamente válida para soluciones diluidas; ya que
para las concentraciones altas, el coeficiente de extinción molar (εM) varía con la
concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de
moléculas, cambios del medio, entre otros. [2].
 Normalmente, la concentración de un analito absorbente se relaciona en
forma lineal con la absorbancia según la ley de Beer, como se muestra a
continuación:

A=ε.b.C.

En esta ecuación, se demuestra que la absorbancia es directamente

proporcional a una constante que es una propiedad de la sustancia por si misma
así como de la longitud de onda, denominada coeficiente de extinción molar o
𝐿
absortividad molar (ε) cuyas unidades son . La longitud del paso óptico a
𝑚𝑜𝑙×𝑐𝑚

través del cual la luz viaja hacia la muestra (b) expresada en cm. Y la
concentración de la sustancia que absorbe la luz (C) con unidades de mol/L. [2].

En esta sesión práctica se tuvo como objetivos determinar la longitud de onda

óptima para el análisis por espectrometría del cromo, determinar la concentración
de cromo en una solución problema mediante análisis espectro métrico de
absorción de luz visible, para comprobar la aplicabilidad de la Ley de Lambert-
Beer y así, describir la variación de la absorbancia en disoluciones de iones
metálicos.

Materiales y métodos

Para la determinación cuantitativa de Absorbancia (A) se utilizó un

espectrofotómetro Spectronic 20 analogico (Milton Roy Company) con una
precisión de ± 0,01, el mismo consiste en un compartimiento de muestras para
cubetas porta muestras.

I) Determinación del Espectro de Absorción de Luz Visible de una

solución de Nitrato de Cromo III.

Una vez calibrado el equipo, se determinó la absorbancia de una solución de

nitrato de cromo 0,02 M para distintas longitudes de onda (λ) (400, 420, 440, 460,
480, 500, 520, 540, 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680) ƞm, para así determinar el
espectro de absorción de luz visible.
 II) Construcción de la Curva de Calibración para la Determinación
de la Concentración de Cromo.

Se preparó soluciones de nitrato de cromo a distintas concentraciones,

(0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0,05) M, posteriormente, se determinaron las absorbancias
a seis longitudes de ondas distintas seleccionadas de la primera experiencia, para
de esta manera poder determinar la curva de calibración y posteriormente la
concentración de la muestra problema.

III) Determinación de la Concentración de Cromo III en una Muestra

Problema.

De forma similar al procedimiento anterior, se determinó la absorbancia de

una muestra problema para las seis longitudes de onda seleccionadas en la
construcción de la curva de calibración, con el fin de determinar la concentración
de la misma.

Resultados y discusiones

En la primera experiencia se preparó una solución de nitrato de cromo (III) al

0,02 M, el cromo es un metal de transición, y en este tipo de metales la absorción
de la radiación resulta de transiciones electrónicas entre los niveles de energía de
los orbitales d. La solución preparada absorbió radiación a diferentes longitudes de
onda obteniéndose un espectro de absorción de luz visible representado en la
Figura 1, como se muestra a continuación:
 0.4

0.35

0.3

0.25
Absorbancia

0.2

0.15

0.1

0.05

0
300 350 400 450 500 550 600 650 700
λ(ƞm)

Figura 1. Espectro de absorción de luz visible para una solución de nitrato de

cromo (III) a 0,02 M.

En la Figura 1, se demuestra la variación y dependencia de la absorbancia con

respecto a la longitud de onda, esto se debe a que cada átomo absorbe solo ciertas
longitudes de onda características del mismo y está relacionada con las
transiciones electrónicas que ocurren debido a la energía asociada a los fotones.
Por consiguiente, se puede apreciar puntos de máxima absorción para las
longitudes de 400 ƞm, 420 ƞm, 560 ƞm y 580 ƞm y punto de mínima absorción para
las longitudes 480 ƞm, 660 ƞm y 680 ƞm.

Seguidamente, con el espectro de absorción (Figura 1) se tomaron dos puntos

de máxima absorbancia correspondientes a longitudes de onda de 420 ƞm y 560
ƞm, dos puntos de absorbancia intermedia de 440 ƞm y 520 ƞm y finalmente, dos
puntos de mínima absorbancia de 480 ƞm y 660 ƞm, seleccionado los puntos, se
construyó las curvas de calibración representando la variación de la absorbancia
en función de la concentración, Se obtuvieron las siguientes curvas:
 0.9
λ=420
y = 15,67x + 0,0041
0.8 R² = 0,9867

y = 14,07x - 0,0297
0.7
R² = 0,9963 λ=440

0.6 y = 13.99x - 0.0821

R² = 0.859
Absorbancia

0.5 λ=480

y = 8.7x - 0.0278
0.4 R² = 0.9963
λ=520
0.3 y = 4.8x - 0.003
R² = 0.9907
0.2
λ=560

0.1 y = 4.38x - 0.037

R² = 0.9822
0
λ=660
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
Concentración [Cr (III)] (M)

Figura 2. Curvas de calibración absorbancia-concentración para las longitudes de

onda (λ) seleccionadas.

En la Figura 2, se aprecian las diferentes curvas de calibración, para cada

longitud de onda seleccionada, las cuales presentan un comportamiento casi
lineal, ya que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del
analito, es decir, que esta aumenta a medida que se incrementa la concentración
de analito, coincidiendo así, con la Ley de Lambert Beer. Se consiguió la ecuación
de la recta para cada una de las curvas, a través de una regresión lineal de los
datos obtenidos en las mediciones experimentales, estas ecuaciones son
mostradas en la Figura 2, en las cuales se puede distinguir que las pendientes de
las rectas varían con la longitud de onda, se tiene entonces que para las
longitudes de onda correspondientes a los máximos de absorbancia (420 ƞm y
560 ƞm) la pendiente de la recta es mayor en comparación con las otras
longitudes de onda. Esto sucede debido a que el paso óptico es el mismo, y la
 absortividad molar es una constante que depende del compuesto y de la longitud
de onda utilizada. Además, las longitudes de ondas son características de la
naturaleza del compuesto y no dependen de la cantidad presente. No obstante, la
cantidad de radiación absorbida a dichas longitudes de onda si es función de la
proporción del analito en la solución (concentración existente).

De esta manera, se encontró que las curvas de calibración correspondientes a

las longitudes de onda de 520 ƞm y 560 ƞm, son las que mejor se ajustan a una
línea recta con un valor de correlación lineal R2 de 0,9963.

En la tercera experiencia se determinó la concentración de una solución

problema de cromo, y de las dos longitudes de onda que mejor se ajustaron, se
eligió la curva de calibración de longitud de onda 560 ƞm. La concentración hallada
fue de 0,038287±0,00886014 M.

En la Tabla 1. se muestra el resultado de la longitud de onda que mejor se

ajustó para cada grupo del laboratorio, siendo este el mejor ajuste al
comportamiento lineal definido por la ley de Beer:

Tabla 1. Resultados de las muestras problemas para cada grupo de laboratorio.

Concentración de
λ (ƞm) cromo III en la ecuación de la curva R2
Grupo (presenta mejor ajuste) solución problema de calibración ajustado
(M)
1 560 0,038287 A= 14,07*C- 0,0297 0,9963
2 585 0,0097709 A= 15,362*C - 0,0051 0,9968
3 530 0,04106145 A = 8,95*C - 0,0175 0,9998
4 580 0,0366507 A= 12,51*C + 0,0015 0,9998

Es importante mencionar, que no se conoce el valor real de la muestra, por lo

tanto, no es posible determinar la precisión del método utilizado. Sin embargo, de
las concentraciones resultantes para cada uno de los grupos, comparándolas, se
puede notar que las concentraciones del grupo 1, 3 y 4 se encuentran
prácticamente en el mismo orden de magnitud. Pero, las longitudes de onda
óptima, no coinciden. Los grupos 3 y 4, poseen los valores más exactos, pues su
valor de la correlación R2 es de 0,9998 para ambos, aunque las concentraciones
obtenidas difieren, al igual que las longitudes de onda. Se puede concluir que la
concentración de la muestra debería encontrarse entre 0,0366507 M y
0,04106145 M, con una longitud de onda entre 580 ƞm y 530 ƞm respectivamente.
Pero estos resultados son una aproximación, que puede no sea precisa, pues no
se tiene un valor de concentración real que permita comparar, adicionalmente, la
experiencia puede estar sujeta a errores, tanto en las mediciones realizadas de
cada grupo, y también, en esta comparación final de resultados, pues estos se
obtuvieron de equipos distintos, que utilizaron diferentes espectrofotómetros.

Conclusiones

 Se preparó una solución de nitrato de cromo (III) de 0,02 M, con la finalidad

de obtener el espectro de absorción de luz visible, representado por la
variación de la absorbancia con respecto a la longitud de onda, que
posteriormente, permitió elegir puntos de máxima absorción (longitudes de
onda: 420 ƞm y 560 ƞm), puntos de absorbancia intermedia (longitudes de
onda: 440 ƞm y 520 ƞm) y puntos de mínima absorbancia (longitudes de
onda: 480 ƞm y 660 ƞm).

 Los puntos seleccionados, permitieron la construcción de las curvas de

calibración representadas por la variación de la absorbancia en función de
la concentración, encontrándose que las curvas correspondientes a las
longitudes de onda de 520 ƞm y 560 ƞm, son las que mejor se ajustan a
una línea recta (comportándose según la Ley de Lambert Beer) con un
valor de correlación lineal R2 de 0,9963.

 De las dos longitudes de onda que mejor se ajustaron, se optó por la curva
de calibración de longitud de onda 560 ƞm, para determinar la concentración
 de una muestra problema, el resultado obtenido fue de 0,038287
±0,00886014 M.

Referencias bibliográficas

[1] Skoog, D., y West, D. (1963). Fundamentals of Analytical Chemistry. Primera

Edición, Editorial Holt, Rinehaut and Winston, Estados Unidos.

[2] Skoog, D., Holler, F., y Nieman, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental,
quinta edición, Mc Graw Hill, España.

Anexos

1. Determinación del espectro de absorción de luz visible de una

solución de nitrato de Cromo (III).

Tabla 2. Espectro de absorción de luz visible de una solución de nitrato de

Cromo (III).

Solución Nitrato de Cromo (III)

0,02 M
Longitud de onda (ƞm) Absorbancia
400 0,351
420 0,356
440 0,25
460 0,162
480 0,1
500 0,11
520 0,156
540 0,216
560 0,27
580 0,271
 600 0,206
620 0,17
640 0,098
660 0,042
680 0,041

Tabla 3. Longitudes de ondas seleccionadas para la construcción de la curva de

calibración.

λ(ƞm) 420 440 480 520 560 660

2. Construcción de la curva de calibración para la determinación de la

concentración de cromo (III) en la solución problema.

Tabla 4. Reporte de longitud de onda vs absorbancia para cada solución de

concentración definida.

λ(ƞm)
420 440 480 520 560 660
conc [M]
0,01 0,142 0,097 0,046 0,058 0,107 0,018
0,02 0,356 0,25 0,1 0,156 0,27 0,042
0,03 0,471 0,188 0,13 0,22 0,374 0,084
0,04 0,597 0,463 0,186 0,322 0,531 0,14
0,05 0,805 0,69 0,243 0,41 0,68 0,188

0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
y = 15.67x + 0.0041
0.4
R² = 0.9867
0.3
0.2
0.1
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 3. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =420 ƞm.
 0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4 y = 13.99x - 0.0821
R² = 0.859
0.3
0.2
0.1
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 4. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =440 ƞm.

0.3

0.25

0.2
Absorbancia

0.15
y = 4.8x - 0.003
0.1 R² = 0.9907
0.05

0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 5. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =480 ƞm.

0.45
0.4
0.35
0.3
Absorbancia

0.25 y = 8.7x - 0.0278

0.2 R² = 0.9963
0.15
0.1
0.05
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 6. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =520 ƞm.
 0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4 y = 14.07x - 0.0297
R² = 0.9963
0.3
0.2
0.1
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 7. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =560 ƞm.

0.2
0.18
0.16
0.14
Absorbancia

0.12 y = 4.38x - 0.037

0.1 R² = 0.9822
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 0.02 0.04 0.06
[Cr (III)](M)]

Figura 8. Curva de calibración espectro de absorción de la soluciones de nitrato

de cromo III para λ =660 ƞm.

Tabla 5. Regresiones lineales para cada longitud de onda, absorbancia vs

concentración molar.

Longitud de onda Ecuación de la recta de

R2
(ƞm) λ calibración
λ420 A = 15,67[C] + 0,0041 R² = 0,9867
λ440 A = 13,99[C] - 0,0821 R² = 0,859
λ480 A = 4,8[C] - 0,003 R² = 0,9907
λ520 A = 8,7[C] - 0,0278 R² = 0,9963
λ560 A = 14,07[C] - 0,0297 R² = 0,9963
λ660 A = 4,38[C] - 0,037 R² = 0,9822
 3. Determinación de la concentración de cromo (III) en la solución
problema.

Tabla 6. Datos de absorbancia para la longitud de onda seleccionada y

concentración obtenida para cada absorbancia utilizando la calibración espectro
de absorción.

Longitud de
Absorbancia [Cr III](M)
onda (nm) λ
420 0,615 0,038985
440 0,445 0,037677
480 0,185 0,039167
520 0,315 0,039402
560 0,509 0,038287
660 0,14 0,040411

Tabla 7. Resumen estadístico de las concentraciones de la muestra problema.

RESUMEN ESTADISTICO
Media 0,038988167 Máximo 0,040411
Error típico 0,000384643 Suma 0,233929
Mediana 0,039076 Cuenta 6
Nivel de
Moda #N/A 0,000988755
confianza(95,0%)
Desviación estándar 0,000942178
Varianza de la muestra 8,87699E-07
Curtosis 0,257764459
Coeficiente de asimetría 0,12849539
Rango 0,002734
Mínimo 0,037677

Tabla 8. Datos de concentración de la muestra problema de todos los grupos

obtenidos de la mejor calibración del espectro de absorción.

GRUPO [Cr III] (M)

1 0,038287
2 0,0097709
3 0,04106145
4 0,0366507
Tabla 9. Resumen estadístico de las concentraciones de la muestra problema de
todos los grupos.

RESUMEN ESTADISTICO
Media 0,03144251
Error típico 0,007281
Mediana 0,03746885
Moda #N/A
Desviación estándar 0,01456199
Varianza de la
0,00021205
muestra
Curtosis 3,7034402
Coeficiente de
-1,90558389
asimetría
Rango 0,03129055
Mínimo 0,0097709
Máximo 0,04106145
Suma 0,12577005
Cuenta 4
Nivel de confianza
0,02317138
(95,0%)

Tabla 10. Datos necesarios para hallar valores de la recta de calibración para
longitud de onda λ (560 ƞm) usando el método de mínimos cuadrados.

Conc. (M) A [C (M)]^2 [C (M)]*A (y- mx- b)^2 (xi-xp)^2

0,01 0,107 0,0001 0,00107 0,00289444 0,0004
0,02 0,27 0,0004 0,0054 0,00225625 0,0001
0,03 0,374 0,0009 0,01122 0,01004004 0
0,04 0,531 0,0016 0,02124 0,00998001 0,0001
0,05 0,68 0,0025 0,034 0,01157776 0,0004
suma suma suma suma suma suma
0,15 1,96 0,0055 0,07293 0,0367485 0,001
Xp Yp
0,03 0,39
( y ± (sy) = [m (± Sm ) ]x + [b (± Sb ) ]
(y ± 0,1106775)=[14,07 ± 0,3182513]x+[-0,0297 ± 0,1005278]
 METODO MINIMOS CUADRADOS
D m b
0,005 14,07 -0,0297
Sy^2 Sm^2 Sb^2
0,0122495 0,15005025 0,01347445
Sy Sm Sb
0,11067746 0,3873632 0,1160795
Error de la concentración de muestra problema ±0,00886014
Absorbancia(λ 560nm): 0,509

Concentración muestra problema de

0,038287±0,00886014
cromo (III)

Muestra de cálculo

1. Cálculo de Concentración de Cromo (III) en la muestra Problema a partir de

las mejores Rectas de la Curvas de Calibración para cada longitud de onda.
 λ=420 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

A (λ=420 ηm)= 15,67[C] + 0,0041

A (λ=420 ηm)= 0,615

Por tanto despejando [c]= (0,615-0,0041)/15,67= 0,038985 M

 λ=440 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

A (λ=440 ηm)= 13,99[C] - 0,0821

A (λ=440 ηm)= 0,445

Por tanto despejando [c]= (0,445+0,0821)/13,99= 0,037677 M

 λ=480 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

A (λ=480 ηm)= 4,8[C] - 0,003

A(λ=480 ηm)= 0,185

Por tanto despejando [c]= (0,185+0,003)/4,8= 0,039167 M

 λ=520 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

 A (λ=520 ηm)= 8,7[C] - 0,0278

A (λ=520 ηm)= 0,315

Por tanto despejando [c]= (0,315+0,0278)/8,7= 0,039402 M

 λ=560 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

A (λ=560 ηm)= 14,07[C] - 0,0297

A (λ=560 ηm)= 0,509

Por tanto despejando [c]= (0,509+0,0297)/14,07= 0,038287 M

 λ=660 ηm. (Error! Reference source not found.). Se tiene:

A (λ=660 ηm)= 4,38[C] - 0,037

A (λ=660 ηm)= 0,14

Por tanto despejando [c]= (0,14+0,037)/4,38= 0,040411 M

Siguiendo las ecuaciones para la determinación de una recta a través de los

mínimos cuadrados se tiene:

n n

∑ X i2 ∑ Xi ∑n X × Yi ∑ni=1 Xi
| i=1 | | i=1n i |
D= i=1 ∑i=1 Yi n ⁄
n m= D
| |
∑ Xi n
i=1

∑n Xi2 ∑ni=1 Xi × Yi ∑ni=1(Yi − Xi × m − b)

| i=1 | 2
(Sy) =
∑ni=1 Xi ∑ni=1 Yi ⁄ (n − 2)
b= D
2
(Sy)2 × n 2
(Sy)2 × 5 × ∑ni=1 Xi2
(Sm) = (Sb) =
D D
Ecuación de la recta en la calibración para longitud de onda λ=560 ηm

0,0055 0,15 0,07293 0,15

D=| | | |
0,15 5 m = 1,96 5 ⁄
0,005
D = 0,0055 × 5 − 0,15 × 0,15
 (0,07293 × 5 − 1,96 × 0,15)
m=
D =0,005 0,005

m = 14,13

0,0055 0,07293 0,0367485

| | (Sy)2 =
b = 0,15 1,96 ⁄ (5 − 2)
0,005
(0,0055 × 1,96 − 0,15 × 0,07293)
b= (Sy)2 = 0,0122495
0,005

b = −0,0297

(0,0122495)^2 × 5 0,0122495 × 0,0055

(Sm)2 = (Sb)2 =
0,005 0,005

(Sm)2 = 0,15005025 (Sb)2 = 0,0134744

Sy 1 1 (yo − y̅)2
Sx = √ + + 2
m k n m ∗ ∑(xi − x̅)2

0,1106775 1 1 (0,509 − 0,39)2

Sx = √ + +
14,07 1 5 14,072 ∗ 0,001

Sx=±0,00886014