Laboratorio Proteínas

Reacciones generales de proteínas.

MATERIALES

 Sulfato de cobre (10 g/L de CuSO4. 5H2O)

 Hidróxido de sodio (10 mol/L)
 Proteínas clara de huevo. y gelatina.
 Glutation (5 g/L)
 Ácido clorhídrico (1 mol/L). : R 34-37, S26-45
 Hidróxido de sodio (1 mol/L) : R 35, S 26-37-39-45
 Baños de agua hirviendo.
 Metales pesados (sulfato de cobre 0.1M)
 Reactivos acídicos (ácido pírico saturado) R: 2-4-23/24/25, S: 28-35-37-44

NOTA: Es necesario traer guantes, bata y gafas de seguridad.

PROCEDIMIENTO

1. PRUEBA DE BIURET PARA ENLACES PEPTIDICOS.

El sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos
dando un complejo de coloración violeta. La intensidad del color obtenido es una medida del
número de enlaces peptídicos presentes en las proteína. El nombre de la prueba se ha tomado del
compuesto Biuret que da una reacción típicamente positiva.

La reacción no es absolutamente específica para los enlaces peptídicos, ya que cualquier

compuesto que contenga dos grupos carbonilos unidos por un átomo de nitrógeno o de carbono da
un resultado positivo.

Procedimiento

A 2 mL de cada una de las proteínas agregue cinco gotas de sulfato de cobre 10 g/L y luego 2 mL
de NaOH 10M; mezcle vigorosamente y observe los colores formados.

2. DESNATURALIZACIÓN POR CALOR Y pH EXTREMOS

En tres tubos ensayo coloque 5 mL de una de las proteínas y agregue 0.5 mL de HCl 1M a uno de
los tubos, al otro 0.5 mL de NaOH 1M y al tercero 0.5 mL de agua. Coloque los tubos en el baño

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de agua hirviendo durante 10 min y enfríe a temperatura ambiente. Observe los resultados. Ajuste
los tubos ácidos y alcalinos hasta la neutralidad. Comente sus observaciones. Realice el mismo
experimento con las otras proteínas.

3. PRECIPITACION POR METALES PESADOS.

A pH7 y por encima de él, las proteínas están usualmente cargadas negativamente, así que la
adición de metales cargados positivamente neutraliza la carga y la proteína se precipita. La
precipitación por metales pesados es, por lo tanto, más efectiva a valores de pH neutros ó
ligeramente alcalinos, pero la solución no puede ser alcalina porque se corre el riesgo de que se
precipiten hidróxidos de los metales.
El precipitado es frecuentemente soluble en un exceso de iones de metal pesado ya que tal exceso
confiere a las partículas cargas positivas estables.

Procedimiento

A 2 mL de cada una de las proteínas, añada unas 5 gotas de sulfato de cobre 0.1M ¿Qué sucede
cuando se añade un exceso del reactivo?

4. PRECIPITACIÓN POR REACTIVOS ACIDICOS

Algunos compuestos ácidos poseen una carga negativa grande que neutraliza una proteína
cargada positivamente formando una sal insoluble. Los reactivos ácidos son, por lo tanto, más
efectivos a valores de pH ácido en los que las proteínas poseen carga positiva.

Procedimiento

A 1 mL de cada una de las proteínas, añada cinco gotas de ácido pícrico saturado. Qué sucede
cuando se añade un exceso de reactivo?. Agregue lentamente NaOH 1M y observe el resultado a
medida que el pH sube.

RESULTADOS

REACTIVO
Albúmina Caseína Gelatina Glutation
PRUEBA

BIURET

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 HCl

NaOH

AGUA

CuSO4

ACIDO PICRICO

OBSERVACIONES

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