12 MANUAL PRÁCTICAS BIOQUÍMICA

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRACTICA Nº 1.
PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS.
 Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la
 prueba de molish.
 Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento
frente al reactivo de Benedict.
 Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos específicos.

TEORÍA RELACIONADA

PRUEBA DE MOLISH: El ácido sulfúrico concentrado hidroliza los enlaces glicosídicos

para dar monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus
derivados. Estos productos se combinan con á-naftol sulfonato, originando un complejo
púrpura. Esta reacción es general para los carbohidratos pero algunos otros compuestos
orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico concentrado.
PRUEBA DE BENEDICT: Es una modificación de la prueba de felhing, introducida por
Benedict. En ella se usa únicamente una solución, lo cual lo hace mucho más simple con
la ventaja adicional de que el reactivo es más estable que el de felhing. Esta prueba solo
la dan los azucares reductores.
PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es débilmente ácido y solamente puede ser
reducido por monosacáridos. Si se deja hervir por largo tiempo existe la posibilidad de
hidrolizar los disacáridos dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de
oxido cuproso es menos denso que en los métodos previos y se recomienda dejar el tubo
en reposo hasta que el precipitado sedimente.
PRUEBA BIAL PARA PENTOSAS. Cuando se calientan las pentosas en ácido
clorhídrico concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de
iones fèrricos para dar un color verde azuloso.
PRUEBA DE SELLIWANOFF. Las cetosas deshidratan más rápidamente que las aldosas
dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo
rosado; por lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que se está
estudiando.

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PRUEBA PARA POLISACÁRIDOS. Los polisacáridos contienen sólo un grupo reductor

por varios cientos o más residuos, así que en la práctica, no son reductores. La hidrólisis
ácida libera los monosacáridos constituyentes que luego son ensayados.

MATERIALES Y REACTIVOS

Estufa o calentador Pinza para tubos de ensayo

Pipetas de 5 y de 10ml Gradilla

10 tubos de ensayo Papel tornasol

Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa, sacarosa, lactosa, fructosa, almidón,
leche (traer de la casa)

Solución de yodo. Reactivo de Bial

Reactivo de Molish Reactivo de Selliwanoff

Acido sulfúrico concentrado Alcohol Amilico

Reactivo de Benedict Acido clorhídrico concentrado

Reactivo de Barfoed Hidróxido de sodio 1M

PROCEDIMIENTO

Prueba de Molish: Agregue 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra que
contenga carbohidratos (Leche). Añada cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml de
ácido sulfúrico concentrado, hasta que se formen dos capas. Observe cualquier cambio
de color en la interfase de los dos líquidos.
Prueba de Benedict: Tome 3 tubos de ensayo; agregue al primero 0.5 ml de solución de
lactosa, al segundo 0.5 ml de solución de glucosa y al tercero 0.5 ml de solución de
sacarosa. Adicione 0.5 ml del reactivo de Benedict a cada tubo y colóquelos en un baño
de agua hirviendo por 3 min. La formación de un precipitado de color rojo ladrillo indica la
presencia de azúcar reductor.

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Prueba de Barfoed: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5 ml de solución de

galactosa, al segundo 0.5 ml de solución de ribosa y al tercero 0.5 ml solución de almidón.
Adicione 1 ml del reactivo de Barfoed a cada tubo, hierva por 2 min y deje reposar. La
formación de un precipitado de color rojo ladrillo indica la presencia de monosacáridos.

Prueba Bial : Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solución de ribosa,
al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de almidón.
Adicione 0.5 ml del reactivo de Bial a cada tubo y caliente hasta que empiece a hervir,
dejar enfriar y luego agregue 1 ml de alcohol amilico y agite, la aparición de una
coloración azul verdosa es prueba positiva es prueba positiva para pentosas.
Prueba de Salliwanoff: Tome 3 tubos de ensayo; adicione al primero 0.5ml de solución
de fructosa, al segundo 0.5ml de solución de arabinosa y al tercero 0.5ml de solución de
glucosa. Adicione 1ml del reactivo de Selliwanoff a cada tubo. Caliente durante 1 min en
un baño de agua hirviendo, la aparición de un color rojo o rosado es prueba positiva para
cetosas.

Prueba para polisacáridos: Coloque 1ml de solución de almidón, añada 1 gotas

de solución de yodo. Observe la producción de un color azul. Caliente el tubo
¿Qué observa? Deje enfriar y observe nuevamente, ¿Qué ocurre? Explique sus
observaciones.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.
2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?
3. Explique estructuralmente, por qué la maltosa es un azúcar reductor y por qué el
almidón no lo es?
4. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los
carbohidratos.
5. Por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de glucosa es
insoluble en agua.
6. ¿por que la sacarosa es un azúcar no reductor? Consulte la estructura.

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BIBLIOGRAFÍA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. Mexico. MaGraw- Hill

Latinoamericana, S.A.

CONN, E y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de ciencias.

Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá.