Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Escuela de Ciencias Básicas, Tecnología e Ingeniería

Unidad 2 - Paso 2 – Métodos analíticos

Sergio Andrés Rincón Rodríguez

Código 1.030.665.384

QUIMICA ANALITICA E INSTRUMENTAL

Lady Diana Castañeda

Universidad Nacional Abierta y a Distancia - UNAD

Programa INGENIERIA EN ALIMENTOS

Nodo Zona Centro Oriente - CEAD Bucaramanga

Bucaramanga, octubre del 2020

SERGIO PIÑA CARBARYL CULTIVO 0,008
ANDRES (ESPERMICIDA)
RINCON
RODRIGUEZ

1. Plan de muestreo

Problemática Seleccionada por el CARBARYL (ESPERMICIDA) EN PIÑA

grupo colaborativo

Grupo colaborativo : 301102_12

Tipo muestreo ESTADISTICO

Explicación del Tipo de muestreo a utilizar es el estadístico, donde acotamos la generalización

plan de de los resultados y usando dos parámetros llamados margen de error y nivel de

muestreo confianza encontramos primero la máxima diferencia entre el dato observado

en mi muestra y el dato real y segundo el nivel de certeza que tengo realmente

el dato real dentro del margen de error.

Tamaño

muestral
 Este el es el tipo de muestreo más adecuado ya que a través del muestreo

estadístico es posible que el investigador pueda extraer conclusiones para toda

Justificación
la población, a través de la toma de muestras representativas. Este tipo de

muestreo permite estimar el tamaño de la muestra, necesaria para lograr

resultados representativos y llegar a concluir del comportamiento de la

población a partir del análisis muestral.

Miller J., Miller J. (2002). Estadística y Quimiometría para Química Analítica.

Madrid: Pearson editorial.

Referencias

usadas para el

plan de

muestreo

 Esquematiza el procedimiento para la preparación de la muestra.

Las muestras se deberán tomar de diferentes puntos para que el material sea representativo del

total del lote; posteriormente se mezclan perfectamente y se dividen en sublotes de 1–2 kg, se

colocan en recipientes herméticos y se almacenan de manera apropiada hasta su análisis.

Para cada material se debe llevar un registro para conocer el tipo de proceso al que ha estado

sujeto previamente (subproductos industriales), su origen (vegetal, animal, mineral, fármaco) y

la parte usada como alimento (principalmente si ha estado sometido a un proceso que impida

su reconocimiento). Estos datos son importantes particularmente cuando se están usando

productos agrícolas, ya que éstos pueden variar su composición dependiendo de la variedad

cultivada, las condiciones de cultivo o la época de cosecha; pueden también contener residuos

de pesticidas o estar contaminados por mohos y en el caso de subproductos animales, presentar

contaminación por antibióticos y hormonas.


La cantidad de material debe ser
adecuada para realizar todos los
análisis necesarios; debe ser una
muestra homogénea y representativa.
Al menos que se señale lo contrario, las
muestras húmedas deberán secarse
para su molido y tamizado, siguiendo
las indicaciones del punto anterior.
Las muestras líquidas y semilíquidas
deberán conservarse en frascos
tapados y mezclarse perfectamente
antes de su análisis.
El manejo de la muestra debe ser
cuidadoso para evitar cualquier cambio
o contaminación.
Al menos que el método de análisis
indique lo contrario, los materiales
serán molidos de inmediato y pasados
por una malla de 1 mm 2; mezcle
perfectamente la muestra tamizada y
almacénela en un recipiente hermético.
Antes de tomar material para cada
análisis mézclese nuevamente.
Los materiales deberán conservarse en
refrigeración o a temperaturas que
eviten cambios en su composición.
Muestras para análisis de vitaminas u
otras substancias sensibles a la luz se
colocarán en recipientes de vidrio color
ámbar.
La muestra deberá molerse finamente,
tamizarse y mezclarse homogéneamente.
Esta operación debe hacerse rápidamente y Si la muestra contiene mucha humedad
con la mínima exposición al medio ambiente. y la preparación del material no puede
Evite su sobrecalentamiento durante el hacerse sin cambios significativos en
molido, por lo cual materiales sensibles al
ésta, determine la humedad antes y
calor deberán ser molidos a mano. Antes de después de la preparación.
usar el molino asegúrese de que está
perfectamente limpio.
Mezcle la muestra perfectamente y
divídala en dos partes iguales. De ser
necesario haga un molido preliminar
Se recomienda un examen físico macro
para facilitar esta operación. Almacene
y microscópico para detectar la
una de las partes en un frasco
presencia de materiales
hermético, limpio y seco; la otra parte
contaminantes.
será usada en los análisis y su tamaño
deberá ser adecuado para la totalidad
de las pruebas requeridas.
  Plantea el método de análisis para la cuantificación del analito en la problemática
identificada

Validación
Objetivos
Introducir los conceptos de:

 Desarrollo del protocolo

 Calificación de instrumento
 Procedimiento analítico
 Extensión de la validación
 Transferencia de métodos
 Validación de ensayos químicos, físicos, biológicos y microbiológicos
Características Analíticas típicas en la validación

 Linealidad
 Especificidad
 Limite de Detección
 Límite de cuantificación
 Precisión
 Exactitud
Componentes de calidad de datos analíticos
Componentes del Proceso de validación
Analista, equipo instrumental y método

Etapas de Validación
Etapas para desarrollar un método analítico

Validación de métodos analíticos

La validación de procedimientos analíticos requiere:
 Instrumentos calificados y calibrados
 Métodos documentados
 Patrones de referencia confiables
 Analistas calificados
 Integridad de la muestra

Plan maestro de validación debe incluir:

Protocolo de validación para método analítico debe especificar:

 El propósito y el alcance
 Responsabilidades y competencias del equipo de trabajo
 Método de ensayo normalizado y documentado (los pasos del método no pueden ser
modificados durante la validación).
 Lista de materiales y equipos
 Las características de desempeño que se evaluarán (especificidad, linealidad, etc) y el
Procedimiento para evaluarlas. experimentos para cada parámetro)
 Análisis estadístico o fórmulas
 Criterio de aceptación para cada parámetro de desempeño (los criterios de aceptación no
pueden ser cambiados para ajustarse a los datos)

Diferentes clases de ensayos analíticos

 Clase A: Para establecer identidad
 Clase B: Para detectar y cuantificar impurezas.
 Clase C: Para determinar cuantitativamente la concentración.
 Clase D: Para evaluar las características, disolución, uniformidad de contenido.

Parámetros requeridos para la Validación OMS

Parámetros requeridos para la Validación USP 31

Extensión de la validación

 Métodos nuevos requieren validación completa

 Métodos de Farmacopea requieren validación parcial (o verificación)
 Cambios significativos implican revalidación parcial
… cambios de equipo
… cambios de fórmula
… cambios de proveedores de reactivos críticos.

Características generales de desempeño

ESPECIFICIDAD y SELECTIVIDAD
“La capacidad de evaluar en forma inequívoca al analito en presencia de los componentes cuya
presencia cabría esperar, tales como impurezas, productos de degradación y componentes de la
matriz. La falta de especificidad de un procedimiento analítico individual puede compensarse
mediante otros procedimientos analíticos de apoyo”.
Se utiliza en:

 Identificación: garantizar la identidad del analito

 Pruebas de pureza: declaración exacta del contenido de impurezas de un analito (sustancias
relacionadas, metales pesados, disolventes residuales, etc.)
 Valoración: un resultado exacto que permite la declaración exacta del contenido o potencia
del analito en la muestra
 En análisis cualitativos: Debe tener la capacidad de distinguir compuestos de estructura
estrechamente relacionada (productos de degradación)
En un procedimiento analítico para impurezas, la especificidad se puede establecer:
 Si se dispone de impurezas la especificidad puede establecerse por adición.
… Se agregan cantidades conocidas (del fármaco o producto farmacéutico) con niveles adecuados de
impurezas y/o excipientes

 Comparación con muestras sin agregado de cantidades conocidas

„ El resultado de la valoración no se ve afectado por la presencia de estos materiales: “un resultado
exacto que permite la declaración exacta del contenido o la potencia del analito en una muestra”

LÍMITE DE DETECCIÓN
“la menor cantidad de analito que puede detectarse en una muestra, aunque no necesariamente
cuantificarse, bajo las condiciones del experimento indicadas. Así, las pruebas de límite confirman
simplemente que la cantidad de analito se encuentra por encima o por debajo de un cierto nivel.”

Determinación del LD: No instrumental

„ Métodos no instrumentales: análisis de muestras con concentraciones conocidas de analitos para
establecer la concentración mínima a la cual el analito puede detectarse de manera confiable.
Ejemplos: TLC, valoraciones volumétricas, comparaciones de colores.
Determinación del LD: instrumental
„ Métodos instrumentales: igual que para los métodos no instrumentales análisis de muestras con
concentraciones conocidas de analitos para establecer la concentración mínima a la cual el analito
puede detectarse en forma confiable.

LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
“La menor cantidad de analito en una muestra que puede determinarse con precisión y exactitud
aceptables bajo las condiciones del experimento establecidas”
„ No instrumental: a partir del análisis de muestras con un nivel adecuado mínimo de analito
cuantificado con exactitud y precisión aceptables.

„ Instrumental: igual que para los métodos no instrumentales, más el hecho de que el cálculo del LC
puede realizarse con un valor con el cual la relación entre señal y ruido es 10:1.
INTERVALO
El intervalo de un método analítico es la amplitud entre los niveles superior e inferior del analito
(incluidos estos niveles) que se demostró que se determinó con un nivel adecuado de precisión,
exactitud y linealidad, utilizando el método según se describe en el protocolo.
LINEALIDAD
La linealidad de un método analítico es su capacidad para obtener resultados de prueba que sean
proporcionales ya sea directamente, o por medio de una transformación matemática bien definida, a la
concentración de analito en muestras en un intervalo dado.
EXACTITUD
5 maneras de determinar la exactitud
…Prueba de un Estándar de Referencia
… Mezcla con excipientes (placebo con una cantidad agregada conocida)
… Agregado de estándar (muestra con cantidad agregada conocida)
… Se deduce a partir de los datos de especificidad y linealidad.
… Comparación con un método reconocido como exacto (método de referencia)

PRECISIÓN
„ El grado de coincidencia entre los resultados de las muestras individuales de una muestra
homogénea
„ La precisión debe evaluarse a través del intervalo de cuantificación especificado en el método
Determinación:
… Valoración de las muestras individuales de una preparación homogénea
… Calcular la desviación estándar o la desviación estándar relativa
„ La precisión del método debe incluir todas las fuentes de variación desde la preparación de la
muestra hasta el redondeo del resultado final de la prueba
REPORTE DE VALIDACIÓN
1. Objetivo y alcance del método, aplicabilidad
2. Tipo de analito y la matriz sobre la que se hizo la validación,
3. Detalles del analito, reactivos, estándares de referencia y control y estabilidad de las muestras
preparadas.
4. Procedimiento para la verificación de la calidad de los estándares y reactivos químicos usados
5. Condiciones de seguridad
6. Parámetros del método
7. Parámetros críticos establecidos a través del test de robustez
8. Listado de equipos, funcionamiento, condiciones de desempeño. IQ,OQ,PQ
9. Detalle de las condiciones y cómo fue realizado el proceso, incluyendo la preparación de la
muestra
10. Tratamiento estadístico y cálculos realizados
11. Procedimientos de control rutinario
12. Registros como cromatogramas, espectros y curvas de calibración
13. test de aceptación de las variables
14. Resultados de la incertidumbre de la medición
15. Criterios para revalidación
16. Persona que desarrolló y validó el método inicialmente
17. Resumen y conclusiones
 Procedimiento para determinación del CARBARYL en la Piña.
1. Reactivos, materiales y equipos.
• Reactivos.
o Estándares de plaguicida 95%
o Acetato de etilo grado residuos
o Ciclohexano grado HPLC
o Acetonitrilo grado HPLC
o Sulfato de magnesio
o Citrato diLsódico sesqui hidratado
o Citrato trisódico di hidratado
o Cloruro de sodio
o PSA (N - propiletilendiamina)
o Agua destilada
• Materiales.
o Columna de vidrio de kB cm x kB mm de diámetro interno
o Gel Biobeads S-X3
o Columna capilar TBR-5MS (30m x 0,25 mm d.i μm espesor)
o Columna capilar sin fase estacionaria (1m x 0,32 mm d.i)
o Cápsulas de aluminio
o Espátula
o Pipeteador
o Embudos de vidrio
o Matraces aforados
o Tubos falcón
o Viales ámbar
o Frascos ámbar con tapa
o Toallas de papel
o Guantes de nitrilo
o Gafas de seguridad
o Tapabocas/Respirador con filtros para vapores ácidos

 Equipos:
o Homogeneizador
o Balanza analítica
o Licuadora industria
o Cromatógrafo de permeación por gel
o Cromatógrafo de gases
o Detector selectivo de masas
o Centrífuga con control de temperatura
o Ultracongelador
o Cámara de extracción de gases
o Refrigerador

2. Procedimiento
2.1. Preparación de la muestra
1. Homogenizar alrededor de 2kg de la matriz por 5 min, porciones de muestra
procesada (100g) se almacenan en bolsas herméticas a -20 °C hasta el análisis.
2. Tomar 10 g de muestra homogeneizada en un tubo de polipropileno de 50 mL
3. Agregar 30μL de estándar subrogado y, luego, se adicionar 10mL de acetonitrilo
grado HPLC.
 4. Agitar manualmente durante 1min, luego se adicionar una mezcla de sales
compuesta de 4 g de MgSO4 anhidro, 1 g de NaCl, 1g de citrato trisódico di
hidratado y 0,5 g de citrato di sódico sesqui hidratado.
5. Luego de agitar manualmente la muestra por 2 min centrifugar a 4500 rpm por
10 min a 10°C
6. Observar cuatro fases en los tubos de centrifugación; una fase superior orgánica
donde se encuentran el plaguicida a analizar, una fase intermedia
correspondiente a la matriz, una fase acuosa y por último una que contiene las
sales sólidas.

2.2. Procesamiento de la muestra.

1. Colocar 2 mL de fase orgánica en un tubo de polipropileno de 15 mL, y realizar
una limpieza por extracción en fase sólida dispersiva (d-SPE) con 290 mg de
MgSO4 anhidro y 50 mg de PSA empleando un agitador vortex por 2 min.
2. Centrifugar a 4500 rpm por 5 min a 10 °C.
3. Tomar 1 mL de sobrenadante y se llevar a sequedad en un evaporador rotatorio
a 35° C
4. Transferir cuantitativamente a un balón aforado de 1 mL completando volumen
con acetato de etilo.
5. Inyectar 500 μL de extracto en el cromatógrafo de permeación por gel.
6. La fracción de plaguicida se recolecta en un balón de fondo redondo.
7. El extracto se debe concentrar en un evaporador rotatorio a 35°C.
8. Adicionar 10 μL de estándar interno y 490 μL de acetato de etilo.
9. Homogenizar en un agitador vortex por 1 min.
10. transferir a un vial e inyectar en el cromatógrafo de gases acoplado a
espectrometría de masas.

 Define las relaciones matemáticas para identificar y determinar el analítico de la

problemática identificada.

MUESTREO ESTADÍSTICO

 No se conoce el tamaño de la poblacion

Confianza probabilística de 95% por lo que Z = 1.96

E = probable error = 5% = 0.05
p y q= 0.5

 No se conoce el tamaño de la muestra

n= 192 piñas seria la muestra

Definimos un plan de aceptación
 B. Descripción de la Actividad (Individual):

el acido acético CH3COOH es un acido débil tal como lo indica su constante de acidez Ka = 4,8 10-
10. Por este motivo podemos considerarlo esencialmente monoprótico.

Reacción de titulación: CH3COOH + NaOH  NaH2CH3 + H2O

Cálculo del volumen de solución de NaOH necesario para alcanzar el 100% de la titulación:
1000 mL CH3COOH ------ 0,1 moles
10,00 mL “ ------ x = 1x10-3 moles CH3COOH
1 mol CH3COOH ------ 1 mol NaOH
1x10-3 moles “ ------ x = 1x10-3 moles NaOH
0,05 M NaOH ----- 1000 mL NaOH
1x10-3 moles “ ----- x = 20,00 mL NaOH
Entonces los volúmenes de valorante para cada punto de la titulación serán:

0 %  V = 0 mL. Al comienzo de la titulación, sin haber agregado aún agente titulante, sólo tenemos
una solución de ácido débil (CH3COOH). Por lo tanto, considerando la relación Ca/Ka > 100,
podemos calcular el pH utilizando la ecuación simplificada:
[H+ ] = (Ka Ca) 1/2 = (4,8 10-10 x 0,1) 1/2 = 6,297-6 M
pH = 4,2
250 %  V = 50,00 mL. Mezcla de base débil CH3COOH - y exceso de base fuerte. Por lo tanto, el
pH de la solución final puede calcularse teniendo en cuenta sólo el aporte de OHprovenientes de la
base fuerte, ya que el aporte de la base débil no va a ser significativo.

[OH- ] aportada por exceso de NaOH = 0,0125 M Por lo tanto: pH = 12,06

Como puede observarse en la gráfica, el salto de pH en el punto de equivalencia (PE) es pequeño, por
lo cual no es adecuado utilizar un indicador ácido base visual para detectar el punto final de esta
titulación. El mismo podría ser detectado utilizando, por ej., un método instrumental.
 BIBLIOGRAFÍA

 Cálculo del tamaño de una muestra 1. SELECCIONAR MOSTRAR MÁS-

https://www.youtube.com/watch?v=iXJfDZAt2qs

 Fernando Murcia Rubiano-ALIANZA CONVENIO INVIMA-

https://www.invima.gov.co/documents/20143/354605/5.+DISE%C3%91O+E+IMPLEMENT

ACION+DE+PLANES+DE+MUESTREO.pdf/7aa811aa-f6f6-c36f-be55-1fafd90f2d2e

 Formato Acta de toma de muestras para ETS-INVIMA-

https://www.invima.gov.co/documents/20143/1402493/29.+Manual+de+Toma+de+Muestras

+de+Alimentos+y+Bebidas+para+LAS+ETS.pdf

 Greenfield, H. and Southgate, D. A. T. 1992. Food Composition Data: Production, management

and use. Chapter 6; Sampling. London, Elsevier Applied Science.