Clase 1 Tecnicas de estudioooooooooo, estudeeeeo y la CTM

Diferencia entre el microscopio óptico y electrónico

Es que el microscopio óptico trabaja con Luz con fotones mientras que el Electrónico de trasmisión
trabaja con haces de electrones
Microscopia óptica existen varias modalidades que son:
1- El microscopio de campo claro
2- El microscopio de campo oscuro
3- El microscopio de contraste de fase
4 El microscopio de inmunofluorescencia

El microscopio de campo claro: Hacemos pasar una cantidad de luz a través del todo el campo, a
través de toda la muestra y cuando observamos vamos a ver las estructuras microscópicas con un
contorno oscuro y el fondo se verá claro, porque en el fondo lo que sucede es la luz que no es
capaz de pasar.
El Microscopio de Campo oscuro: El fondo se ve oscuro y el contorno de las estructuras que
vamos a observar serán claras o brillantes.

Microscopio de contraste de fase: lo que diferencia a este microscopio es que sin necesidad de
teñir la muestra por diferencias en una característica que se llama índice de refracción

Índice de refracción: tiene que ver con el hecho de poner un lápiz en un vaso de agua y parece
que se doblara, ya, pasa lo mismo en el microscopio, el índice de refracción es un número que
nombra una idea de cuánto una sustancia en función de su densidad va a retrasar el paso a través
de ellas con respecto a cómo estos fotones se desplazan en el vacío.

Lo importante de este asunto es que cuando el índice de refracción entre dos sustancias es
diferente entre el aire y el agua, ocurre un pequeño desvió, mayor o menor desvió del curso que
van llevando los fotones.

Cuando tenemos componentes celulares que tienen índice de refracción diferente en el

microscopio de contraste de fase hay dispositivos especiales que son dos tipos de anillos
especiales que lo que hacen es producir una imagen de contraste, que en otros microscopios no se
ver. Por lo tanto este microscopio está basado en las diferencias de los índices de refracción

El Microscopio de Inmuflorencencia Se vale de una característica que es la florescencia,

Que es un fluoróforo? Son sustancias que cuando nosotros incidir luz de una cierta longitud de
onda sobre ellos, ellos omiten otra luz de una longitud de onda diferente

Entonces el microscopio de florescencia o de inmunoflorecencia, lo que nosotros hacemos es

valernos de esta propiedad para mediante anticuerpos determinar la presencia de una sustancia X
por ejemplo: la presencia de un patógeno en la muestra o una bacteria, o también incluso para ver
la presencia de anticuerpos en una muestra con determinados patógenas y así existen dos
modalidades diferentes de inmunofluorescencia, directa e indirecta y luego utilizando que se
denomina un conjugado que es un anticuerpo unido a un fluoróforo vamos a evidencia la
presencia o ausencia de aquello que nos interesa.

En este microscopio se ocupa un dispositivo que emite una luz de una longitud de onda que no va
a ser visible para nosotros pero que al interactuar con el fluoróforo va a emitir una luz que
nosotros si vamos a ver por ejemplo la luz de color rojo, amarillo, que nos va a permitir detectar
aquello que si nos interesa.

El sistema inmunológico funciona a través de células que directamente pueden destruir

microorganismos por ejemplo e incluso células infectadas, también funciona a través de moléculas
proteínas y también existen los Anticuerpos: que son producidos por un grupo especial de
glóbulos blancos que son los lifocitos B entonces estas proteínas tienen la capacidad de unirse
muy específicamente contra alguna cosa que el cuerpo reconoce generalmente como extraños,
Por ejemplo la pared de una bacteria, la superficie de una pared de hongo, entonces que pase
estas reacciones son muy especificas un anticuerpos se une normalmente a un solo tipo de
antígeno aquello que estimula la producción de anticuerpo se denomina antígeno.

Una de las cosas con la que se ocupa la inmunofluorescencia es para detectar la presencia de un
patogeno que se llama clamidia tragomatix------es uno de los agentes que causa enfermedades de
transmisión sexual. Entonces una de las estrategias para tomar clamidia es tomar parte de un flujo
que puede estar siendo producida por los genitales, hacer una muestra y posteriormente
comienza una serie de procesos. Supongamos que la clamidia si esta en la muestra o la chica o
chico si está infectado por clamidia, lo que se aplica después es un conjugado en donde esta el
anticuerpo más un florocromo. En los microscopios las clamidias son muy pequeñitas y uno no las
puede ver, por eso se tiñen porque es la única forma de visualizarla, entonces lo que se hace es
poner en el microscopio la muestra, hacen incidir una luz que la luz no va a permitir ver la clamidia
pero como está el florocromo, se pueden ver las clamidias

Recordar que el florocromo

La inmunoflorescencia puede ser directa e indirecta, porque a veces lo que uno busca no es
directamente ver al patógeno, lo que hace es ver la respuesta del paciente frente a un patógeno.
La superficie solida por ejemplo de una lamina de microscopio que tiene ya el patógeno
incorporado y luego uno de eso uno incuba con el suero del paciente para ver si tienen
anticuerposcontra esto y eso es una detección indirecta porq después el conjugado no está
dirigido contra el patógeno propiamente tal sino contra el anticuerpo que produjo el paciente.

Es decir en lugar de detectar al patógeno directamente nosotros ponemos el patógeno en la

lamina que vamos a observar en el microscopio, esa lamina la incubar con la muestra del paciente,
con el suero, con el plasma del paciente para ver si hay anticuerpos contra eso, que eso nos indica
nosotros indirectamente que la persona ha tenido contacto con microorganismos. Luego
ponemos un conjugado son anticuerpos específicos contra anticuerpos humanos conjugados con
un florocromo y la observación microscópica será la misma una que será una fluorescencia, una
luz de un color de una longitud de onda diferente.

En el Microscopio tenemos:
Sistema mecánico: Platina
Sistema de iluminación: Tornillos de focalización Macro y Micros
Sistema Optico.

El microscopio óptico nos permite ver hasta el nivel de células.

Cuando hablamos de ultra microscopia o ultra estructura se refiere a todo aquello que no
podemos ver con el microscopio óptico, hablamos de ultra estructuras cuando necesitamos
ocupar el microscopio electrónicos para poder observar las estructuras nos interesan por ejemplo
las propiedades de una membrana, detalles de un organelo.
Pregunta de prueba: Con un microscopio óptico es posible observar organelos?
Si se pueden observar pero no todos.
Se pueden observar todos los organelos con microscopio óptico?
No, solo algunos, por ejemplo los ribosomas o cosas más pequeñitas necesitamos un microscopio
electrónico.

Pregunta de prueba en qué consiste fijar un tejido?

Fijar sig: mantener las estructuras con su forma por un periodo largo de tiempo. Entonces el
proceso de fijación consiste en denaturar estas encimas que se encuentran dentro de la células
para que no pueda degradar las celular y se puedan conservar lo mejor posibles.
Para fijar una muestra los pasos principales son:
1- Deshidratarla
2- Reemplazar el agua( porq todos los seres vivos estamos compuestos por agua) entonces se
reemplaza por otro tipo de componente para mantener esto en una base solida que nos permite
hacer cortes, y eso es la parafina, ya que esta a temperatura ambiente es solida, entonces se
extrae el agua y se pone parafina en su lugar para que el corte quede muy sólido y luego que se
hacen cortes muy finos, y estos cortes posteriormente son deshidratados, desparafinados teñidos
y observados.

Que función tendrán las tinciones?

Aquello de que de otra forma seria traslucido si se hiciera una preparación al a fresco quizás se
distinguirían unos detalles, en cambio al teñir con la tinción hematoxilina Eosina:
La hematoxilina es un colorante básico que tiñe de color azul aquellas sustancias que son acidas.
Entonces lo que haces es teñir de color azul.
El hígado tiene varias funciones y una de ellas es que es una reserva energética, como
almacenamos el azúcar, como se llama esa molécula compleja donde guardamos o almacenamos
el azúcar el glucógeno entonces los hematocitos tienen abundantes gránulos de glucógeno y la
Eosina que es un colorante acido tiñe de un color rosado moléculas básicas como los gránulos de
glucógeno.

Con el microscopio Óptico podemos determinar:

Relaciones intercelulares
Morfología: Tamaño forma
Estructura:

Diferencia entre el microscopio óptico y electrónico

Es que el microscopio óptico trabaja con Luz mientras que el Electrónico trabaja con haces de
electrones
Microscopia óptica existen varias modalidades que son:
1- El microscopio de campo claro
2- El microscopio de campo oscuro
3- El microscopio de contraste de fase
4 El microscopio de inmunofluorescencia.

Diferencia de microscopio electrónico de barrido y transmisión.

Microscopio electrónico de transmisión el haz de electrones pasa a través de la muestra

Microscopio de Barrido: Barre la muestra, Los electrones que revotan en la muestra son captados
por sensores para captar una imagen tridimensional.
En cuanto al poder de o capacidad de magnificación el de transmisión es mucho más potente que
el de barrido
El de transmisión puede aumentan la imagen 100.000 (cienmil veces) y el de barrido solamente
10.000 (diezmiel)
Pero se usan para cosas diferentes. Podemos aumentar mucho más la imagen con el de
transmisión que con el de barrido.
Tienen funciones diferentes: El de transmisión nos da una imagen de un corte pasando a través de
las estructuras, mientras q el de barrido nos da una imagen en 3D

Características del M.E.T

-Poder de aumento: capacidad de magnificación = 100.000X .
-Poder de resolución: capacidad de distinguir estructuras muy finas.
-Límite de resolución: distancia mínima que debe existir entre dos puntos para distinguirlos =
0.0001 m
Utilidad
Permite determinar:
Ultraestructura celular (análisis detallado)

Características del M.E.B

- Poder de aumento: capacidad de magnificación = 10.000X .
- Poder de resolución: capacidad de distinguir estructuras pequeñas (superficies).
- Límite de resolución: distancia mínima que debe existir entre dos puntos para distinguirlos =
0.002 m
Utilidad:
Permite determinar:
Morfología.
Superficie celular
Análisis de Membranas

Crio fractura como el núcleo lo dice sencillamente consiste en romper estructuras a temperaturas
muy bajas, se congela la muestra en nitrógeno líquido, se rompe y posteriormente se observan
para ver detalles de estructuras por ejemplo membranas, especialmente membranas. Utilizando
esta técnica uno pude ver detalles tan espectaculares como están dispuestas las proteínas en una
membrana plasmática. Técnica complementaria al microscopio electrónico de barrido que permite
el estudio de superficies fracturadas de la membrana plasmática y algunos organelos.

Comprende tres etapas:

- Congelación rápida de la muestra
-Fractura al vacío
-Replica por sombreado metálico que se observa al M.E.B.

Estudio funcional
-Cultivo celular
-Fraccionamiento celular

El cultivo celular consiste en desarrollar células o tejido fuera del lugar de origen. Por eso
hablamos de cultivo in-vitro que sig en vidrio. Para poder poner a crecer células in-vitro tenemos
que evitar la contaminación con otras células que podrían competir con aquellas que a nosotros
nos interesan, entonces primero necesitamos un recipiente estéril que puede ser una placa, un
frasco, también tenemos que aportarle a las células que nosotros vamos hacer crecer todas los
nutrientes que necesita, agua, sales, azucares, aminoácidos a veces algunos tienen requerimientos
especiales, los que les denominamos factores de crecimiento y antibióticos.
Por que se necesitan antibióticos a veces?
Por ejemplo si yo quiero aislar un microorganismo desde la mucosa de la boca pro me interesa una
bacteria en particular no todas las de la boca. Existen medios de cultivo que permiten crecer a una
gran cantidad de microorganismos, y otros medios que se llaman selectivos.
Un medio selectivo permite crecer algunos microorganismos y a otros los inhibe para que solo
crezca aquello que a nosotros nos interesa, y pueden tener antibióticos, o grandes cantidades de
sal hay distintos tonos de seleccionar unos microorganismos y no otros. También es posible jugar
con otras cosas por ejemplo la temperatura, porq no todos los organismos crecen a la misma
temperatura, concentración de gases, humedad, presión
Entonces cuando uno siembra una muestra de un tejido o una muestra ambiental el primer
crecimiento que se obtiene es lo que se llama el cultivo primario que puede ser puro, o pude ser
un cultivo mixto es decir un microorganismo o un tipo de célula o más de un tipo de células, más
de un tipo de microorganismos. Desde ahí si nosotros sacamos parte de ese crecimiento y lo
pasamos a una placa nueva por medio de cultivo, fresca que no tiene nada creciendo allí, ese
segundo cultivo se llama cultivo secundario.
Mixto: más de un microorganismo o más de un tipo de célula
Puro: solo un tipo de célula.
También es posible utilizar micro manipuladores que son aparatos que permiten realizar
intervenciones muy finas por ejemplos, esfertalizacion in vitro, se requieren maquinas de alta
especialización

Finalmente para hacer separación de componentes celulares uno lo que puede hacer es
homogenizar por ejemplo un tejido, aquí lo representamos con tejido hepático y aquí están todas
las células. Aquí hay una célula hepática ahumada, uno puede homogenizarla mediante la
aplicación de ultra-sonido, mecánicamente también por ejemplo por presión uno puede romper
una célula, aplicar detergentes y un montón de técnicas y luego uno tiene una mezcla más o
menos fluida, en los cuales están los núcleos, las mitocondrias rectos del Aparto de Golgi. Etc
Entonces por centrifugación uno pone a girar por ejemplo un tubo con toda esta mezcla en este
aparato que es la centrifuga, y que creen ustedes que va a caer primero, formando un sedimento
lo más pesado o lo más liviano? Lo más pesado los organelos mas grandes, por ejemplo los
núcleos, los primeros sedimentos serán los núcleos. Y al final las partículas más pequeñas que son
los ribosomas.

Fraccionamiento celular: Técnica bioquímica que permite aislar cada unos de los organelos
celulares, de acuerdo a su tamaño, peso o densidad, para su posterior estudio bioquímico y/o al
microscopio electrónico.
- Extracción de la muestra: rápida
- Homogeneización: ruptura de las células mediante medios químicos (detergentes), mecánicos
(perlas de vidrio-teflón) o físicos (ultrasonido).
-Centrifugación: Aplicación de una fuerza (g)

Cromatografía: la idea de la cromatografía es separar una mezcla de diferentes sustancias en cada

uno de los componentes que la integren.

Los primeros experimentos de cromatografía se hicieron con tejidos de vegetales. Lo que hizo el
primer hueon(Investigador) fue almacenar tejidos vegetales y estos tejidos almacenados los puso
en un solvente que en cromatografía los solventes pueden ser muchas cosas, pueden ser solventes
orgánicos, o puede ser agua incluso… y que hizo este loco? Estos solventes posteriormente los hizo
migrar por capilaridad en un soporte físico.
En el caso de estos primeros experimentos se utilizo un solvente que en este caso es un solvente
liquido, como es en el caso de la mayoría de las cromatografía y una base solida que en este caso
era papel, lo que ocurrió es que por capilaridad la mezcla, los distintos componentes de
pigmentos fueron subiendo por el papel y fueron quedando separados, en el caso de los
pigmentos vegetales muchas veces estos tienen un color propio.

Lo importante de la cromatografía es que ellas utilizan siempre lo que se denomina una fase móvil
que en este caso es el solvente, se mueve la mezcla con los distintos componentes y una fase
estacionaria. Esta fase estacionaria puede ser un montón de cosas diferentes y por ello hay
distintos tipos de cromatografía. Hay cromatografía liquida, de capa delgada como una fase
estacionaria, etc
Lo importante de esta huea es que con cromatografía lo que se pretende es separar una mezcla de
sustancias diferentes en cada una de sus componentes.

Otra técnica que es muy importante en laboratorio es la técnica Electroforesis, una de las técnicas
vitales en biología, esta técnica consiste en hacer migrar o separar algún determinado tipo de
molécula, principalmente proteínas o ácidos nucleícos en función de su tamaño. Lo que se hace es
poner una muestra de un acido nucleico o de una proteína en lo que se denomina una cámara de
electroforesis que contiene distintos polos, un polo negativo, un polo pósito y la muestra se carga
en unos pocillo.
Entonces que es lo que ocurre con esto? Se somete la muestra a la fuerza de un campo eléctrico
y la hacen pasar a través de una sustancia que es poroso, en concreto un gel poroso, y hay
distintos tipos de gel que se ocupan en el electroforensis por ejemplo la poli no se cuanto y
también puede ser agarosa. Entonces esto funciona así: si yo cargo en uno de estos pocillos una
proteína o un ADN que es una molécula muy grande como el gel con unos poros que tienen un
determinado diámetro, que es lo que sucede? Las moléculas más chicas irán migrando primero.
Entonces las partículas más pequeñas, los fragmentos más pequeños van a emigrar rápidamente y
por lo tanto si ponemos todo esto en una unidad de tiempo completo por ejemplo una hora,
media hora los fragmentos más pequeños son los que van a migrar más lejos en función de eso
uno los puede separar, como sabe uno cual es el peso molecular de la molécula que está
separando?, mediante lo que se denomina un patrón de peso molecular, yo puedo por ejemplo
cargar una mezcla en la cual hay fragmentos de ADN que tienen distintos tamaños por ejemplo
100 pares de vasos, 200 pares de vasos, 300 pares de vasos, etc, entonces si yo pongo un patrón
de peso molecular en un espejo luego sencillamente comparo las muestras y veo donde caen.

La técnica de reacción en cadena de polimerasa se trata

Replicación del ADN: Por ejemplo cuando una célula se divide no puede dejar a la célula vieja sin
ADN lo primero que tiene que hacer es duplicar el citoplasma organelos blabla y luego duplicar su
ADN y repartirlo entre las dos células hijas que se originan por división entonces la enzima que se
encarga de este proceso se llama ADN polimerasa O DNA polimerasa, entonces en esta técnica la
idea central de la PCR es amplificar fragmentos de ADN de interés y amplificar significa hacer
muchas copias miles o millones de copias de ese fragmento q nos interesa .
Por que uno querría hacer muchos fragmentos de un determinado de gen o de una determina
parte de un genoma de un organismo?
Para analizar cómo es la composición de este ADN, como es la secuencia, para fines de
identificación. Existen por ejemplo mutaciones en concreto en el genoma de algunos patógenos
que les confiera resistencia a los antibióticos que se ocupan y todas estas cosas se pueden ver
mediante el PCR
Entonces cuando se ocupa esta técnica se ocupa una muestra de adenion del estudio del
organismo que nos interesa ya sea el DNA de un ser humano, de un animal, de un
microorganismo, una TAC polimerasa, pero que tiene la particularidad de poder resistir
temperaturas altas, porq esta polimerasa en concreto debe resistir el calentamiento de la muestra
a temperaturas que bordean casi casi, los 100, 90, 95 grados celcius nuestras polimerasas no
resisten esas temperaturas porq nuestra temperatura es 37 entonces nuestro ADN polimerasas no
servirían para eso, pero si se ocupa una polimerasa de una bacteria que es termófila que se llama
termosacuatico que habita en geiseres o zonas que son sumamente cálidas, entonces ella si tiene
una polimerasa que resiste temperaturas altas y ella es la que se encarga de copiar los fragmentos
de ADN

Cuando ocurre la replicación

Un premier o praimer es un fragmento pequeño de ADN o un trocito de ADN que se va a unir a
una zona en concreto de la zona que el ADN polimerasa se va a encargar de copiar. Entonces es
como indicarle como que guía a la ADN polimerasa, como que le dice aquí puedes empezar a
copiar y aquí puedes terminar de copiar, entonces los premier lo que hacen es diseñar pequeños
fragmentos de ADN que se van a unir a los extremos de fragmentos de genoma o los fragmentos
de gen que a nosotros nos interesa, son pequeños fragmentos de ADN que nos delimita la zona
que ADN polimeraza va amplificar y obviamente necesitamos los nucleótidos, porq el DNA no se
genera a partir de nada. Recordar los monómeros que integran el polímero que es el ADN.

Como ocurre todo esto? Y porq necesitamos usar un ADN polimeraza que fuese resistente a estas
temperaturas porq el primer proceso de la CADENA DE ADN POLIMERAZA es separar.
Que es lo que mantiene unidas a estas dos hebras?. Puentes de hidrogenos.
Entonces para poder romper a estos puentes de hidrogeno, nosotros calentamos estas moléculas
a 94, 95 grados celcius y ahí se separan, posteriormente lo que uno hace es bajar la temperatura
para que los primer puedan unirse a los extremos de la región que queremos amplificar, y eso es
lo que se llama la etapa de hibrivizacion
por ultimo viene la etapa en que la ADN polimerasa si puede trabajar y para ello lo que se hace es
darles la temperatura optima y en el caso de las taptorimerazas es a 72 grados celcius.
Entonces fijarse se denatura el ADN polimerasa y hay una etapa de hibrivizacion en el cual se
añade y hay una etapa de extensión en la cual comienza trabajar el ADN polimeraza para copiar el
fragmento q nos interesa.

Lo que buscamos con la técnica de PCR es amplificar segmentos de ADN, hacer muchas copias de
segmentos de ADN
Que es lo que se persigue con la cromatografía? Separar distintos componentes de una mezcla de
sustancia
Que es lo que se persigue con lo electroflorensis? Separar un determinado tipo de molécula en
función de su tamaño o peso molecular.

Que es lo que hace uno, cuando ya ha hecho la PCR lo primero que nada es ver si resulto o no
porq a veces por más que uno trabaje de la manera más bacán a veces por algún factor la huea no
resulta, hay algún inhibidor de la pecera o pueden pasar muchas cosas. Entonces qué es lo que
hace uno electroforesis. La manera de saber si el fragmento de ADN que uno amplifico, luego de
ver si se amplifico o no, hay que cachar que si lo que se amplifico tiene el tamaño que a uno le
interesa. Normalmente uno tiene una idea de cuánto pesa el fragmento que a uno le interesa 500
pares de bases, que equivale a 500 nucleótidos o 300 y asi.

Como se visualiza esto gemelamente lo que se hace es marcar el ADN con algún tipo de marcador
que emite una fluorescencia cuando hacemos incidir sobre este marcador luz ultra violeta,
entonces uno pone el gel cuando ya ha hecho la electrofloresis en un equipo que se llama un
tránsito iluminador y luego ve si existen bandas que emitan la flourecencia que uno espera y
compara con el tamaño del patrón del peso molecular. Uno puede ir más allá, una cosa es el el
peso que tenga el fragmento, el tamaño y otra cosa es como es el ADN, como es la secuencia del
ADN de ese nucleótido, porq son dos cosas distintas y para saber cómo es la secuencia de
nucleótidos uno tiene que hacer un proceso que se denomina de secuenciación, cuando uno
utiliza este método, uno marca, existe la posibilidad de hacer una pecera especial en la cual uno va
incluyendo nucleótidos que están modificados y les falta un grupo OH que es vital para la unión de
nucleótidos siguientes, además de eso, estos nucleótidos modificados están marcados por un
floroplomo que es una sustancia que se le hace incidir luz de una determinada longitud de onda
emiten una luz de otra longitud de onda que podemos reconocer. Entonces lo que se hace es
hacer después una electroforesis especial que se hace en un capilar y esto se hace en un equipo
especial que se hace en una secuenciador de ADN este equipo tiene sensores en los cuales por
cada fragmento que va pasando va detectando la florecencia que va emitiendo desde los
fragmentos más pequeños hasta los mas grandes, vemos en donde se termino la secuenciación
porq se ha insertado uno de estos nucleótidos modificados.
El resultado final es un informe del cual obtenemos la flourecencia, que nos va a indicar cada uno
de los nucleótidos que habían en cada una de las posiciones de ese fragmento que amplificamos
entonces el resultado final es una serie de letras que nos van a indicar la base nitrogenada que
representa a cada nucleótido de ese fragmento de ADN entonces las secuencias de ADN se
representan asi TTATAGGAG etc. con esta info podemos reconstruir el árbol de la especie.

Clase 2: Membrana Plasmática

La célula está rodeada por una membrana que la separa de su ambiente, que controlar
selectivamente la entrada y salida de sustancias. Los organelos membranosos están formados por
membranas y gran parte de la maquinaría enzimática celular está asociada de una forma u otra
con membranas

Existen membranas:
Una membrana que es la membrana celular
Membrana externas como la membrana plasmática.
Membranas internas como la membrana nuclear y aquellas de los organelos membranosos.
Que componentes encontramos en este mosaico fluido que es la membrana?
Hay lípidos, tales como fosfolipidos, principales componentes de la membrana, licolipidos—que no
son otra cosa que lípidos sólidos, que son azucares y el colesterol que tiene una función bastante
importante en mantener la rigidez de la membrana.
Hidratos de carbono que pueden estar unidos a lípidos y a proteínas y proteínas que pueden ser
proteínas integrales, como aquellas que cruzan la membrana y que ayudan por ejemplo al
transporte de sustancia hacia el interior y hacia fuera y proteínas periféricas que están adosadas a
uno u otro lados de la membrana.

El componente principal de las membranas celulares, tanto de las externas como de las
membranas internas son los fosfolípidos que son moléculas de carácter anfipaticos.
Qué quiere decir que sean anfipaticos?
Tiene una parte que es atraída por el agua y una parte que es repelida por el agua, es decir una
porción hidrofilica y una porción hidrofolica.

Entonces estos fosfolipidos el modelo del mosaico de fluido dice que no están quietos en una
posición, sino que se mueven y tienen movimientos laterales de difusión lateral libres, son
bastante rápidos, es decir no están en una zona de la membrana y se quedan ahí para siempre,
sino que se están moviendo lateramente por la membrana. Poseen movimiento de rotación, ósea
que además de moverse hacia los lados también poseen giran sobre su propio eje, osea
movimiento de flexión y esto se refiere a las colas apolares de la porción hidrofobica que pueden
moverse en mayor o menor grado y también poseen un movimiento que se denomina Flip-Flop---
Flip sig desde la parte externa de la membrana hasta la parte interna y Flop--- es en reversa.

Los movimientos de Flip-Flop cuestan un montón que pasen espontáneamente, ocurren pero
ocurre a una tasa muy lenta, muy despacio.
Hidrofilica es la parte externa la que etsa en contacto con el medio extracelular y la que está en contacto con el
citoplasma. La que corresponde a las cabezas polares de los hidrofilicos.
Entonces existen proteínas que ayudan a pasar fosfolipidos de una cara a la otra cuando la célula
lo necesita, entonces si Flip es de afuera hacia a dentro esas proteínas se llaman flipasas y para
pasar de la cara interna a la externa se llamaran esas proteínas flopasas, y para pasar de dos caras
a la vez en un sentido se llamaran Escramblasas, son proteínas que pueden pasar fosfolipidos de la
cara interna a la externa y de la cara externa a la cara interna y de las dos a la vez.

Curiosamente las Filipasas y Flopasas gastan energía mientras que las escramblasas no gastan
ATP.
El colesterol, porq es importante el colesterol,
El colesterol nosotros principalmente lo asociamos a cosas malas pero para las membranas
celulares es bueno… Porque será? El colesterol en si es una molécula rígida porq posee una
estructura que posee varios anillos, es una molécula bastante rígida, pero el colesterol actúa de
manera diferente y esto puede ser pregunta de prueba según la temperatura en la que nos
encontremos.
Cuando uno tiene una membrana fosfolipidica si uno sube la temperatura que pasa con las
moléculas cuando le aumentan la temperatura uno, con el movimiento de las moléculas aumenta,
entonces si aumentamos la temperatura el movimiento entre los fosfolipidos aumenta y también
aumenta el espacio entre los fosfolipidos. Entonces si aumentamos la temperatura en general la
fluidez de la membrana aumenta y puede aumentar tanto que se disuelve. Si aumentamos la
temperatura demasiado la membrana se podría disolver y si bajamos la temperatura, baja el
movimiento entre las moléculas y la membrana puede pasar a lo contrario que a lo mejor pierda
demasiada fluidez y se torne demasiado rígida como para desempeñar bien sus funciones y eso es
cuando bajamos la temperatura, porq estos fosfolipidos tienden a empaquetarse cuando se baja la
temperatura y cuando sube la temperatura tienen a separarse y pueden separase demasiado.

El colesterol siendo una molécula rígida, que tiene un fosfolipido acá y otro al otro lado, entonces
siendo una molécula rígida es como que los fosfolipido no estuvieran bien agarrados a los
costados del colesterol y a una distancia prudente, entonces si en una membrana hay suficiente
colesterol,
¿Qué va a pasar cuando se suba la temperatura?
Tenderían los fosfolipidos agarrarse, pero como el colesterol los tiene agarrados, no se separan,
entonces a mayor temperatura el colesterol disminuye los fluidos y
¿Qué pasa al bajar la temperatura si el colesterol mantiene los fosfolipidos a una distancia
prudente?
Impiden que se empaquete demasiado, entonces aumenta la fluidez a una temperatura baja.

En el caso de los fosfolipidos tienen una cabeza polar (ver en el pawer)

Proteínas integrales, aquellas que cruzan la membrana.

Entonces los aminoácidos que están en el espesor de la parte hidrofobica… como son?
Aminoácidos Hidrofobicos, y los que soman hacia dentro, hacia el citoplasma o hacia afuera hacia
el espacio extracelular tienen que ser Hidrofilicos.
Existen proteínas periféricas que están hacia una cara u otra de la membrana.

Hidratos de carbono tienen que ver con varias funciones, pero una por ejemplo es actuar como
receptores químicos, ayuda, interviene en el reconocimiento entre células o en el reconocimiento
entre células y el medio exterior.

También los hidratados de carbono ayudan como un medio de protección. Cuando hablamos de
organismos patógenos, existen algunos microorganismos que poseen una capa de azucares como
gelatinosa una cosa mucosa que los rodea y los protege por ejemplo de la fagocitosis—(Los
glóbulos blancos, existen algunos de ellos que son especialistas en digerir bacterias, digerir
hongos, digerir partículas virales. Entonces este proceso por el cual lo digieren lo rodean con su
membrana plasmática lo incorporan, y luego con creen ustedes que lo enfrenta en el interior? :O
¿Cuáles son los organelos encargados de disolver en el interior?
R: Los lisosomas, en el interior el ambiente acido del lisosoma mas sus encimas liquidas, van a
degradar entonces esta partícula que ha sido fagocitada.
Existen microorganismos que tienen una capsula polisacárida que los protege de la fagocitosis, y si
no tienen esa capsula, son mucho menos agresivos que cuando la tienen a la hora de producir una
infección.
Modelo de mosaico fluido Propusieron el modelo de mosaico fluido, para explicar la organización
general de las membranas biológicas. Según este modelo:
• Las proteínas transmembrana y los lípidos se disponen formando un mosaico.
• Las membranas biológicas son estructuras fluidas.
• Las membranas son estructuras asimétricas.

Tenemos los azucares, unidos a una proteína, unidos a lípidos, existen proteínas transmembrana
que pueden desempeñar diferentes funciones y proteínas periféricas.
(Ver el Pawer)

Dentro de las funciones de las proteínas transmembranas, existen algunas que son
transportadoras que sig que sean transportadoras?
Que llevan moléculas hacia el interior de la célula, o que sacan moléculas del citoplasma hacia
afuera.
Estas proteínas transportadoras necesitan o no necesitan gasto de energía? Necesitan o no
necesitan gasto de ATP?

Si y No hay proteínas que gastan energía y otras que no. Las que NO gastan energía realizan un
tipo de transporte pasivo, las que SI gastan energía, realizan un transporte activo.
Que caso ocurre que se realiza este gasto pasivo?
Cuando va a favor de la gradiente de concentración
Para el transporte de sustancia a través de una membrana existen mecanismos diferentes, el
mecanismo o trasporte pasivo es a favor de gradiente, esto significa que transporta las moléculas
o los iones desde donde están en mayor concentración en menor concentración, por ejemplo: si
en el medio extracelular están muy concentrados y hay muy poquitos dentro de la célula, van a
tender a entrar naturalmente hacia la célula, hacia el citoplasma y eso la misma diferencia de
concentración es la que aporta entre comillas la energía necesaria para el proceso, por eso no es
necesario que la célula gaste energía, gaste ATP y cuando hay proteínas que ayudan a eso,
hablamos de difusión facilitada y estas proteínas que guían estos procesos se llaman proteínas de
canal.
Pero también existen algunas moléculas que pueden pasar sin la ayuda de proteínas a través de la
membrana, sencillamente pueden cruzarla directamente, por ejemplo proteínas pequeñas como
son los gases, el oxigeno el dióxido de carbono, también incluso Letanol.
Moléculas más grandes, por ejemplo las glucosas o moléculas que tienen una carga eléctrica como
son los iones ellas sí que necesitan proteínas que las ayuden a cruzar la membrana.
También existe un Trasporte activo.--- en contra de la gradiente( menos concentrada hacia la
zona que está más concentrada la partícula)
y hablamos de un transporte activo mediado por proteínas o también cuando son partículas muy
grandes de transporte de masas en los cuales ya no es solo una proteína la que lleva a cabo el
transporte sino que es la membrana celular la que se deforma y forma un tipo de vesícula que va a
incorporar la partícula en la zona.

Que va a pasar si ponemos una célula por ejemplo: una célula mamífera o un elemento figurado
de la sangre, si lo ponemos en un medio hipertónico, donde estos solutos osmóticamente activos
estén mas concentrados que en el espacio intracelular, sucede que el agua sale y la célula se
revuelve como pasa y a eso se le llama crenacion
En un medio hipertónico entonces una célula tiende a perder agua y se arruga y a esto le decimos
crenación. Pasa desde el espacio intercelular dentro de la célula hacia el exterior.
Pero para prevenir la ruptura por ejemplo por procesos osmóticos existen algunos tipos de células
que tienen una cubierta, una coraza que es la pared celular, en crenacion en el caso de esta huea
no hay ruptura.
Pero que pasa cuando ocurre lo inverso?
Estamos en un medio hipotónico ahí el agua empieza a entrar hacia la célula pasivamente y ocurre
lo que se denomina la sitolisis, que no es otra cosa que la ruptura de la célula, también conocido
como lisis osmótica. Entonces para prevenir esto hay algunas células como son las células
vegetales o las células bacterianas que poseen pared celular que las protege y amortiguan esta
ruptura por diferencias de la tonicidad del medio.

Tenemos el medio hipertónico, las células sin pared que tienden a crenarse y el medio hipotónico
que tienden a lisarse a sufrir crisis osmótica.
Isotonico que la concentración de estos solutos osmóticamente activos son iguales mantienen la
forma y no le pasa nada.
Las proteínas pueden facilitar el transporte pasivo de moléculas a través de la membrana y
existen básicamente dos tipos de moléculas transportadoras unas son las permeasas que
funcionan mediante cambios conformacionales en los cuales se unen al soluto y esto produce
cambios en la forma.
También existen proteínas que tienen una cavidad en el centro, como si tuvieran un túnel, y estas
proteínas son reguladas por la unión de moléculas especificas que le indican ábrete sésamo o
mantente cerrada, estas moléculas que le indican si debe estar en un medio abierto o cerrado se
llaman ligamos, y pueden ser extracelulares o intracelulares, también es posible que una proteína
de canal se abra por cambios de voltaje en la membrana y esto es muy importante en la
transmisión del pulso nervioso.

Principalmente lo más importante que tienen que grabarse que en este caso es favor de
gradiente y no hay gasto de energía.
Existen moléculas pequeñas que pasan libremente a través de la membrana, el agua también lo
puede hacer pero pasa bastante lento, por ello también existen proteínas que la ayudan a pasar
que son las aguaporinas.

Existen también otro tipo de proteínas que pueden ayudar entonces al paso de sustancias que son
las proteínas de canal y que tienen una especie de túnel en el medio, que tienen una cavidad que
evitan ciertas moléculas como por ejemplo: Iones tengan que ser rechazadas por esta parte que es
hidrofobica, por esta zona apolar, entonces alternan el mercado abierto y cerrado

También existen las permiasas que se encargan de pasar moléculas de un costado a otra mediante
cambios conformacionales pero que no tienen precisamente esa forma de túnel, esa cavidad como
un tunel, que tiene las proteínas de canal. Todo esto funciona sin gasto de ATP

Ahora vamos al transporte activo.

Acá la gran diferencia con respecto al transporte pasivo al transporte activo es que aquí es en
contra gradiente, es decir de una zona de donde hay menor concentración a una zona donde hay
mayor concentración, es decir forzamos aumentar la concentración de una sustancia hacia un lado
de la membrana y para ello tenemos que agregar energía, por lo tanto esto se realiza con gasto de
ATP

Existe transporte activo primario en el cual es la proteína misma la que gasta ATP y también existe
transporte activo que se denomina secundario en el cual NO es la proteína misma la que está
realizando el transporte la que gasta el ATP sino que es otra proteína que trasporta una sustancia
determinada la acumula en un comportamiento y posteriormente esa diferencia de gradiente que
se va creando con la primera proteína la que aprovecha la segunda proteína para transportar otra
cosa.
Entonces es posible que el transporte activo secundario ocurra con una molécula que va en un
sentido y la otra en otro sentido y eso se llama antiporte o contratransporte, una molécula va
hacia dentro y otra hacia afuera.
También es posible que ocurra el transporte de dos moléculas en el mismo sentido, por ejemplo
las dos hacia el interior de la celula y eso es lo que se denomina cotransporte o sinporte.

Por ejemplo para poder ingresar glucosa dentro del esterocito dentro de las células intestinales. El
mecanismo que utiliza el intestino para poder ingresar esa glucosa es un mecanismo de transporte
activo en este caso secundario. Como funciona esto? Aquí existe una bomba de sodio y potasio, y
que es lo que hace esta huea? El sodio que está en una concentración dada en la célula lo va
sacando, entonces mantiene una concentración de sodio que es mucho más baja aquí que en el
lumen del intestino que la cavidad del intestino, entonces naturalmente el sodio debería entrar.
Entonces esta proteína gasta ATP en este proceso, por eso esta haciendo un transporte activo
primario. Pero esa diferencia de sodio de haber mucho sodio acá y poco sodio al otro lado es
provechado por otra proteína para ingresar junto con el sodio aprovechándose de esta diferencia
de concentración a la glucosa y esto sería un transporte activo secundario, porq se aprovecho de
la energía de ATP que ocupo esta proteína de aca xd

Transporte de masas: lo que se intenta es ingresar partículas grandes o grandes cantidades por
ejemplo de fluidos o de algún solido.
un proceso ya se nombre que era Fagocitosis que en nuestro cuerpo es realizado por varios tipos
de glóbulos blancos, Monocitos, los Neutrofilos realizan este tipo de proceso, en el cual ellos
rodean con su membrana plasmática algo que les interesa degradar, lo incorporan al citoplasma,
lo fusionan con los lisosomas y ahí las encimas que trabajan el pha o degradan y se aprovechan
todo lo que se pueden aprovechar de ella y además se pude eliminar un potencial patógeno.

También existe la pinocitosis, en la cual hay células que constantemente están captando líquidos,
del medio que las rodea y fabrican una vesícula con la ayuda de una proteína que se llaman las
clatrinas—son unas proteínas que forman una especia de malla, como una red, entonces lo que
ocurre, cuando va a producirse una vesícula de este tipo las clatrinas ya están todas en el
citoplasma ya están separadas entonces comienzan ajustarse y las membranas que normalmente
es más o menos lineal. Lo que hacen las clatrinas la van deformando de apoco llega una y se une la
siguiente y no se unen paralelamente la una con la otra, sino que se unen con un cierto ángulo
entonces que es lo que ocurre, con este ángulo van poquito a poquito formando una especie de
esfera, se van juntando y formando una malla esférica y esa malla esférica es la que deforma la
membrana para que puedan ingresar las partículas que les interesa, esa partícula puede ser un
microorganismo en fagocitosis y blabla