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DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°8

ESTUDIANTES:

POLO MESA DANNA MARCELA

SIERRA GONZÁLEZ LAURA VANESSA

VALLECILLA GUTIÉRREZ JOSÉ DANIEL

DOCENTE: LUZ ELENA OTERO ORTEGA

ASIGNATURA: BIOQUÍMICA I

MEDICINA (I SEMESTRE)

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

2022
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INTRODUCCIÓN

Las proteínas son las macromoléculas que llevan a cabo prácticamente todas las

actividades de una célula; son las herramientas moleculares y las máquinas que hacen que

las cosas sucedan. Cada proteína tiene una estructura única y definida que le permite llevar

a cabo una función particular. (Karp et al., 2014).Las principales propiedades de las

proteínas, que permiten el correcto desempeño de sus funciones son la estabilidad y la

solubilidad. La primera hace referencia a que las proteínas deben ser estables en el medio

en el que estén almacenadas o en el que desarrollan su función, para que de este modo no se

generen contratiempos en el organismo. En cuanto a la solubilidad, se refiere a que cada

proteína tiene una temperatura y un pH que se deben mantener para ser estables (Proteínas,

2017).

Las proteínas se encuentran en diferentes organismos y especies, un ejemplo de ella es

la albúmina, una proteína producida por el hígado que ejerce diversas funciones en el

organismo, como transportar nutrientes por la sangre, combatir radicales libres y fortalecer

el sistema inmunológico. La principal fuente de albúmina es el huevo (Albúmina de huevo,

n.d.).

En la práctica de laboratorio realizada se buscó caracterizar proteínas en albúmina de

huevo, mediante algunos reactivos tales como Biuret, HNO3, alcohol y NaOH los cuales

ayudaron a la determinación de dichas proteínas.

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OBJETIVO

● Caracterizar proteínas en la solución de albúmina mediante ensayos químicos con

reactivos específicos.

MATERIALES Y REACTIVOS

● Tubos de ensayo
● Espátula
● Beacker
● Baño de María
● Plancha de calentamiento
● Pinzas para tubo de ensayo
● Gradilla
● Agua
● Reactivo de Biuret
● HNO3 concentrado
● Alcohol absoluto
● Solución de NaOH al 10%
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METODOLOGÍA

Preparación de la muestra solución Ovoalbúmina:

1. Clara de huevo + 80 mL de H20

2. Se agitó y se separó la solución en diferentes tubos de ensayo para los siguientes

procedimientos;

Reacción Xantoproteica:

1. 2 mL de solución ovoalbúmina + 5 gotas de HN03

Reacción de Biuret:

1. 2 mL de solución ovoalbúmina + 10 gotas de NaOH + 4 gotas de CuSO4

Solubilidad:

1. 2 mL de solución de ovoalbúmina + 3 mL de etanol.

Desnaturalización:
−−−−→
1. 1mL solución de ovoalbúmina 🔺
Calentar hasta coagulación

2. 1 mL de solución de ovoalbúmina + 1 gota de HCL

3. 1 mL de solución de ovoalbúmina + 1 gota de NaOH

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Se realizaron las respectivas anotaciones y observaciones en cada uno de los

procedimientos.
RESULTADOS
Reacción xantoproteica:

2 mL de solución ovoalbúmina + 5 gotas de HN03

Figura Observaciones

Antes
Se logró observar que al momento
de agregarle las gotas de HNO3 a la
ovoalbúmina no tuvo algún cambio
significativo.

Después
Se logró observar que al momento
de agitar la solución de ovoalbúmina
con las gotas de HNO3 tomó un
color amarillo tenue y un poco
espumoso.

Tabla 1. Resultados de la reacción xantoproteica.

Reacción de Biuret:

2 mL de solución ovoalbúmina + 10 gotas de NaOH + 4 gotas de CuSO4

Figura Observaciones

Antes Se observó que al momento de

agregar las gotas de NaOH y las de
CuSO4 a la solución ovoalbúmina,
se formó un color azul y un poco
morado en la superficie de la
muestra.
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Después
Se logró observar que después de
agitar todas las sustancias, se formó
un color violeta.

Tabla 2. Resultados de la reacción de Biuret.

Solubilidad:

2 mL de solución de ovoalbúmina + 3 mL de etanol

Figura Observaciones

Antes
Se logró observar que al
momento de agregar etanol a la
solución de ovoalbúmina se
formó un precipitado al fondo,
antes de agitar.

Después
Después de agitar la solución de
ovoalbúmina con el etanol, se
logró observar que la sustancia se
colocó de un color
completamente blanco.

Tabla 3. Resultados de la solubilidad.

Desnaturalización:

Figura Observaciones
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En el caso de la coagulación, dónde se

encontraba la solución de ovoalbúmina
solamente, se logró observar que después de
pasar el tubo de un lado a otro en la llama, la
sustancia adquiere un color completamente
blanco.

En el caso de la ovoalbúmina mezclada con las

gotas de HCL, se logró observar que se formó
una especie de precipitado parecido a unos
grumos de color blanco.

En este último, se alcanzó a observar que

después de agitar la sustancia, no hubo ningún
tipo de reacción entre el NaOH y la solución de
ovoalbúmina.

Tabla 4. Resultados de la desnaturalización.

ANÁLISIS

Prueba xantoproteica:

En esta prueba el color que debió resultar, es un color amarillo intenso, sin

embargo, en nuestra prueba quedó blanco y con un color amarillo tenue al fondo, esto se

puede explicar porque aunque los anillos aromáticos se notaron tal vez no lo hicieron lo

suficiente, esto se podría deber a un margen de error en el laboratorio, por ejemplo que no

se puso suficiente ovoalbumina o HNO3, también puede ser porque no estaban bien lavados

los tubos de ensayo, no hay una respuesta clara de porque exactamente, pero se puede decir

que la prueba fue parcialmente positiva (Reacción_xantoproteica, 2022).

Reacción de Biuret:
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Esta reacción se produce gracias a los péptidos y las proteínas, ya que se debe a la

presencia del enlace peptídico CO-NH que al liberar los aminoácidos, este enlace se

destruye (IES DE QUIROGA, 2017).

El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (III) y Sosa; el Cu en un medio alcalino

que se coordina con los enlaces peptídicos formando el complejo color violeta que se pudo

observar (IES DE QUIROGA, 2017).

Solubilidad:

En esta prueba, en vez de solubilizarse la proteína se desnaturalizó, ya que al añadir

etanol a la proteína pasa lo mismo que al cocinar un huevo, y este cambia de color a blanco,

esto se da porque las proteínas del huevo se desenrrollan y cambian de estructura (Alvarez,

G. 2017).

Desnaturalización:

● Sólo albúmina:

En esta parte la proteína se desnaturaliza por las altas temperaturas a las que es

sometida, esto se debe a que la energía cinética de las moléculas aumenta y esto hace que la

envoltura acuosa de las proteínas se desorganiza y por lo tanto se desnaturaliza, además

este aumento de temperatura rompe las interacciones que son débiles y hace que el interior,

que es hidrofóbica a interacciones con el medio acuoso, de esta manera, se produce

agregación y precipitación de la proteína (González, J. M. (s. f.)).

● Albúmina + HCL:
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El HCL es un ácido, por ende, el pH de la solución final será ácido, a valores muy

extremos de pH, la proteína pierde su configuración tridimensional, ya que el exceso de

iones H+ desestabiliza las interacciones de la proteína y por lo tanto se desnaturaliza.

Además de esto en medio ácido se afecta la carga eléctrica de los grupos de las

cadenas laterales de los aminoácidos, esto elimina las interacciones electrostáticas que

estabilizan su estructura y provoca la desnaturalización (González, J. M. (s. f.)).

● Albúmina + NaOH:

Así como en medio ácido las proteínas se desnaturalizan, igualmente pasa en medio

básico, ya que el cambio en el pH rompe los enlaces por puente de hidrógeno y altera los

enlaces iónicos (puentes salinos), por lo que la proteína se desnaturaliza (González, J. M.

(s. f.)).

CUESTIONARIO

1. Define que es punto isoeléctrico de una proteína y que utilidad tiene este.
Las moléculas complejas, como las proteínas, se combinan con iones hidrógeno y

con otros iones, dando lugar a la carga neta de la molécula.Los aminoácidos y proteínas

pueden presentar diferentes formas ionizadas en solución debido a la presencia en sus

moléculas de grupos de carácter ácido o básico, y esta forma es dependiente del pH. Se

observa así que, según el valor del pH del medio, los aminoácidos pueden existir como

iones con diferentes cargas netas (Química Bio-Orgánica ITS Paysandú 3°BI -2020, n.d.).
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A la concentración de iones hidrógeno, o al pH, para el cual la concentración del ion

híbrido de una proteína es máxima y el movimiento neto de las moléculas de soluto en un

campo eléctrico es prácticamente nulo, se le denomina punto isoeléctrico.Es otras palabras

se puede definir al punto isoeléctrico (pI) como el pH al que una molécula tiene carga

eléctrica neta cero. La carga neta de una proteína se ve afectada por el pH de su medio y

puede adquirir una carga más positiva o negativa debido a la ganancia o pérdida de

protones (H+). (Carga de Las Biomoléculas, n.d.).

El pI o punto isoeléctrico es una propiedad que no solo se da en las proteínas,

también es propio de la mayoría de moléculas; El pI depende de la estructura química y de

los grupos ionizables de cada molécula.

Los puntos isoeléctricos proporcionan información útil para razonar sobre el

comportamiento de los aminoácidos y proteínas en solución. La función del punto

isoeléctrico tiene utilidad en la realización de pruebas moleculares como la electroforesis

(Punto Isoeléctrico - EcuRed, 2022).

2. Describa el fundamento de la electroforesis y la cromatografía como método

de estudio de las proteínas y su utilidad en el campo de la medicina.

El constante incremento en las aplicaciones de proteínas en diversos campos como

la medicina; ha generado un interés especial en el desarrollo de procesos para el análisis y

purificación de proteínas.En biología molecular existe una gran cantidad de técnicas que

requieren el uso de la electroforesis y la cromatografía, estas han sido ampliamente usadas

para llevar a cabo análisis médicos moleculares debido a su versatilidad (Mayolo-Deloisa

et al., 2012).
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Las proteínas, que pueden tener una carga positiva o negativa,suelen ser de carga

neutra, aquí la electroforesis se realiza un pretratamiento con detergentes, como el

dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se homogeneizan

las proteínas de la muestra y todas migrarán hacia el polo positivo; sólo se separarán por

tamaño.El principio de la electroforesis consiste en la migración proporcional de las

moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o

tamaño; movimiento generado por el campo eléctrico (Separación de proteínas por

cromatografía de exclusión molecular, n.d.).

Por otro lado la cromatografía una técnica también usada para la separación de

proteínas; se fundamenta en así; “La separación de los diferentes componentes de una

mezcla que se encuentran en un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones

de los solutos a medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia líquida o sólida (la

fase estacionaria). Las diversas técnicas para la separación de mezclas complejas se

fundamentan en la diversidad de afinidades de las substancias por un medio móvil gas o

líquido y un medio absorbente estacionario (papel, gelatina, alúmina o sílice) a través del

cual circulan.” (Cromatografía. Fundamento de La Técnica, 2022). En otras palabras se

puede definir a la cromatografía como un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la

separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada

componente en otra sustancia.

La cromatografía tiene claras ventajas en la purificación de proteínas,

particularmente las de interés farmacéutico. La cromatografía ha sido utilizada con éxito

para determinar cambios conformacionales y estabilidad en proteínas (Mayolo-Deloisa et

al., 2012).
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Tanto la técnica de electroforesis y cromatografía comprenden particularidades que

convergen, estas se identifican como un área de oportunidad la posibilidad de establecer

procesos generales para el análisis de los cambios conformacionales y estabilidad de

proteínas tanto en el ámbito industrial y médico-científico.

3.Consulte de qué manera se hace la determinación de proteínas en el

laboratorio clínico. Qué utilidad tiene esto como prueba diagnóstica.

La identificación de las proteínas, el conocimiento de su estructura

primaria,secuencia, la identificación de sus modificaciones postraduccionales, su

localización y la cuantificación de la expresión proteica se denomina proteómica, la

proteómica es un campo de la ciencia molecular que busca analizar y determinar las

estructuras proteicas (Pando-Robles et al., 2009).

La determinación de proteínas en el aspecto clínico tiene distintas funcionalidades

como el análisis molecular de algunas anomalías, así como la determinación de métodos de

tratamiento o diagnóstico de posibles enfermedades, dentro de las técnicas generalmente

usadas están el PCR, la cromatografía y electroforesis que como se había mencionado con

anterioridad nos permite conocer un análisis de ciertas características de proteínas

responsables de algunas funciones y regulación de los procesos celulares y patológicos.

La identificación de las proteínas que intervienen en las diversas etapas de una

enfermedad ayudará a comprender las bases moleculares y la naturaleza de dichas

anomalías; la determinación de proteínas pueden utilizarse como biomarcadores de

diagnóstico o pronóstico de la enfermedad (Pando-Robles et al., 2009).

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CONCLUSIÓN

En este informe de laboratorio se logró el objetivo principal del informe, debido a

que, logramos caracterizar esas proteínas de la solución de albúmina, mediante la

realización de distintos experimentos químicos, utilizando los respectivos reactivos. Por

otra parte, mediante la investigación para analizar cada una de las situaciones o resultados

dados en la experimentación, adquirimos los conocimientos necesarios para explicar todos

los hechos ocurridos, y así poder ver y entender, el por qué nos dió de tal forma el resultado

al momento de poner en práctica la metodología, como en el caso de mezclar ovoalbúmina

con etanol y nos dió de un color totalmente blanco, debido a que el etanol ha

desnaturalizado la sustancia y esta cambia su estructura, y ya por último, se tuvieron en

cuenta los distintos márgenes de error para la explicación de todas las reacciones químicas.

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