Microbiología General

1.1Historia, taxonomía, morfología y fisiología de las bacterias y

patogenicidad microbiana.
Louis Pasteur
padre de la microbiología.
1. Ha propuesto los principios de la fermentación para la conservación de alimentos
2. Introdujo técnicas de esterilización y desarrolló un esterilizador de vapor, un horno de
aire caliente y una autoclave.
3. Describió el método de pasteurización de la leche.
4. También contribuyó al diseño de las vacunas contra varias enfermedades como el
ántrax, el cólera aviar y la rabia.
5. Refutó la teoría de la generación espontánea de la enfermedad y postuló la "teoría de
los gérmenes de la enfermedad". Afirmó que la enfermedad no puede ser causada por el
mal aire o el vapor, sino que es producida por los microorganismos presentes en el aire
6. Concepto de medios líquidos: utilizó caldo nutritivo para cultivar microorganismos.
7. Fue el fundador del Instituto Pasteur, París.

Robert Koch
1. Utilizó medios sólidos para el cultivo de bacterias
2. También introdujo métodos para el aislamiento de bacterias en cultivo puro.
3. Método de gota colgante descrito para probar la motilidad.
4. Bacterias descubiertas como los bacilos del ántrax, los bacilos de la tuberculosis y los
bacilos del cólera.
5. Introdujo técnicas de tinción mediante el uso de tinte de anilina.
6. Fenómeno de Koch: Robert Koch observó que los conejillos de indias ya infectados con
bacilos tuberculosos desarrollaban una reacción de hipersensibilidad cuando se les
inyectaba bacilos tuberculosos o su proteína. Esta reacción se denomina fenómeno de
Koch.
7. Postulados de Koch:
De acuerdo con los postulados de Koch, un microorganismo puede ser aceptado como
agente causal de una enfermedad infecciosa solo si se cumplen las siguientes condiciones:
i. El microorganismo debe estar constantemente asociado a las lesiones de la enfermedad.
ii. Debe ser posible aislar el organismo en cultivo puro de las lesiones de la enfermedad.
iii. La misma enfermedad debe producirse cuando el microorganismo aislado se inocule en
un animal de laboratorio adecuado.
iv. Deberá ser posible volver a aislar el organismo en cultivo puro de las lesiones
producidas en los animales de experimentación. Posteriormente se introdujo un quinto
criterio adicional, que establece que los anticuerpos contra el organismo causante deben
ser demostrables en el suero del paciente.

Paul Ehrlich
1. Fue el primero en informar sobre la naturaleza acidorresistente del bacilo tuberculoso.
2. Desarrolló técnicas para teñir tejidos y células sanguíneas.
3. Propuso una interacción toxina-antitoxina llamada fenómeno de Ehrlich y también
introdujo métodos para estandarizar toxina y antitoxina
4. Propuso la "teoría de la cadena lateral para la producción de anticuerpos".
5. Descubrió el 'salvarsán', un compuesto arsenical (bala mágica) para el tratamiento de la
sífilis, de ahí que se le conozca como el padre de la quimioterapia.
6. La bacteria 'Ehrlichia' lleva su nombre.

Otros contribuyentes importantes en microbiología

1. Antonie Philips van Leeuwenhoek: Descubrió el microscopio de lente única y nombró a
los organismos como "pequeños animálculos".
2. Edward Jenner: Desarrolló la primera vacuna del mundo, la vacuna contra la viruela
mediante el uso del virus de la viruela bovina.
3. Joseph Lister: Es considerado el padre de la cirugía antiséptica. Usó ácido carbólico
durante la cirugía.
4. Hans Christian Gram: Desarrolló una 'mancha de Gram'.
6. Ernst Ruska: Fue el fundador del microscopio electrónico.
7. Alexander Fleming: Descubrió el antibiótico penicilina.
8. Elie Metchnikoff: Describió la fagocitosis y denominó fagocitos.
9. Kleinberger: Describió la existencia de las formas L de las bacterias.
10. Barbara McClintock: Describió los transposones.
11. Walter Gilbert y Frederick Sanger: fueron los primeros en desarrollar (1977) el método
de secuenciación del ADN.
12. Karry B Mullis: Descubrimiento de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

TAXONOMÍA BACTERIANA
La clasificación de los seis reinos de Cavalier-Smith (1998) es la clasificación taxonómica
más reciente y ampliamente extendida.
Divide a los organismos en 6 reinos Bacterias, Protozoos, Chromista, Plantae, Fungi y
Animalia.
Principio utilizado para la clasificación bacteriana.
1. Clasificación filogenética: Se trata de una clasificación jerárquica que representa una
disposición ramificada en forma de árbol; Se emplea una característica (o rasgo) para
la división en cada nodo del árbol.
2. Clasificación adansoniana (o fonética): Para evitar el uso de características
ponderadas, Michel Adanson propuso un esquema que clasifica los organismos en
función de dar el mismo peso a cada carácter del organismo. Este principio se utiliza
en taxonomía numérica.
3. Clasificación molecular: Basada en la relación genética (contenido de guanina +
citosina) de diferentes organismos.

MICROSCOPÍA
Un buen microscopio debe tener tres propiedades:
1. Buena resolución: El poder de resolución se refiere a la capacidad de producir imágenes
separadas de objetos colocados muy cerca para que puedan distinguirse como dos
entidades separadas.
2. Buen contraste: Esto se puede mejorar aún más tiñendo la muestra.
3. Buen aumento: Esto se logra mediante el uso de lentes cóncavas.
 Microscopio de campo claro o de luz
El microscopio de campo claro o de luz forma una imagen oscura sobre un fondo más
brillante.
Microscopio de campo oscuro
• Principio: En el microscopio de campo oscuro, el objeto aparece brillante sobre un fondo
oscuro. Esto es posible gracias al uso de un condensador especial de campo oscuro
• Aplicaciones: Se utiliza para identificar las células vivas no teñidas y las bacterias
delgadas como las espiroquetas que no se pueden visualizar con microscopía óptica.
Microscopio de contraste de fase
Se utiliza para visualizar las células vivas creando diferencias en el contraste entre las
células y el agua. Convierte las ligeras diferencias en el índice de refracción y la densidad
celular en variaciones fácilmente detectables en la intensidad de la luz. Es útil para
estudiar:
• Motilidad microbiana
• Determinación de la forma de las células vivas
• Detección de componentes bacterianos como endosporas y cuerpos de inclusión.

microscopio de fluorescencia:
Principio del microscopio de fluorescencia:
Cuando los tintes fluorescentes se exponen a los rayos ultravioleta (UV), se excitan y se
dice que son fluorescentes, es decir, convierten estos rayos invisibles de longitud de onda
corta en luz de longitudes de onda más largas (luz visible).
Aplicaciones: El microscopio de epifluorescencia tiene las siguientes aplicaciones:
• Autofluorescencia, cuando se coloca bajo una lámpara UV, por ejemplo, Cyclospora
• Microbios recubiertos con colorante fluorescente, por ejemplo, naranja de acridina para
parásitos de la malaria (QBC) y fenol de auramina para M. tuberculosis.
• Inmunofluorescencia: Utiliza anticuerpos marcados con colorante fluorescente para
detectar antígenos de superficie celular o anticuerpos unidos a antígenos de superficie
celular. Hay tres tipos: FI directo, FI indirecto y citometría de flujo.
 Microscopio electrónico
Fue inventado por Ernst Ruska en 1931. Se diferencia del microscopio óptico por varios
aspectos (tabla que se muestra a continuación). Hay dos tipos de EM:
1. EM de transmisión (tipo MC, examine la estructura interna, resolución 0.5 nm, da una
vista de 2 dimensiones)
2. Escaneo EM (examinar las superficies, resolución 7 nm, da una vista tridimensional)

Principio del microscopio electrónico de transmisión

Preparación de muestras: Las células se someten a los siguientes pasos para preparar
muestras muy delgadas (de 20 a 100 nm de espesor)
• Fijación: Las células se fijan mediante el uso de glutaraldehído o tetróxido de osmio para
su estabilización.
• Deshidratación: A continuación, la muestra se deshidrata con disolventes orgánicos (por
ejemplo, acetona o etanol).
• Incrustación: La muestra se incrusta en un polímero plástico y luego se endurece para
formar un bloque sólido. La mayoría de los polímeros plásticos son insolubles en agua; por
lo tanto, la deshidratación completa de la muestra es imprescindible antes de la inclusión.
• Corte: A continuación, la muestra se corta en rodajas finas con un cuchillo
ultramicrotomo y las rodajas se montan en un portaobjetos metálico (cobre).
•Técnica de grabado por congelación: Es un método alternativo para la preparación de
muestras para visualizar los orgánulos internos dentro de las células. Las células se
congelan rápidamente, luego se calientan → fracturan con un cuchillo, exponiendo los
orgánulos internos → sometidas a sublimación → sombreadas por un recubrimiento con
platino y carbono.
Las medidas para aumentar el contraste de EM incluyen:
• Tinción con soluciones de sales de metales pesados como citrato de plomo y acetato de
uranilo
• Tinción negativa con metales pesados como ácido fosfotúngstico o acetato de uranilo.
• Sombreado: La muestra se recubre con una película delgada de platino u otro metal
pesado en un ángulo de 45 ° para que el metal golpee al microorganismo en un solo lado
 TÉCNICAS DE TINCIÓN
La tinción es necesaria para producir contraste de color y, por lo tanto, aumentar la
visibilidad del objeto. Antes de la tinción, se realiza la fijación del frotis al portaobjetos:
• La fijación con calor se realiza generalmente para los frotis bacterianos calentando
suavemente con llama una película de bacterias secadas al aire
• Fijación química como etanol, ácido acético, cloruro de mercurio, formaldehído, metanol
y glutaraldehído. Esto es útil para el examen de frotis de sangre.
Técnicas de tinción utilizadas en microbiología
1. Tinción simple: Los tintes básicos como el azul de metileno o la fucsina básica se utilizan
como tinciones simples. Proporcionan el contraste de color, pero imparten el mismo color
a todas las bacterias en un frotis.
2. Tinción negativa, por ejemplo, tinta china o nigrosina. El fondo se tiñe de negro,
mientras que las bacterias no teñidas se destacan en contraste. Esto es muy útil en la
demostración de cápsulas bacterianas que no absorben manchas simples.
3. Métodos de impregnación (por ejemplo, plata): Se utilizan para la demostración de
estructuras delgadas como flagelos bacterianos y espiroquetas

Pared celular bacteriana

La pared celular es una estructura dura y rígida que rodea a la bacteria. Además de
proporcionar protección y rigidez, ciertas partes de la pared celular (por ejemplo, el LPS)
son inmunogénicas y actúan como factor de virulencia.
• El peptidoglicano es el componente principal de la pared celular, lo que la hace rígida.
Está compuesto por unidades alternas de moléculas de ácido N-acetil murámico (NAM) y
N-acetilglucosamina (NAG); entrecruzados entre sí a través de cadenas laterales de
tetrapéptidos y puentes de pentaglicina.
• Las bacterias grampositivas tienen un peptidoglicano más grueso y contienen ácido
teicoico
• La capa de la lata de bacterias gramnegativas es delgada y contiene partes adicionales
como (1) membrana externa, (2) lipopolisacárido (LPS) que a su vez consiste en (i) lípido A
o endotoxina, (ii) polisacárido central, (iii) cadena lateral O.
 Otras partes de la célula bacteriana.
Inclusiones intracitoplasmáticas.
Son los sitios de almacenamiento de nutrientes/bacterias, formados en condiciones de
deficiencia nutricional:
• Cuerpos de inclusión orgánicos, ejemplos incluyen gránulos de glucógeno y gránulos de
butirato de polihidroxilo.
• Cuerpos de inclusión inorgánicos, los ejemplos incluyen: ○ Polimetafosfato o volutina o
gránulos metacromáticos en C. diphtheriae.
○ Gránulos de Suflur que se encuentran en Actinomyces.
Nucleoide. Las bacterias no tienen un núcleo verdadero; Pero el material genético se
encuentra en una región de forma irregular llamada nucleoide.
• No hay membrana nuclear ni nucléolo y carece de proteínas básicas.
• Poseer un solo cromosoma haploide, compuesto por ADN ds circular súper enrollado
(excepto dos cromosomas en Vibrio).
• El ADN bacteriano se divide por fisión binaria simple.
• El nucleoide se puede ver por microscopía electrónica o al tingarse con la tinción de
Feulgen
• Las bacterias también poseen ADN extracromosómico llamado plásmidos.
Cápsula y capa de limo: Algunas bacterias poseen una capa de material viscoso amorfo
que se encuentra fuera de la pared celular llamada glicocálix, que puede estar bien
organizada (cápsula) o material suelto desorganizado (capa de limo). Algunas bacterias
pueden poseer tanto la cápsula como la capa de limo, como en el caso de Streptococcus
salivarius.

Flagelos Los flagelos son apéndices filiformes, que sobresalen de la pared celular,
compuestos por subunidades proteicas llamadas flagelina. Consta de tres partes:
filamento, kook y cuerpo basal.
• Tamaño: miden de 5 a 20 μm de longitud y 0,01 a 0,02 μm de grosor
• Son órganos de locomoción, confieren motilidad a las bacterias.
Fimbrias o Pili.
Muchas bacterias gramnegativas y algunas grampositivas poseen apéndices cortos, finos,
parecidos a pelos, que son más delgados que los flagelos y no están involucrados en la
motilidad, llamados fimbrias o pili. Miden 0,5 μm de largo y 10 nm de grosor:
• Los pili están formados por una proteína llamada pilina
• Son antigénicos; sin embargo, los anticuerpos contra los antígenos fimbriales no son
protectores.
• Funciones: Las fimbrias se denominan el órgano de adhesión. Esta propiedad potencia la
virulencia de las bacterias. ○ Ciertas fimbrias llamadas pili sexuales también ayudan en la
transferencia de genes bacterianos. ○ Las fimbrias no están relacionadas con la motilidad,
se pueden encontrar tanto en organismos móviles como en organismos no móviles.

Formas atípicas de bacterias

• Formas de involución: Formas hinchadas y aberrantes de bacterias (por ejemplo,
Gonococci y Yersinia pestis) en cultivos envejecidos
• Bacterias pleomórficas: Diferentes formas y tamaños de células individuales, por
ejemplo, Proteus y Yersinia pestis

Esporas bacterianas
Las esporas son una etapa de reposo (o latente) altamente resistente de las bacterias que
se forman en condiciones ambientales desfavorables como resultado del agotamiento de
nutrientes exógenos.
• Estructura de una espora: De la parte más interna hacia la más externa, las capas son
núcleo→ corteza→ capa→ exosporio
• Agentes esporicidas: Las esporas son altamente resistentes. Solo se dispone de métodos
de esterilización limitados para matar las esporas

FISIOLOGÍA DE LAS BACTERIAS (CRECIMIENTO BACTERIANO Y NUTRICIÓN)

Tiempo de generación.
Tiempo necesario para que una bacteria dé lugar a dos células hijas en condiciones
óptimas.
• Para Escherichia coli y la mayoría de las otras bacterias patógenas, es de 20 minutos;
• Para Mycobacterium tuberculosis: Es de 14 horas
• Para Mycobacterium leprae: Es de 12 a 13 días.
Recuento bacteriano.
• Recuento total: Indica el número total de bacterias (vivas o muertas) en la muestra. Esto
se hace contando las bacterias bajo el microscopio utilizando una cámara de recuento. •
Recuento de viables: Mide el número de células vivas (viables) en el espécimen dado. El
conteo viable puede obtenerse mediante: ○ Método de la placa de vertido (mejor método)
○ Conteo de viables superficiales por el método de esparcimiento ○ Conteo de viables
superficiales por el método de Miles y Misra.

Factores que afectan el crecimiento de las bacterias.

1. Oxígeno: En función de sus necesidades de oxígeno, las bacterias se clasifican en:
• Aerobios obligados: Crecen solo en presencia de oxígeno (por ejemplo,
Pseudomonas, M. tuberculosis, Bacillus, Brucella y Nocardia)
• Anaerobios facultativos: Son aerobios que también pueden crecer anaeróbicamente
(por ejemplo, la mayoría de las bacterias patógenas, por ejemplo, E.coli, S.aureus,
etc.).
• Aerobios facultativos: Son anaerobios que también pueden crecer aeróbicamente
(por ejemplo, Lactobacillus)
• Bacterias microaerofílicas: Pueden crecer en presencia de un 5-10% de oxígeno (por
ejemplo, Campylobacter, Helicobacter, Mycobacterium bovis).
• Anaerobios obligados: Crecen solo en ausencia de oxígeno. El oxígeno es letal para
estas bacterias (por ejemplo, Clostridium)
• Anaerobios aerotolerantes: Pueden tolerar el oxígeno durante algún tiempo, pero no
lo utilizan (Clostridium histolyticum).
2. Dióxido de carbono: Las bacterias capnófilas necesitan entre el 5 y el 10% del CO2.
Por ejemplo, Brucella abortus, Streptococcus pneumoniae, etc.
3. Temperatura: En función de la temperatura óptima necesaria para el crecimiento,
las bacterias se pueden agrupar en: • Psicrófilos: crecen por debajo de los 20°C, por
ejemplo, los saprófitos. • Mesófilos: crecen entre 25 °C y 40 °C, por ejemplo, la
mayoría de las bacterias patógenas • Termófilos: crecen por encima de los 55 °C - 80
°C, por ejemplo, Bacillus stearothermophilus
4. pH: La mayoría de las bacterias patógenas crecen entre pH 7,2 y pH 7,6. Muy pocas
bacterias (lactobacilos) pueden crecer a pH ácido por debajo de pH 4, mientras que
bacterias como Vibrio cholerae son capaces de crecer a pH alcalino (8,2-8,9).
5. Luz: Las bacterias (excepto los fotótrofos) crecen bien en la oscuridad. Son sensibles
a los rayos ultravioleta y otras radiaciones de la luz. Las micobacterias
fotocromogénicas producen pigmentos solo al exponerse a la luz.
6. Otros factores: Efecto osmótico, tensiones mecánicas y sónicas, humedad y
desecación.

PATOGENICIDAD MICROBIANA
La patogenicidad microbiana depende de la suma total de varios factores, como se
describe a continuación.
1. Vía de transmisión de la infección
2. Dosis infectiva del organismo: Tamaño mínimo de inóculo que es capaz de iniciar
una infección.
3. Evasión de las defensas locales
4. Adhesión: Por fimbrias o pili, otras adhesinas, formación de biopelículas
5. Invasión: Los factores de virulencia que ayudan en la invasión incluyen:
• Antígeno marcador de virulencia o antígenos plásmidos de invasión en Shigella
• Enzimas: La invasión de bacterias se ve reforzada por muchas enzimas: hialuronidasa,
colagenasa, estreptoquinasa (fibrinolisina) e IgA proteasas
• Factores antifagocíticos: Cápsula
• Proteínas de la pared celular como: proteína A de Staphylococcus aureus y proteína
M de Streptococcus pyogenes
• Citotoxinas: Interfieren con la quimiotaxis o muerte de fagocitos. Por ejemplo, S.
aureus produce hemolisinas y leucocidinas que lisan y dañan los glóbulos rojos y los
glóbulos blancos

Ejemplos de organismos intracelulares obligados incluyen:

• Bacterias: Mycobacterium leprae, Rickettsia, Chlamydia y Coxiella
• Todos los virus
• Hongos: Pneumocystis jirovecii
• Parásitos: Toxoplasma, Cryptosporidium, Plasmodium, Leishmania, Babesia,
Trypanosoma cruzi