Microscopio ptico y electrnico, Coloraciones

histolgicas especiales.

Pacaya Chilicahua Luis Martin GRUPO 4 (Viernes)

UNAP Facultad de Medicina Humana

Ao de la consolidacin del Mar de Grau

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA

PERUANA

ASIGNATURA: HISTOLOGA

TEMA:

Microscopio ptico y electrnico, Coloraciones

Histolgicas especiales.

DOCENTES:

C.D. Manuel Meza Garay Blga.Estela Traverso

Achaval

ALUMNO:

Pacaya Chilicahua, Luis Martin

NIVEL ACADMICO

: 2

CICLO ACADMICO

: III

GRUPO

IQUITOS LORETO PER

2016
1

DEDICATORIA

A Dios por darme la vida, la salud, la sabidura y la oportunidad de

realizar el presente trabajo.
A mis padres porque son los que me brindan su apoyo para poder
cumplir mis labores como estudiante de esta prestigiosa y
honorable Alma Mter.
A la universidad la cual me est forjando en el saber y me brinda
las posibilidades de ser mejor cada da.
A los docentes, quien, al otorgarme las facilidades del aprendizaje
en una etapa universitaria, inculca en el saber cmo futuro
profesional y persona de bien, siendo un pilar de suma
importancia en mi formacin.

AGRADECIMIENTO
Agradezco a la Universidad Nacional de la Amazona Peruana
por brindarme la posibilidad de ser buen profesional.
Adems, agradecer a los docentes por brindarme sus
enseanzas y conocimientos, por permitirme realizar este
trabajo del cual adquiero muchos conocimientos que me
servirn en mi formacin profesional.
A todas y cada una de las personas que de una u otra manera
colaboraron con la elaboracin del presente trabajo.
Y a mis padres por brindarme el apoyo moral y econmico que
se necesit para la elaboracin de este trabajo.

INDICE:

1. Dedicatoria (pag.2)
2. Agradecimiento (pag.3)
3. Objetivo (pag.5)
4. Contenido (pag.5)
5. Introduccin (pag.5)
6. Microscopia (pag.6)
7. Microscopio pticos (pag.6)
8. Microscopio electrnicos (pag.8)
9. Coloraciones Especiales (pag.9)
10. Caractersticas De Las Observaciones Microscpicas (pag.13)
11. Conclusin (pag.15)
12. Anexo (pag.15)
13. Bibliografa (pag.15)

Objetivo General: Especificar las herramientas que utiliza la histologa para el estudio
estructural de tejidos y de la clula como unidad morfolgica y funcional del organismo,
y sus coloraciones histolgicas especiales.
Contenido:
Tipos de Microscopios y aplicacin.
Coloraciones histolgicas especiales.

INTRODUCCIN
La mayora de los tejidos, sobre todo los de los animales, son incoloros y por ello
necesitamos teirlos para observar sus caractersticas morfolgicas. Las tinciones
generales estn basadas en el uso de colorantes, sustancias mediante las cuales
se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son normalmente hidrosolubles
y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en los tejidos gracias a
afinidades electro-qumicas. Se utilizan normalmente para teir a las clulas y
componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio ptico y los
microscopios electrnicos que permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces
ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de
onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles", por ello
se realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las ms utilizadas las
secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el
criostato. Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales.
Son molculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto
incoloro, que normalmente es un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen
dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromforo, y otro
que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo. Al
conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina
cromgeno.

MICROSCOPIA
El conocimiento detallado moderno de la arquitectura celular se basa sobre varios tipos
de observacin por diferentes tipos de microscopios
Qu es un Microscopio?
Es un Instrumento que aumenta el tamao de una imagen y permite ver mayores
detalles.
El Microscopio ms sencillo: lupa, lentes de correccin
M. ptico compuesto:
- Campo claro
- Campo oscuro
- Contraste de fase
- Fluorescencia
- Luz U.V.
M. Electrnico:
- Transmisin (MET)
- Barrido (MEB)

MICROSCOPIO PTICO:
Microscopio ptico de Campo Claro
Usa Luz Visible. D = 0.2 um (micrmetro). La luz atraviesa el objeto examinado y el
objetivo capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa,
el ms utilizado, observamos en l un fondo luminoso, color
claro pero en el organismo tenemos un ligero color oscuro
(vemos las sombras). Si la luz no encuentra obstculos en su
camino, se divisa el campo claro. Su ampliacin mxima til
son 1000-2000. La muestra, aparece teida o no del color del
colorante utilizado. Se usa generalmente para ver
caractersticas morfolgicas de bacterias, hongos, algas y
protozoos.
Componentes Principales:
Fuente Luminosa
Lente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra
- Platina: sobre la que se coloca la muestra.
- Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la muestra
- Lente ocular: a travs de la cual se puede examinar directamente la imagen formada
por la lente objetivo.

Microscopio de Campo Oscuro

La lente objetivo no capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa.
El fondo es de color oscuro pero lo que observamos, es decir,
el microorganismo est claro. Se consigue colocando en el
condensador una anilla que permite el paso de unos rayos de
luz de forma circular, que sern enviados y reflejados, con esto
se logra que el fondo de la muestra aparezca negro y los
especmenes brillantes.
Utilidad: En la prctica clnica para la deteccin de cristales en la orina y la identificacin
de espiroquetas. Generalmente no se tie. Se usa para ver microorganismos que
muestran alguna caracterstica morfolgica en estado vivo y en suspensin. (Flagelos o
cpsida por ejemplo).
Microscopio de Contraste de Fase
Aprovecha las pequeas diferencias en el ndice de refraccin
que hay en diferentes partes de una muestra de clulas o
tejidos. Las partes oscuras corresponden a las regiones densas
y las partes claras corresponden a las regiones menos densas
Utilidad: permite observar las clulas en accin y estudiar los
movimientos implicados en procesos como la mitosis o la
migracin celular. Estudiar cortes semifinos no teidos.
Microscopio de Fluorescencia
Su ampliacin mxima til son 1000-2000. En la muestra se ven bacterias brillantes y
coloreadas, con el color del compuesto fluorescente. Estos compuestos transforman la
luz, aumentan la longitud de onda para que podamos ver la luz ultravioleta, que es la
que los activa. El ms utilizado es el microscopio de campo claro, pero con objetivos que
produzcan el contraste de fases, pudiendo alternar esta posibilidad con gran facilidad.
Utilidad: Deteccin de molculas con autofluorescencia como la vitamina A y algunos
neurotransmisores (fluorescencia natural).
- En tcnicas de inmunocitoqumica (fluorescencia secundaria),
- En la investigacin del trayecto de fibras nerviosas

Microscopio de Luz ultravioleta (UV)

Para poder verla se hace incidir sobre una pantalla o si no por excitacin fotogrfica.
Pero sobre todo se utilizan sustancias qumicas que absorben la energa de la luz
ultravioleta y emiten radiaciones que pueden ser vistas, colorantes fluorescentes.
Existen clulas que de por s son fluorescentes.
Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta.
La imagen depende de la absorcin de la luz UV por las
molculas de la muestra.
La muestra no puede inspeccionarse directamente a travs
del ocular porque la luz UV no es visible y lesiona el ojo.
Utilidad: Detectar cidos nucleicos, en especial las purinas y
pirimidinas. Detectar protenas que tienen ciertos aminocidos en la prctica clnica para
evaluar el grado de ploidia en cortes de tumores.
MICROSCOPIO ELECTRNICO:
La luz se sustituye por un haz de electrones que pasan por un tubo (para mejorar el paso
de los electrones, en el tubo se ha hecho el vaco). Importante: Permite la observacin
de las estructuras interiores de las clulas. Sirve para visualizar virus. Tiene una
resolucin de 10 A (se pueden ver cosas muy pequeas, incluso molculas).
Microscopio Electrnico de Transmisin
Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz, la fuente
es un filamento de tungsteno calentado que emite electrones.
El haz de electrones atraviesa una serie de lentes
electromagnticas que cumplen la misma funcin que las lentes
cristal de un microscopio ptico, la imagen final se observa en una
pantalla fosforescente.
Microscopio electrnico de barrido
- El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora (barre) su superficie.
- Forma una imagen de tipo tridimensional en un tubo de rayos catdicos de alta
resolucin.

COLORACIONES HISTOLGICAS ESPECIALES:

Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos
biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios
La principal herramienta y base del
estudio microscpico de la patologa
quirrgica
es
la
tincin
con
HEMATOXILINA-EOSINA de cortes
histolgicos obtenidos tras fijacin del
tejido en formalina, inclusin en parafina
y obtencin de cortes de 5 micras
mediante un micrtomo.
En la tcnica de H&E., la tincin de los
ncleos en azul con hematoxilina es
seguida del contraste del citoplasma y varios componentes extracelulares en rojo con
eosina.
Esta tcnica permite un diagnstico microscpico correcto de la mayor parte de las
muestras remitidas al laboratorio.
Sin embargo, dicha tcnica no puede responder a todas las preguntas que un
determinado caso plantea en el plano del diagnstico y es claramente insuficiente en
cuanto a histognesis, etiologa o patognesis. Como consecuencia, el patlogo ha
buscado siempre tcnicas adicionales para tratar de aclarar estas preguntas.
Coloquialmente estas tcnicas se han llamado especiales simplemente porque se
utilizan nicamente en circunstancias especiales.
Las ms usadas son las siguientes:
1. PAS (periodicacid-Shiff), Se usa como tcnica de rutina para observar las membranas
basales que separan el tejido epitelial del corin. Tie los ncleos de color azul, el
glucgeno de color prpura y el material PAS + (polisacridos simples,
mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, glucoprotenas y glucolpidos) rojo rosa.

2. Tinciones para microorganismos (Tincin Gram, Warthin-Starry, Giemsa,

Kinyon)
3. Tinciones argentafines y argirfilas
4. Tincin de amiloide
5. Tincin de reticulina
6. Tinciones tricrmicas
7. Tinciones para hemosiderina (Perls)
8. Tinciones para calcio (vonKossa)
9. Tincin de Giemsa
10. Fibras elsticas
9

MITOCONDRIAS:
Las mitocondrias son uno de los orgnulos ms conspicuos del citoplasma y se
encuentran en casi todas las clulas eucariticas. Observadas al microscopio electrnico
de transmisin (M.E.T.), presentan una estructura caracterstica: la mitocondria tiene
forma alargada u oval de 0,5 a 1 m de dimetro, y entre 1 m y varias micras de longitud
y est envuelta por dos membranas distintas, una externa y otra interna (la que
presentan crestas mitocondriales), muy replegada.
Las mitocondrias son los orgnulos celulares encargados de suministrar la mayor parte
de la energa necesaria para la actividad celular, actan por tanto, como centrales
energticas de la clula y sintetizan ATP a expensas de los carburantes metablicos
(glucosa, cidos grasos y aminocidos). Sin mitocondrias, los animales y hongos no
seran capaces de utilizar oxgeno para extraer toda la energa de los alimentos y
mantener con ella el crecimiento y la capacidad de reproducirse. Los organismos
llamados anaerobios viven en medios sin oxgeno, y todos ellos carecen de mitocondrias.
La ultra estructura mitocondrial est en relacin con las funciones que desempea: en
la matriz se localizan los enzimas responsables de la oxidacin de los cidos grasos, los
aminocidos, el cido pirvico y el ciclo de Krebs.
En la membrana interna estn los sistemas dedicados al transporte de los electrones
que se desprenden en las oxidaciones anteriores y un conjunto de protenas
(corpusculos respiratorios) encargadas de acoplar la energa liberada del transporte
electrnico con la sntesis de ATP, estas protenas le dan un aspecto granuloso a la cara
interna de la membrana mitocondrial.
Tambin se encuentran dispersas por la matriz una molcula de ADN circular y unos
pequeos ribosomas y poliribosomas implicados en la sntesis de un pequeo nmero
de protenas mitocondriales
Las mitocondrias se fijan con el VERDE JANUS
Las Mitocondrias tienen "Enzimas Oxidativas dentro de ellas (Matriz mitocondrial), la
coloracin de Verde Jano tie a las mitocondrias dndoles el aspecto de pequeos
corpsculos de coloracin verde, o verde azulada cuando las enzimas oxidativas Oxidan
dicha coloracin (Verde Jano) en cambio, esa coloracin es incolora en el citoplasma
celular porque la misma esta reducida.

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RIBOSOMAS:
Los ribosomas son estructuras globulares, carentes de membrana.
Estn formados qumicamente por varias protenas asociadas a ARN ribosmico
procedente del nuclolo. Pueden encontrarse libres en el citoplasma o adheridos a las
membranas del retculo endoplsmico. Unas protenas (riboforinas) sirven de nexo entre
ambas
estructuras.
Su estructura es sencilla: dos subunidades (una mayor u otra menor) de diferente
coeficiente
de
sedimentacin.
Su funcin consiste nicamente en ser el orgnulo lector del ARN mensajero, con
rdenes de ensamblar los aminocidos que formarn la protena.
Son orgnulos sintetizadores de protenas.
La hematoxilina se caracteriza por teir las regiones del ribosomas de color azul.
APARATO DE GOLGI:
Est formado por diferentes cisternas donde se modifican protenas y lpidos aadiendo
los glcidos necesarios para su buen funcionamiento. Las Cisternas adoptan una
organizacin concntrica, con una cara Convexa y otra Cncava. Cada una de las pilas de
cisternas constituye una estructura polarizada con una Cara Proximal o Formadora,
generalmente convexa y ms cerca de la envoltura nuclear y una Cara Distal o en vas de
maduracin, cncava, que rodea a la regin que contiene Vesculas secretoras grandes.
Las
funciones
del
Aparato
de
Golgi
son:
- Funciones de Secrecin, ya que en la cara externa de los Sacos membranosos y hacia
ambos costados comienzan a elaborar unas pequeas vesculas, que luego al aumentar
de
tamao
se
desprenden
formando
los
LISOSOMAS.
- En la cara interna comienzan a secretar pequeas y abundantes vesculas, que luego
sern incorporadas una detrs de otra por un proceso de Fagocitosis hasta dar 1 o varias
Vesculas
grandes
llamadas
VACUOLAS.
- Se los considera como un verdadero DEPSITO ENERGTICO por la gran cantidad de
Protenas,
Lpidos,
Hidratos
de
Carbono,
Enzimas
que
presentan.
- Los productos que se forman en otros lugares de la clula, se depositan en el aparato
de Golgi y tambin participan en el depsito y modificacin de sustancias lipdicas.
- Intervienen en la secrecin y participan en la deposicin de la pared celular (vegetales).
- Los productos de secrecin son sintetizados en el Retculo Endoplasmtico Rugoso,
pasan al Complejo de Golgi donde son "empaquetados" y secretados mediante
vesculas.

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RETCULO ENDOPLASMTICO LISO Y RUGOSO:

Retculo endoplasmtico rugoso (RER).
El principal centro de sntesis proteica de la clula es la superficie del retculo
Endoplasmtico rugoso (RER). La sntesis de protenas o traduccin tiene lugar en los
ribosomas, donde los aminocidos son transportados por el RNA de transferencia
(tRNA), especfico para cada uno de ellos, y son llevados hasta el RNA mensajero
(mRNA), dnde se aparean el codn de ste y el anti codn del RNA de transferencia,
por complementariedad de bases, y de sta forma se sitan en la posicin que les
corresponde. Las protenas que se sintetizan en los ribosomas del RE son protenas de
membrana, de secrecin, protenas con diferentes destinos intracelulares y protenas
que permanecen dentro de la clula para realizar funciones metablicas. Tambin es
funcin del RER transportar las protenas producidas en los ribosomas hacia las regiones
celulares en que sean necesarias o hacia el aparato de Golgi, desde donde se pueden
exportar al exterior.

Retculo Endoplasmtico Liso (REL)

Interviene en la sntesis y metabolismo de casi todos los lpidos (cidos grasos y
fosfolpidos) que forman las membranas de la clula. Las clulas especializadas en el
metabolismo de lpidos, como las hepticas, suelen tener ms REL. En el retculo de las
clulas del hgado tiene lugar la detoxificacin, que consiste en modificar a una droga o
metabolito insoluble en agua, en soluble en agua, para as eliminar dichas sustancias por
la orina.
El REL tambin interviene en la absorcin, almacenamiento y liberacin de calcio
para mediar en algunos tipos de actividad y equilibrio celular. En las clulas del msculo
esqueltico, por ejemplo, la liberacin de calcio por parte del retculo endoplasmtico
activa la contraccin muscular.

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CARACTERSTICAS DE LAS OBSERVACIONES MICROSCPICAS:

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Fundamento: Radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar
de modo variable diversas sustancias
Coloreadas. Segn su afinidad tisular:
Colorantes Bsicos: poseen una carga global positiva (catinicos), reaccionan con los
componentes aninicos de las clulas. Ej. Hematoxilina.
Colorantes cidos: poseen una carga global negativa (aninicos), reaccionan con los
componentes catinicos de las clulas. Ej. Eosina
Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o
separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa
Colorantes metacromticos: colorantes bsicos. Produce tonos de color totalmente
distintos al que se espera por el colorante empleado.
Colorantes Indiferentes: no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean
mediante impregnacin.
Coloracin con PAS (cido peridico-Shiff): se usa para
determinar la presencia de macromolculas ricas en
glcidos como glucgeno, glucoprotenas y glucosa
minoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio
ptico.
Coloracin con Azn: (tricrmica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en
los ncleos de la clula; rojo en el msculo, queratina y
citoplasma celular, y azul claro en el mucingeno y
colgeno, o sea en el tejido conjuntivo.

Coloracin con metales: actan impregnando a ciertos componentes celulares. Se

usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas.

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 Coloracin con hematoxilina frrica: til para estudiar detalles

celulares
finos. Ej. Las fibras elsticas y las mitocondrias
presentes en el citoplasma de
ciertas clulas.

Tricrmico de Cajal y gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostracin

diferencial y selectiva de las fibras colgenas y del msculo.

La orcena y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elsticas. Se observan

entre bordeau y castao oscuro.

Carmn de Best: para tincin nuclear y deteccin de glucgeno.

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CONCLUSIN:
Parece factible que, si deseamos estudiar una clula o una asociacin de
ellas, para conocer su estructura morfolgica microscpica y deducir, en lo
posible sus funciones, bastara examinarlas a travs de los instrumentos
que amplan imgenes de los objetos observados (microscopios fotnicos y
electrnicos); este procedimiento no es factible de realizar; al intentar
hacerlo se presentan serias dificultades en la manipulacin de los
especmenes y el inicio de los procesos propios de desarreglo molecular
(autolisis) y celular que suelen presentarse despus que las clulas y los
tejidos abandonan su hbitat natural. Por lo tanto, es necesario utilizar una
serie de procedimientos y artificios que nos permitan describir, comprender
y analizar la estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos.
ANEXO:

BIBLIOGRAFA:
METODOS HISTOTECNOLOGICOS. Mills, Bob y Edna B. Instituto de Patologa de los Estados
Unidos AFIP Impreso en Washington, D. C. 1995. 280 pg.

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