Universidad De San Carlos De Guatemala.

Centro Universitario De Jutiapa.

Carrera: Ingeniero Agrónomo En Sistemas De producción Agrícola.

Curso: Microbiología Agrícola

Catedrático (a): ING. José Adolfo Napoleón Morales Sagastume

Tarea: Laboratorio 2

Alumnos: Kevin Orlando Miranda López

202044078
Orlando José Camey Salguero
Semestre: 6to. Sección Única.

Jutiapa, 08 de agosto de 2022

Cuestionario: Como reporte de laboratorio se le solicita completar los siguientes
cuestionamientos.

1. Mencione brevemente como funciona cada uno de los siguientes tipos de microscopio: de
campo claro, de campo oscuro, de contraste de fases, de luz ultravioleta, de fluorescencia y
electrónico.

campo claro
Este microscopio óptico es el más simple, funciona con un haz
de luz que atraviesa un tejido coloreado y transmite la imagen
de una estructura definida hacia los objetivos. También existe
el microscopio compuesto de campo claro, el cual posee más
de un objetivo con niveles de aumentos diferentes.

de campo oscuro
El conocido microscopio óptico de campo oscuro es una modificación aplicada al sistema
de campo claro. Utiliza un enfoque de luz en forma de cono que atraviesa la muestra, la cual al
estar colocada sobre un fondo oscuro se oscuro se hace visible al
dispersar la luz. En este sentido el microscopio de campo
oscuro permite la utilización de rayos de luz para percibir en la muestra
analizada las partes transparentes y las sólidas que son las que
interesan estudiar.

de contraste de fases
El microscopio de contraste de fases es un tipo de microscopio
que permite observar muestras vivas sin necesidad de usar
técnicas de tinción. Este microscopio se basa en la existencia
de una diferencia de fases entre las distintas ondas de luz que
pasan a través de la muestra para generar la imagen de la
observación.
de luz ultravioleta
El microscopio de luz ultravioleta es un tipo de microscopio muy similar a un
microscopio óptico convencional, pero con una diferencia esencial: utiliza luz
ultravioleta en lugar de luz visible.
La diferencia principal entre la luz ultravioleta y la luz visible es la longitud de onda.
Mientras que la luz visible por el ojo humano tiene una longitud de onda de entre
380 y 740 nanómetros, la luz ultravioleta está contenida entre aproximadamente
10 y 380 nanómetros.

de fluorescencia
Un microscopio de fluorescencia es un microscopio óptico convencional al que se le añade un
adaptador de fluorescencia, el cual permite realizar la observación óptica de la muestra de
manera tanto convencional como con contraste con fluorescencia.

Mientras que un microscopio convencional utiliza luz visible, que está entre los 400 y 700
nanómetros para iluminar y magnificar la imagen de una muestra, el microscopio de
fluorescencia, por otro lado, usa una intensidad de la luz
mucho mayor, la cual excita las especies marcadas con
fluorescencia en la muestra. Estas especies emiten a su
vez, una luz de menor energía, con una longitud de onda
mayor que reproduce la imagen magnificada, en vez de
la fuente de luz original.

microscopio electrónico.
El microscopio electrónico es un instrumento de gran utilidad en la investigación científica gracias
a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de microscopio es posible aumentar imágenes
de muestras hasta niveles muy superiores a los del microscopio óptico.
El principio de funcionamiento de un microscopio electrónico se
basa en utilizar electrones en lugar de luz visible. La longitud de
onda con la que se mueve un electrón es inversamente
proporcional a su velocidad. Esto significa que si los electrones
son acelerados a altas velocidades pueden obtenerse longitudes
de onda muy cortas.
2. ¿Cuál es la principal utilidad de cada uno de los microscopios antes mencionados?
campo claro
es de alta utilidad en cualquier laboratorio, especialmente en el área de hematología para el
análisis de los frotis sanguíneos, contaje de glóbulos rojos, leucocitos, plaquetas, recuento de
reticulocitos, etc. Se usa asimismo en el área de orina y heces, tanto para la observación del
sedimento urinario como para el análisis microscópico de las heces en busca de parásitos.

También en el área de análisis citológicos de líquidos biológicos, tales como el líquido

cefalorraquídeo, líquido ascítico, líquido pleural, líquido articular, líquido espermático, secreción
uretral y muestras de endocervix, entre otros.

de campo oscuro

La iluminación de campo oscuro es idónea para revelar contornos, bordes, límites y gradientes
de índice de refracción. Y, los candidatos ideales para la iluminación de campo oscuro son los
diminutos organismos acuáticos vivos, las diatomeas, los insectos pequeños, los huesos, las
fibras, el pelo, las bacterias sin tinción, las levaduras, las células en cultivo de tejidos y los
protozoarios (o protozoos).

Entre las muestras no biológicas se encuentran los cristales de propiedades minerales y

químicas, las partículas coloidales, las muestras de recuento de polvo y las secciones finas de
polímeros y cerámicas que contienen pequeñas inclusiones, diferencias de porosidad o
gradientes de índice de refracción.

de contraste de fases

Para poder observar una célula o tejido al microscopio de campo claro convencional hay que
fijarla y hacerle una tinción, lo que implica, la muerte de la célula en cuestión. Esto siempre ha
sido una preocupación para los expertos en el campo del estudio celular, debido que, al pasar
por todos estos procesos, algunas estructuras pueden dañarse o cambiar su forma. Para esto se
utiliza el microscopio de contraste de fase (entre otros métodos más modernos), que permite
realizar exámenes inmediatos y observar células vivas.
La microscopía de contraste de fase, fue desarrollada fundamentalmente por Zernike en 1932.
Se basa fundamentalmente en el retraso que se produce en las ondas de luz al atravesar objetos
de distintos índices de refracción, aprovechando y amplificando dichos retrasos.

El microscopio de contraste de fase permite observar células sin colorear y resulta especialmente
útil para células vivas.
de luz ultravioleta

El microscopio de luz ultravioleta puede utilizarse para la toma de microfotografías usando una
película sensible a esta radiación, o imágenes captadas por una cámara de televisión sensible
a la luz ultravioleta. Sirve para detectar y cuantificar ácidos nucleicos y proteínas con
determinados amino ácidos.

de fluorescencia

La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados en la microscopía biológica y

analítica, principalmente por su alta sensibilidad y alta especificidad. Averigüe cómo los
microscopios de fluorescencia apoyan su investigación.

microscopio electrónico.
La principal función del microscopio electrónico de transmisión es el estudio de los metales,
minerales y el estudio de las células en el nivel supramolecular. Tiene un papel muy importante
en la industria de la metalurgia.
Se utiliza en la microbiología, para observar la estructura de los virus. También es usado en la
anatomía patológica, para diagnosticar partiendo de la ultra estructura celular.

3. Defina lo que es poder de resolución y discuta los factores que lo condicionan.

El Poder de Resolución mide la riqueza de detalles que son capaces de ofrecer los sistemas
ópticos como microscopios, telescopios, monitores, o la combinación de lentes y sensor (o
película) en una cámara. La apertura numérica determina el Poder de Resolución de un objetivo.

Depende de la capacidad del sistema para conseguir que los puntos muy cercanos del objeto
que se visualiza aparezcan en la imagen como puntos separados. Cuanto más corta sea la
distancia entre esos puntos, mayor calidad o "rendimiento óptico" deberá tener el sistema óptico
para diferenciarlos. La distancia mínima distinguible es la medida del Poder de Resolución del
sistema, y se conoce también como Límite de Resolución.

4. ¿Por qué es necesario el uso de aceite de inmersión cuando se realizan enfoques con
el lente objetivo de alto poder?

El aceite de inmersión no incrementa el aumento de los lentes, pero mejora la resolución y la

nitidez de la imagen producida por dicho objetivo. Cuando la luz pasa a través de un material a
otro, por ejemplo, del vidrio al aire, la luz se refracta o distorsiona. La luz de diferentes longitudes
de onda se inclina a diferentes ángulos. Estas refracciones dan como resultado una distorsión la
cual se manifiesta más a medida que el aumento del lente es mayor. Al colocar una gota de
aceite de inmersión, el cual tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, entre el objetivo de
100X y el portaobjetos (placa) se reduce significativamente la dispersión de la luz que ocurriría
si no se utiliza el aceite de inmersión. Por ello, se incrementa la resolución de la imagen.

5. Describa la técnica correcta para enfocar un frotis bacteriano.

Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el
protocolo de cada tinción concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante
tiñe sólo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuación se deberá sostener el
portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero
teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se produciría la destrucción de las
células.
Lavar la preparación con agua para eliminar el colorante. Esta operación se realiza inclinando
el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre
el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre él, pues podría arrastrar parte del frotis
consigo. Eliminar la máxima cantidad de agua de los portaobjetos golpeándolos por su canto con
cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo.

6. ¿Qué cuidados se deben tener en el uso y manejo del microscopio?

Procure dejar su microscopio en un mismo sitio. En general, debe evitarse en lo más
posible el transporte diario o constante de cualquier aparato.

2. Cuando no esté en uso, mantenga el microscopio cubierto y protegido del polvo.

3. No toque el instrumento con manos sucias o grasosas.

4. Economice la vida de la lámpara, asegurándose de ejecutar la iluminación correcta

tal como se le ha enseñado. Si el diafragma del condensador está cerrado, ya podrá
darle toda la intensidad a la lámpara, gastándola innecesariamente, que no logrará
mejor iluminación. Si no hace contraste, tampoco verá nada.

5. No permita que líquidos, ácidos o aceites ensucien el microscopio.

6. Nunca utilice lentes de mayor aumento sin cubrir la preparación con un cubre
objetos.
7. Nunca deje el objetivo de inmersión lleno de aceite. Use papel de lente, con
movimientos suaves y circulares para limpiarlo luego de usarlo.

8. Si falta uno o varios objetivos, tape inmediatamente el agujero con un tapón de rosca
especial para ello o con esparadrapo si no hay otra cosa.

9. Muchos recomiendan xilol para limpiar las lentes mal cuidadas, con aceite o sucio
resecado sobre ellas. Es preferible, sin embargo, usar un poco de éter en vez de xilol
para evitar despegar las lentes ya que el xilol es disolvente de pegamento. Utilice
un aplicador con algodón en la punta humedecido en éter. Páselo por las lentes
grasosas y limpie inmediatamente con papel de lentes limpio.

7. Cómo lograría un aumento 400X.

cada objetivo y ocular tiene un número. Dicho número indica cuantas veces la lente aumenta el
tamaño del objeto. Por ejemplo, el ocular que tiene el número 10, aumenta 10 veces el tamaño.
Del mismo modo, en los objetivos, los números 4x, 10x, 40x indican el aumento del objetivo.
El aumento total se obtiene multiplicando el número del objetivo por el del ocular que se usan
simultáneamente. Entonces es posible observar con los siguientes aumentos: 10 x 4 = 40x
(aumentos), 10 x 10 = 100x (aumentos) y 10 x 40 = 400x (aumentos)

8. ¿Por qué los objetivos están ubicados en un revolver?

La función del revólver es permitir cambiar fácilmente el objetivo utilizado para observar la
muestra. Normalmente se pueden montar tres o cuatro objetivos en un revólver de modo que
esta pieza nos permitirá observar la muestra con tres o cuatro aumentos distintos.

Todos los microscopios profesionales vienen equipados con un revólver. Aun así, es verdad que
no es una pieza imprescindible y que existen muchos microscopios básicos sin revólver. En estos
casos el microscopio está equipado con un solo objetivo que puede desenroscarse y sustituirse
por otro en caso que sea necesario cambiar el aumento.

9. ¿Qué es el índice de refracción?

El índice de refracción de un medio es una medida para saber cuánto se reduce la velocidad de
la luz (o de otras ondas tales como ondas acústicas) dentro del medio.

El índice de refracción determina cuánto se desvía o se refracta la trayectoria de la luz al entrar

en un material. Esto se describe mediante la ley de refracción de Snell, n1 sinθ1 = n2 sinθ2,
donde θ1 y θ2 son los ángulos de incidencia y refracción, respectivamente, de un rayo que cruza
la interfaz entre dos medios con índices de refracción n1 y n2. Los índices de refracción también
determinan la cantidad de luz que se refleja al llegar a la interfase, así como el ángulo crítico por
reflexión interna total, su intensidad (ecuaciones de Fresnel) y el ángulo de Brewster.2

El índice de refracción puede verse como el factor por el cual la velocidad y la longitud de onda
de la radiación se reducen con respecto a sus valores de vacío: la velocidad de la luz en un medio
es v = c/n, y de manera similar la longitud de onda en ese medio es λ = λ0/n, donde λ0 es la
longitud de onda de esa luz en el vacío. Esto implica que el vacío tiene un índice de refracción
de 1 y que la frecuencia (f = v/λ) de la onda no se ve afectada por el índice de refracción. Como
resultado, el color percibido por el ojo humano de la luz refractada, que depende de la frecuencia,
no se ve afectado por la refracción o el índice de refracción del medio.
10. ¿Qué es el índice de difracción?
Difracción es un término que se atribuye a varios fenómenos que ocurren cuando una onda se
encuentra con un obstáculo o una rendija. Está definida como la desviación de ondas alrededor
de las esquinas de un obstáculo o a través de la abertura en la región de una sombra geométrica
del obstáculo. El objeto difractante o rendija se convierte efectivamente en una fuente secundaria
de la onda de propagación. El científico italiano Francesco Maria Grimaldi acuñó la palabra
"difracción" y fue el primero en registrar observaciones precisas del fenómeno en 1660.