El proteoma del calostro, la nutrición y la inmunidad de los rumiantes:

una revisión
Resumen: En esta revisión, los autores abordan las implicaciones de las proteínas del calostro
en diferentes especies de rumiantes domésticos. También se revisa el proceso de
colostrogénesis y cómo diferentes factores, como el tamaño de la camada o la nutrición
durante la gestación, pueden alterar las concentraciones de los diferentes componentes en el
calostro. Se describirán las diferentes fracciones de calostro, centrándose en proteínas de alta
y baja abundancia. Esta revisión describe la función principal de tales proteínas y su papel en la
transferencia inmunológica pasiva y la nutrición en el animal recién nacido. También se
realizará una revisión exhaustiva de las diferentes técnicas y kits comerciales disponibles para
el agotamiento de proteínas de alta abundancia en el calostro. Finalmente, nos centraremos
en cómo se ha utilizado la proteómica para abordar este problema y cómo puede contribuir a
las principales preguntas sobre la inmunología asociada al calostro.

1. INTRODUCCIÓN
La relación entre el calostro y la supervivencia de los rumiantes recién nacidos se ha
caracterizado profundamente [1-4]. El calostro es la primera fuente de nutrición en los
rumiantes recién nacidos, teniendo una función biológica fundamental en estos animales,
promoviendo la transferencia de inmunoglobulinas de la madre al recién nacido y brindando
protección contra infecciones en el recién nacido [5].

Además, se ha descrito que el calostro es una mezcla de diversos componentes, como grasas,
lactosa, vitaminas y minerales que tienen una alta importancia nutricional [6]. Sin embargo, a
pesar de la función nutricional, el calostro contiene una mezcla compleja de proteínas que
participan activamente en la protección del recién nacido contra patógenos y otros desafíos
ambientales posparto [7].

La proteómica es el campo de la ciencia que, a gran escala, estudia el proteoma, es decir, el

conjunto de proteínas que se expresan en un tejido, órgano, organismo o fluido determinado.
La proteómica es un campo relativamente novedoso y una de las áreas de más rápido
crecimiento en la investigación biológica, recibiendo reconocimiento internacional y, además,
sus aplicaciones en ciencia animal son amplias y diversas [8, 9], incluyendo por ejemplo, la
transformación de músculo en carne. [10], o producción láctea [11]. Con respecto al calostro,
la proteómica se ha utilizado, por ejemplo, para caracterizar los cambios de proteínas en la
transición del calostro a la leche en el ganado [12-14] y también para determinar los procesos
proteolíticos en el estómago y el intestino de los lechones tras la ingesta de calostro [15].

Esta revisión describe el papel importante del calostro en la transferencia inmune pasiva (PIT),
particularmente las proteínas de alta abundancia (HAP) presentes en el calostro de diferentes
especies de rumiantes. Además, también se describen con detalle las proteínas poco
abundantes (LAP) que podrían estar implicadas en procesos inmunológicos. Estos procesos
tienen una gran relevancia para la supervivencia animal, ya que aumentan la protección contra
infecciones en rumiantes recién nacidos.
2. MOMENTO DE SECRECIÓN E IMPORTANCIA DEL CALOSTRO EN LAS ESPECIES
RUMINANTES DOMÉSTICAS
Como ya se ha descrito, la complejidad de las placentas epiteliocoriales (vacas y búfalos de
agua; [16, 17]) o sinepiteliocoriales (pequeños rumiantes; [18]) no permiten una transferencia
adecuada de inmunoglobulinas (Ig) de la madre al feto, como en otras especies como humanos
o ratones [placenta hemocorial; 19]. Por esta razón, los rumiantes recién nacidos se
consideran agammaglobulinémicos (terneros) o hipogammaglobulinémicos (corderos y
cabritos) al nacer [1, 2, 4, 20].

Como consecuencia, la ingesta de calostro y la absorción de las proteínas del calostro juegan
un papel esencial en la PIT y, en última instancia, en las tasas de supervivencia del recién
nacido [3, 14, 15]. Dicha absorción de proteínas se basa principalmente en inmunoglobulinas
(IgG, IgM e IgA, principalmente), sin embargo también se ha descrito la importancia de la
absorción de proteínas no inmunoglobulinas del calostro a la sangre de los rumiantes recién
nacidos para asegurar una PIT correcta [21]. A pesar de esta función principal, el calostro
también es importante para el animal recién nacido como la primera fuente de nutrición, ya
que proporciona nutrientes esenciales como grasas, proteínas, lactosa y minerales en esta
etapa temprana de la vida [6].

Por último, el calostro también contiene otras sustancias, como agentes antimicrobianos y
antiinflamatorios [14], así como factores de crecimiento que controlan el desarrollo
gastrointestinal temprano [22], citocinas, enzimas y muchos otros péptidos [23, 24] como se
muestra en la (Fig. .1). Muchas de las proteínas bioactivas del suero de leche y de la membrana
de los glóbulos grasos de la leche (MFGM), en particular inmunoglobulinas, lactoferrina y
factores de crecimiento, están presentes en el calostro en concentraciones más altas que en la
leche, lo que refleja la importancia del calostro en la salud de los rumiantes recién nacidos [25,
26].

Figura 1). Representación esquemática de las principales proteínas conocidas

implicadas en el sistema de defensa del huésped en la leche y el calostro. (Adaptado
de Wheeler et al. [27]). MFGM: Membrana de glóbulos de grasa láctea.

La absorción de estos componentes del calostro se ve favorecida por una baja

actividad proteolítica en el tracto gastrointestinal de los animales recién nacidos [28] y
también por los inhibidores de tripsina presentes en el calostro [29-31]. Sin embargo,
estas condiciones especiales para la absorción de proteínas de calostro intactas
disminuyen durante las primeras 48 horas después del nacimiento, por lo que es
crucial alimentar a los rumiantes recién nacidos con calostro durante este período [32,
33] para que adquieran una concentración inicial adecuada de Ig séricas. [34, 35].
Además, se ha descrito que los rumiantes recién nacidos que no son alimentados con
calostro durante las primeras horas de vida son más susceptibles a las enfermedades,
aumentando considerablemente las tasas de mortalidad [36-38]. Por todas estas
razones, la ingesta de calostro es muy importante para asegurar la supervivencia de los
rumiantes recién nacidos.

3. LA PROTEÓMICA COMO HERRAMIENTA PARA ANALIZAR E IDENTIFICAR LAS

PROTEÍNAS DEL CALOSTRO
El calostro es un fluido corporal complejo producido por la glándula mamaria de las mamíferas
preñadas. La composición del calostro está regulada por hormonas (estradiol y progresterona)
durante la colostrogénesis [3] que puede definirse como la transferencia preparto de
componentes, principalmente inmunoglobulinas, desde el torrente sanguíneo materno a las
secreciones mamarias durante un período corto [39]. Este proceso cesa abruptamente
inmediatamente antes del parto [40]. Hay varios factores que afectan la colostrogénesis, como
la especie, la raza, la edad, la nutrición, el tamaño de la camada, la duración del período seco y
el estado de salud [41-43].

Además, los componentes del calostro son secretados por diferentes mecanismos [44], por lo
que hay proteínas producidas directamente en la glándula mamaria o transferidas desde el
torrente sanguíneo (o ambos). Por ejemplo, mientras que la IgG se transporta a la glándula
mamaria desde el torrente sanguíneo, parte de la IgA se sintetiza dentro de la glándula
mamaria por las células plasmáticas que habían migrado a la glándula [27], como se muestra
en la (Fig. 1).

La proteómica es una herramienta poderosa que puede analizar simultáneamente varios

cientos de proteínas en mezclas complejas; sin embargo, debido a la amplia gama de
concentraciones de proteínas y ubicaciones subcelulares, no existe un protocolo general para
la separación del proteoma completo del calostro. En consecuencia, y con el fin de
incrementar la cobertura del proteoma del calostro, es necesario estudiar los diferentes
componentes por separado. Algunas de estas técnicas se basan en el prefraccionamiento de la
muestra de calostro para reducir la complejidad antes del análisis proteómico [45]. Estos pasos
previos están de acuerdo con las diferentes propiedades de las proteínas, a saber, carga,
tamaño o hidrofobicidad.

El método basado en gel ha sido el método más utilizado durante décadas, y todavía se utiliza
ampliamente, siendo el método de electroforesis en gel bidimensional (2DE) comúnmente
empleado en proteómica cuantitativa [46].

Sin embargo, también se ha descrito un claro interés por las separaciones por cromatografía
líquida [15], que tienen varias ventajas distintas en comparación con los estudios 2DE.
Finalmente, la espectrometría de masas (MS) se ha convertido cada vez más en el método de
elección para el análisis de muestras de proteínas complejas. MALDI TOF / TOF MS, por
ejemplo, es robusto, sensible y relativamente económico. Además, este método ha producido
gran parte de los datos de identificación de proteínas reportados en la literatura [47]. Sin
embargo, existen otras técnicas, como la etiqueta isobárica para cuantificación relativa y
absoluta (iTRAQ) que permite estudiar en profundidad el proteoma de muestras complejas con
mayor precisión.

Varios estudios de proteomas han caracterizado los componentes del calostro en diferentes
especies, como bovina y humana [12, 14, 48]. Sin embargo, poco se sabe sobre el calostro y el
proceso que tiene lugar en el recién nacido, a saber, degradación, protección proteolítica,
internalización y retención en el tejido intestinal. Además, es necesario estudiar cómo esta
fuente primaria de alimento pasa a través del tracto gastrointestinal del recién nacido lactante
y cómo los factores antes mencionados afectan a los diferentes componentes del calostro.

4. EFECTOS DE LA GESTIÓN SOBRE EL CALOSTRO Y LOS RUMIANTES RECIÉN NACIDOS

Según lo descrito por Castro et al. [3] el manejo durante las últimas semanas de gestación es
extraordinariamente importante, porque es en este período cuando se secreta el calostro. Hay
otros factores como el tamaño de la camada y el número de lactancias que afectan la
composición final del calostro. Además, el manejo del calostro en las primeras horas de vida es
crucial para la supervivencia del rumiante recién nacido. Sin embargo, a pesar de la
importancia de estos factores en la composición final y en la absorción de proteínas del
calostro por los rumiantes recién nacidos, no se han publicado estudios proteómicos sobre
estos efectos.

4.1. Nutrición durante la gestación

Se ha descrito la relación entre la nutrición materna durante la última etapa del embarazo y el
desarrollo de la glándula mamaria, la composición del calostro y el volumen producido
después del parto [49]. De hecho, los animales lecheros que reciben una alimentación
equilibrada producen más calostro que los animales desnutridos. Con respecto a los
componentes inmunes presentes en el calostro, el manejo de la nutrición puede variar la
concentración final de algunos componentes inmunes. Por consiguiente, Awadeh et al. [50]
describieron cómo las vacas suplementadas con selenio durante la última etapa del embarazo
aumentaron su concentración de IgG en el calostro. Por el contrario, Swanson et al. [51] no
observó ningún efecto en ovejas suplementadas durante la última gestación ni en el
rendimiento de calostro ni en la concentración de IgG.

4.2. Tamaño de la camada y número de lactancias

El tamaño de la camada es un efecto muy controvertido. Csapó et al. [52] encontraron que la
concentración de calostro IgG era más alta en cabras blancas húngaras gemelas y ovejas
merinas húngaras que en las solteras. Sin embargo, Argüello et al. [53] no encontraron
diferencias en la concentración de IgG de calostro entre cabras Majorera con diferentes
tamaños de camada.

Ha habido cierta controversia sobre el tema del número de lactancias. Si bien se ha

demostrado que aumenta la concentración de IgG en el calostro bovino [54] y caprino [55],
Dos Santos et al. [56] y Argüello et al. [53] no observaron diferencias en la concentración de
IgG de calostro debido al número de lactancias en cabras Saanen y Majorera, respectivamente.

4.3. Primera ingesta de calostro por rumiantes recién nacidos

Como se describe en la sección 2, los rumiantes recién nacidos pueden absorber moléculas
grandes. Sin embargo y considerando el calostro, esta habilidad especial disminuye a lo largo
de las primeras 48 horas después del nacimiento. Es importante notar que la primera ingesta
de calostro es muy importante para adquirir una PIT correcta, aunque otros aspectos como la
concentración de IgG de calostro o el volumen de calostro ingerido también toman gran
relevancia en la PIT. Según lo informado por Chigerwe et al. [57] Los terneros Holstein
alimentados con 3 litros de calostro entre las primeras 4 horas después del nacimiento
adquieren un PIT adecuado. Sin embargo, el mismo autor observó que los terneros que
tomaron su primera ingesta de calostro entre las 4 y 12 horas después del nacimiento también
tuvieron un PIT adecuado, aunque estos últimos animales fueron alimentados con calostro de
alta calidad (concentración de IgG> 100 mg / mL).

5. FRACCIONES DE CALOSTRO Y PROTEÍNAS ALTAS ABUNDANTES

5.1. Fracciones de calostro

Como se describe en la Sección 3, no existe un protocolo adecuado para la separación de

calostro completo. Por tanto, es necesario separar diferentes fracciones. Las proteínas del
calostro se dividen en tres grupos principales según la fracción donde se encuentran: caseínas,
proteínas del suero y proteínas de la MFGM, como se resume en la (Fig. 2).

Figura 2). Procedimiento esquemático para la separación de los tres grupos principales de
proteínas del calostro. Se pueden obtener dos fracciones por centrifugación: Membrana de
glóbulos de grasa láctea (MFGM) y calostro desnatado. El calostro desnatado se puede tratar
con ultracentrifugación o acidificación (o ambas) para obtener las últimas fracciones: caseínas
y proteínas de suero.

Estas tres fracciones se pueden aislar en dos pasos. El primer paso se basa en la centrifugación
del calostro para separar la capa de grasa (MFGM) y el calostro desnatado que incluye caseínas
y proteínas de suero. Se pueden encontrar varios protocolos de centrifugación en la literatura,
como se resume en la Tabla 1, aunque algunos de ellos solo se han probado en muestras de
leche.

Después de este proceso, el calostro desnatado resultante debe dividirse en las dos últimas
fracciones (proteínas de suero y caseínas). En la literatura, se pueden encontrar varios
métodos para aislar caseínas del calostro desnatado o de la muestra de leche; sin embargo,
todos ellos tienen en común el uso de ultracentrifugación, precipitación ácida o la combinación
de ambos métodos. Algunas de las técnicas más utilizadas se muestran en la Tabla 2.

5.2. Proteínas abundantes

Como se describió anteriormente, uno de los tres grupos de proteínas que se pueden
encontrar en el calostro y la leche, se encuentra en una membrana compleja, llamada
membrana de glóbulos de grasa de la leche (MFGM) que rodea las gotitas de triacilgliceroles
[61]. Tradicionalmente, la mayoría de las investigaciones sobre La MFGM se ha centrado en el
ganado lechero [71-75], sin embargo, el interés en diferentes aspectos de la leche no bovina
está creciendo rápidamente. Por esta razón, algunos estudios recientes sobre MFGM de otras
especies, como cabras [76], ovejas [77, 78] o búfalos de agua [79] pueden encontrarse en la
literatura.

Como lo describe Mather [72], hay 7 HAP en la MFGM. Dos de las proteínas más importantes
relacionadas con la inmunidad son la mucina-1 (MUC-1) y la xantina deshidrogenasa / oxidasa
(XDH / XO).

MUC-1 es una glicoproteína que está presente en la superficie apical de células epiteliales de
diferentes órganos, como pulmones, estómago, intestino y otros [80].

Esta proteína se ha aislado en ganado [81], donde su concentración es menor (40 mg / L) en

comparación con la MFGM humana (729-805 mg / L) [82]. Esta proteína se aisló en cabras [83],
aunque no parece haber información disponible sobre sus niveles de concentración.

Sin embargo, se ha demostrado que tiene reactividad cruzada con MUC-1 de vaca y no tiene
reactividad cruzada con MUC-1 humano.

En cuanto a su función biológica, esta proteína puede desempeñar un papel importante en la

protección de las superficies expuestas del daño físico y de los microorganismos patógenos
invasores [81, 82, 84]. Además, MUC-1 puede participar en la reacción inmune en el recién
nacido lactante debido a su capacidad de unirse y secuestrar microorganismos patógenos
dentro de la luz intestinal [82, 84].

En cuanto a XDH / XO, se sintetiza esencialmente en la glándula mamaria [85, 86] y alcanza
valores máximos durante la última etapa del embarazo e inmediatamente después del parto
[87].

Esta proteína se ha aislado de MFGM en vacas, cabras y ovejas, aunque hasta ahora no se han
analizado las diferencias entre ellas en el calostro. Sin embargo, utilizando muestras de leche,
se ha descrito que XDH / XO de MFGM de oveja y vaca tienen concentraciones similares [74,
75, 78]. La función de esta proteína no está completamente definida, pero se ha sugerido que
puede desempeñar papeles estructurales y funcionales en la formación de la MFGM [88] y
también tiene propiedades antibacterianas en el calostro y la leche, proporcionando una
fuente de H2O2 para lactoperoxidasa. [89]. Por último, esta proteína podría actuar como
inmunomodulador causando daño tisular y exacerbación de la respuesta inflamatoria o
induciendo la expresión de genes que codifican, por ejemplo, proteínas adhesivas, receptores
celulares y componentes del sistema inmunológico [72].

Otro grupo de proteínas que se pueden encontrar en el calostro son las proteínas del suero.
Tomando como referencia la leche bovina, el suero contiene más de 200 proteínas diferentes,
siendo la -lactoglobulina, la -lactoalbúmina, la albúmina de suero bovino (BSA), las
inmunoglobulinas y la lactoferrina los constituyentes principales [11, 90-92]. De este grupo de
proteínas, las inmunoglobulinas juegan el papel más importante en la transferencia inmune
innata, aunque existen otras proteínas con importantes funciones inmunes, en particular la
lactoalbúmina y la lactoferrina [91, 93].

Convencionalmente, la -lactoalbúmina se ha asociado a la regulación de la producción de

lactosa [94]. Sin embargo, se ha descrito recientemente que esta proteína también desempeña
un papel como inmunomodulador en el calostro y la leche humanos y bovinos [91, 95, 96]. La
concentración de esta proteína en el calostro no difiere significativamente entre cabras, vacas
y ovejas (2,77 mg / mL, 2 mg / mL y 2,3 mg / mL, respectivamente) [97, 98], lo que demuestra
que la concentración de esta proteína es aproximadamente 1,5 veces más altos que los que se
encuentran en la leche.

Tabla 1. Procedimientos de centrifugación para el aislamiento de MFGM de leche y calostro.

Cuadro 2. Procedimientos para aislar caseínas y proteínas de suero de leche y

calostro.

El otro HAP importante en la respuesta inmunitaria contra las infecciones es la lactoferrina.

Konuspayeva y col. [99] estudiaron las diferencias de esta concentración de proteína en el
calostro de varios mamíferos como camellos (5,1 mg / ml), vacas (0,84 mg / ml), cabras (3,09
mg / ml), ovejas (1,56 mg / ml) o agua. búfalos (2,1 mg / mL). Nissen et al. [13] en calostro
bovino, utilizando 2DE LC-MS / MS y ELISA cuantitativo. La función principal de la lactoferrina
es la unión y transporte de iones de hierro. Además, la lactoferrina tiene una amplia variedad
de funciones biológicas, muchas de las cuales no parecen estar relacionadas con su capacidad
de unión al hierro [100].

La lactoferrina actúa como un factor inmune innato sintetizado por el epitelio mamario [101,
102], que proporciona actividad antimicrobiana (bactericida y fungicida) a la glándula mamaria
y también al recién nacido [103]. Debido al aumento de su concentración durante la mayoría
de las reacciones inflamatorias y algunas infecciones virales, se ha clasificado como una
proteína de fase aguda [104].

Con referencia a la caseína, hay cuatro tipos principales (s1, s2 y), que son responsables de
importantes funciones biológicas como portadores de iones (calcio, fosfato, hierro, zinc,
cupper), precursores de péptidos bioactivos e inmunomoduladores [91 ]. También se
demostró que los fragmentos proteolíticos de caseína tienen actividad antimicrobiana [105], lo
que sugiere que las proteasas también pueden desempeñar un papel en la defensa del
huésped. Además, los péptidos derivados de las caseínas están recibiendo mucha atención
como posibles fuentes de bioactividad natural con beneficios para la salud de los seres
humanos [106], probablemente porque estimulan el sistema inmunológico innato dentro de la
glándula mamaria y previenen las infecciones de las ubres durante la fase seca [107].

6. PROTEÍNAS BAJAS Y ABUNDANTES DEL CALOSTRO

Además de la gran importancia de HAP en el calostro, existe un interés creciente en LAP con el
fin de aumentar el conocimiento general sobre su papel biológico en la salud animal y humana
[12, 63, 108]. En humanos, por ejemplo, recientemente se identificaron un total de 151
proteínas, aunque 83 de ellas nunca habían sido descritas previamente en el calostro humano
o la leche [109]. Probablemente, muchas de estas proteínas recientemente identificadas
podrían estar involucradas en funciones importantes del calostro, como la regulación del
crecimiento, el transporte de nutrientes y lo que es más importante, la PIT. En rumiantes, el
conocimiento sobre la identidad y función de los constituyentes LAP del suero y la MFGM es
aún incompleto, aunque muchas de estas proteínas pueden tener propiedades biológicas no
caracterizadas [12, 59, 110].

Las técnicas bioquímicas, a saber, los métodos de gel de 2DE, han sido una de las técnicas más
comunes utilizadas para identificar LAP tanto en la leche como en el calostro [108, 111]. Sin
embargo, estas técnicas están comenzando a ser reemplazadas por otras como iTRAQ o
metodologías sin etiqueta que confieren varias ventajas en comparación con los métodos de
gel 2DE. Estas nuevas técnicas son capaces de identificar un mayor número de proteínas
utilizando menos cantidad de muestra y produciendo resultados más reproducibles. Por otro
lado, la principal desventaja de estas técnicas es el elevado coste de los equipos, instrumentos
y reactivos, que no suelen estar disponibles en la mayoría de los laboratorios.

6.1. Técnicas más comunes utilizadas para identificar proteínas con poca abundancia

Enfoques como la inmunoabsorción [108, 109, 112], el enfoque isoeléctrico (IEF) [113], el
marcado de afinidad [114] y la cromatografía de intercambio aniónico y catiónico semi-
acoplado [59] se han utilizado como una herramienta para eliminar la HAP y aumentar la
abundancia relativa de LAP en el análisis proteómico de muestras complejas como el calostro.
A pesar de la eliminación de caseínas mediante procedimientos como los descritos en la Tabla
2, la gran cantidad de inmunoglobulinas y proteínas muy abundantes en, por ejemplo, el suero
de rumiantes es particularmente difícil para el análisis proteómico LAP [108].

Como consecuencia de su alta abundancia en calostro, similar punto isoeléctrico y peso

molecular, las inmunoglobulinas están ubicadas en la misma región del gel 2DE donde la mayor
parte de LAP, como transferrina, plasmina, lipoproteína lipasa, fosfatasa alcalina y otras aún.
también se encuentran por identificar [59]. Por esta razón, es necesario eliminar las HAP (es
decir, las inmunoglobulinas) del calostro, ya que pueden enmascarar las proteínas poco
abundantes. Actualmente, se encuentran disponibles varios kits comerciales para eliminar
inmunoglobulinas. Golinalli y col. [63] utilizaron y compararon la eficacia de eliminación de
proteínas de suero HAP del calostro utilizando el kit de eliminación de albúmina e IgG (GE
Healthcare Life Sciences, Reino Unido) y el cartucho de ultrafiltración Vivaspin 500 (GE
Healthcare Life Sciences, Reino Unido) con una membrana de un - corte de masa de 100 kDa.

Estos autores observaron que el kit de eliminación de albúmina e IgG era ineficaz para eliminar
la IgG del suero de calostro bovino. Se sabe que el kit de eliminación de albúmina e IgG
contiene anti-IgG inmovilizado en agarosa contra proteínas humanas.

El fracaso de estos anticuerpos para capturar la IgG presente en el suero de calostro bovino
podría atribuirse a una falta de reactividad cruzada de los anticuerpos a las proteínas bovinas.
Sin embargo, estos autores describieron que el tratamiento del suero de calostro con Vivaspin
500 eliminó la mayor parte de IgG e IgA, haciendo posible la detección de LAP.

Otra técnica de agotamiento común utilizada para agotar proteínas muy abundantes es el kit
ProteoMiner (Bio Rad, EE. UU.) Que consiste en una biblioteca única de hexapéptidos, que se
unen a proteínas de diferente abundancia con la misma capacidad [115]. En consecuencia,
cuando una mezcla de proteínas compleja se expone a una biblioteca de ligandos, cada perla
con afinidad por una proteína abundante se saturará rápidamente y, por lo tanto, la gran
mayoría de la misma proteína permanecerá sin unir. Por el contrario, las proteínas poco
abundantes no saturarán las correspondientes perlas asociadas, por lo que todas son
capturadas, produciendo un aumento progresivo en la cantidad de esas proteínas.

Después de la elución de las proteínas capturadas, todas las proteínas estarán presentes, pero
en un rango dinámico reducido que depende de cada concentración de proteína antes del
agotamiento [116, 117]. Además, el kit ProteoMiner es un método muy extendido que se creó
para muestras de plasma y suero, pero que se ha probado con éxito en otros tipos de
muestras, como orina [118], bilis [119], plaquetas, extracto de glóbulos rojos y extracto de
clara de huevo. [120].

Con referencia al calostro y la leche, Liao et al. [67] trataron muestras de leche y calostro
humano con el kit ProteoMiner, lo que demuestra que la abundancia de LAP aumentó
mientras que algunas de las proteínas altamente abundantes disminuyeron. Sin embargo,
estos autores describieron que las perlas del kit ProteoMiner tenían poco efecto sobre los
residuos de caseína restantes en el calostro humano y el suero de leche. Asimismo, se utilizó el
kit ProteoMiner para estudiar el proteoma del suero de leche de vaca, obteniendo un aumento
de las proteínas poco abundantes [117]. Cabe señalar que, aunque este kit es capaz de
producir un enriquecimiento de LAP, aún se detectan proteínas de suero HAP (por ejemplo,
lactoferrina y -lactoalbúmina) y caseínas.

Por estas razones, y según los autores, el kit ProteoMiner es un enfoque válido para
incrementar la detección de proteínas poco abundantes.
Sin embargo, a pesar de la eficacia demostrada del kit ProteoMiner para aumentar el número
de identificaciones de proteínas en una mezcla de proteínas compleja, es necesario destacar su
efecto en estudios proteómicos cuantitativos, midiendo los niveles de abundancia relativa de
proteínas entre muestras mediante el marcaje de isótopos estables [115]. . En consecuencia,
Mouton-Barbosa et al. [121] demostraron que las proteínas muy abundantes no retuvieron su
precisión cuantitativa después del tratamiento con una biblioteca de hexapéptidos (por
ejemplo, el kit ProteoMiner), probablemente porque saturaron sus compañeros de unión de
péptidos, lo que resultó en una pérdida de la parte no unida de la proteína. Por otro lado, las
proteínas poco abundantes conservaron su precisión cuantitativa después de un tratamiento
con una biblioteca de hexapéptidos, ya que no saturaron sus compañeros de unión de
péptidos y se recuperaron por completo.

Como resultado, y tomando la información descrita anteriormente, el kit Proteominer parece

ser una herramienta adecuada para descubrir el proteoma profundo de varias muestras
compuesto por una mezcla potente y alta de proteínas. Sin embargo, se deben tener algunas
consideraciones si este kit se va a utilizar en estudios cuantitativos.

6.2. Función de determinadas proteínas poco abundantes y su relación con el sistema

inmunológico

Es muy importante entender cómo el LAP del calostro puede mejorar o modificar la respuesta
inmune ya sea a nivel de la madre o al nivel del recién nacido, por esta razón, la función de
algunos LAP importantes se describirá por separado.

Uno de estos LAP en el calostro es la plasmina. Esta proteína es una enzima fribrinolítica que
desempeña un papel importante en la disolución de los coágulos sanguíneos de fibrina para
prevenir la trombosis [122]. Sin embargo, esta proteína se ha identificado no solo en la sangre,
sino también en el calostro y la leche [66, 123]. Según lo descrito por Dupont et al. [123], el
calostro bovino contiene 10 veces más plasmina (0,49 g / ml) que la leche (0,04 g / ml). En la
leche de bovino, oveja y cabra, la plasmina es esencialmente idéntica a las que se encuentran
en la sangre [124]. Además, otros autores han observado que la plasmina tiene actividad
inmunitaria, ya que contribuye a la migración de neutrófilos al sitio de infección [125]. De
acuerdo con estos hallazgos, se ha descrito un aumento de la concentración de plasmina en
sangre y leche durante la mastitis aguda en ovejas lecheras lactantes [126].

Otra proteína interesante es el amiloide A sérico (SAA).

Esta proteína se encuentra normalmente en complejos con lipoproteínas y diferentes

isoformas, que varían en concentración según la especie [127]. SAA representa una de las
proteínas más conservadas entre los mamíferos, apoyando la premisa de que tiene un papel
básico y esencial en el sistema inmunológico innato, participando en la fase aguda de la
inflamación [128, 129].

Esta proteína también se ha identificado en el calostro de varias especies, a saber, humanos

[130], caballos, vacas y ovejas [66, 131]. Se ha descrito que la concentración circulante de AAS
aumenta 1000 veces en las 24 a 48 h siguientes a la infección / inflamación desde un nivel
basal de 5 a 8 mg / ml [132], lo que demuestra la importancia de esta proteína en los procesos
inflamatorios. Además, se descubrió que una variante de esta proteína de fase aguda, el
amiloide sérico A3 (SAA-3), se expresaba en las células mamarias en respuesta a patógenos o
al ácido lipoteicoico derivado de patógenos y que estaba presente en la leche durante la
mastitis [131] y el calostro. [131, 133], lo que sugiere un papel de esta proteína en la defensa
del huésped. Por consiguiente, McDonald et al. [131] encontró que la concentración de SAA-3
en el calostro bovino es mucho más alta que en la leche (267,45 g / mL y 2,63 g / mL,
respectivamente). Estos autores también describieron la concentración de esta proteína en el
calostro ovino, siendo menor que en el calostro bovino (62,83 g / mL y 267,45 g / mL,
respectivamente).

En general, la proteína SAA tiene numerosas acciones proinflamatorias: quimioatrayente de

neutrófilos, monocitos y linfocitos T, causando infiltración de leucocitos y promoviendo la
adhesión de neutrófilos a las células endoteliales [134-136] y estimula a los neutrófilos y
monocitos para que liberen no solo citocinas [137, 138], sino también metaloproteinasas de
matriz [139]. Según He et al. [140], estos hallazgos sugieren una función clave para SAA no solo
en el establecimiento, sino también en el mantenimiento de la inflamación.

El fibrinógeno es el precursor de la fibrina, el componente más abundante en los coágulos

sanguíneos. Sin embargo, esta proteína también tiene una función defensiva, ya que se ha
demostrado que la concentración de fibrinógeno aumenta durante las reacciones de fase
aguda [141, 142].

Además, Yamada et al. [108] estudiaron las diferencias en proteínas poco abundantes entre el
calostro de vaca y la leche, mostrando que algunas de ellas solo estaban presentes en el
calostro, como el fibrinógeno. Además, varios autores han descrito que el fibrinógeno puede
unirse a integrinas, que normalmente son expresadas por células del sistema inmunológico,
como CD11b / CD18 [143, 144]. El receptor de la integrina CD11b / CD18 (M2, Mac-1, receptor
del complemento 3) es un miembro de la familia de las integrinas 2, que se expresa en
monocitos y macrófagos. Cuando el fibrinógeno se une a CD11b / CD18, la integrina causa una
amplia gama de respuestas de señalización celular, a saber, la activación del factor nuclear
kappa, el potenciador de la cadena ligera de las células B activadas y la proteína quinasa /
fosfatidilinositol 3-quinasa activada por mitógenos, que median la adhesión, migración,
quimiotaxis y fagocitosis [145]. Todas estas razones confirman que el fibrinógeno y la fibrina
del calostro pueden resultar beneficiosos para la eficiencia del sistema inmunológico del recién
nacido.

El inhibidor de tripsina (TI), también conocido como 1-antitripsina, es una proteína que reduce
la tripsina biológicamente activa [146], disminuyendo la proteólisis. Esta proteína ha sido
descrita en calostro bovino utilizando diferentes técnicas proteómicas, como la electroforesis
en gel 2DE [108] o LC-MS / MS [13]. Se ha estudiado que el calostro contiene 100 veces más TI
que la leche [147, 148], probablemente para proteger contra la división proteolítica,
permitiendo la absorción de los componentes inmunes intactos por el rumiante recién nacido.

La proteína de unión a lipopolisacáridos (LBP) es una de las que más se producen durante las
infecciones por bacterias gramnegativas [149]. Además, LPB parece participar activamente
durante las infecciones bacterianas grampositivas [150]. Esta proteína ha sido detectada en
calostro bovino usando LCMS / MS 2D [13] y luego cuantificada usando ELISA (0.85 mg / mL,
aproximadamente) por los mismos autores. No se han encontrado referencias sobre la
presencia de esta proteína ni calostro de cabra ni de oveja. La función principal de esta
proteína es unirse a los lipopolisacáridos bacterianos (LPS) expresados en la pared celular
externa de las bacterias, actuando como un portador de LPS y para ayudar a controlar las
respuestas de monocitos dependientes de LPS [14].
Los péptidos antimicrobianos (AMP) se definen como tales por su capacidad para inactivar
rápidamente agentes infecciosos [151]. La mayoría de los AMP actúan alterando la integridad
de las membranas microbianas [151]. Las dos principales familias de AMP en los mamíferos
son las defensinas [10] y otro grupo de moléculas catiónicas, clasificadas como péptidos de
catelicidina [152, 153].

Las defensinas son un grupo de pequeños péptidos antimicrobianos que interactúan con la
respuesta inmune adaptativa [154]. Estos péptidos se producen de forma constitutiva y / o en
respuesta a productos microbianos o citocinas proinflamatorias [155-157].

Específicamente, se encontró que los miembros de la familia -defensina se expresan en células

epiteliales mamarias durante la mastitis [158, 159]. Aunque el mecanismo de estos péptidos
no se conoce completamente, pueden estar involucrados en la ruptura de la membrana
microbiana. Además, estos péptidos se han descrito en la leche y en niveles elevados en el
calostro humano [160].

La familia de las catelicidinas es un grupo de péptidos que desempeña un papel fundamental

en la defensa inmunitaria innata de los mamíferos contra la infección bacteriana invasiva
[161]. Su mecanismo parece estar mediado por el reconocimiento de patrones moleculares en
la superficie microbiana. Este paso se basa en gran medida en las interacciones electrostáticas
entre el péptido catiónico y los componentes bacterianos aniónicos y la posterior inserción en
la fracción lipídica, lo que afecta la integridad de las membranas microbianas [162]. Desde
entonces, se han encontrado componentes de la familia de las catelicidinas en bovinos [14],
ovinos [163, 164], caprinos [164], y la presencia de estos péptidos se ha descrito tanto en el
calostro como en la leche [14, 165].

CONCLUSIÓN
En resumen, el calostro juega un papel esencial en varios procesos importantes en el recién
nacido, como el PIT y el desarrollo del sistema inmunológico, disminuyendo las tasas de
mortalidad de los recién nacidos de rumiantes y aumentando los beneficios económicos de los
agricultores. Sin embargo, el calostro no solo es importante por su contenido en
inmunoglobulinas, sino también por las proteínas no inmunoglobulinas que juegan un papel
fundamental en la activación y atracción de las células inmunes y la baja secreción gástrica,
entre otras. También se ha observado la relación de diferentes proteínas de las tres fracciones
de calostro (caseínas, suero y MFGM) con la protección inmunitaria del recién nacido.

En este campo, la proteómica es una poderosa herramienta de interés para incrementar el

conocimiento general de las proteínas presentes en el calostro y su relación con la PIT y el
desarrollo del sistema inmunológico. Además, serán necesarios más estudios para comprender
el proceso biológico de la absorción de proteínas de calostro a través del intestino en
rumiantes recién nacidos, particularmente en rumiantes domésticos menos estudiados, como
ovejas, cabras y búfalos de agua.

CONFLICTO DE INTERESES
Los autores no tienen ningún conflicto de intereses con respecto a los productos comerciales,
o cualquier otro aspecto, mencionado en este manuscrito.