Nombre: Galan Aguilar Melissa

Actividad: Previo 3

Fecha de entrega: 25 de agosto de 2021

Materia: Técnicas moleculares

Campus: Lomas Verdes

Carrera: Lic. Químico Farmacéutico Biotecnólogo

Profesor: Tapia Martínez Jorge Alberto

Semestre: 3° Semestre

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 Preparación de soluciones para la extracción de DNA
genómico.
¿Qué función tiene la solución de Tris-base para el aislamiento del DNA?
Tiene el nombre común de tris(hidroximetil) aminometano. Se trata de un compuesto
muy utilizado en el laboratorio para preparar disoluciones tampón; el grupo ácido-base que
ejerce el tamponamiento es el amino. Se comercializa en sus formas básica ("Tris base") y
ácida ("Tris hidrocloruro"), aunque la primera es la de uso más común. Un tampón
denominado "Tris-HCl" se prepara con Tris base a la concentración indicada y con el HCl
necesario para ajustar el pH al valor indicado.
En la electroforesis, es el agente tamponante que mantiene el pH.

Cálculos: 100 ml x 121.14 gr. / mol x 1 mol/1000 ml = 12.114 gr. de TRIS.

Se pesan 12.114 gr. de TRIS y se agregan poco a poco a 70 ml de agua bidestilada,
previamente colocados en un frasco de autoclavado limpio. Se coloca la solución en el
pHmetro y se ajusta el pH a 8.0 con HCl. Luego se completa el volumen a 100 ml. Se
autoclava la solución y se guarda a 4°C.
¿Qué función tiene la solución de EDTA para el aislamiento del DNA?
(Ácido etilen diamino tetra acético). Es un agente quelante de iones metálicos como Ca ++ y
Mg++. Inhibe la acción de las nucleasas al no haber cofactores libres para su actividad y así
protege al ADN. Se prepara a pH 8.0. El peso molecular del EDTA es 372.24 gr. / grmol.
Se van a preparar 100 ml de solución madre de EDTA de concentración 0.5 M
Cálculos: 100 ml x 372.24 gr. / mol x 0.5 mol/1000 ml = 18.612 gr. de EDTA.
Se pesan 18.612 gr. de EDTA y se agregan poco a poco a 70 ml de agua bidestilada,
previamente colocados en un frasco autoclavado limpio. Se coloca la solución en el
pHmetro y se ajusta el pH a 8.0 con perlas de Hidróxido de sodio. Si se pasa el pH se
agrega HCl en la cámara de extracción de gases. Luego se completa el volumen a 100 ml.
Se autoclava la solución y se guarda a 4°C.

2
¿Qué función tiene la solución de NaCl para el aislamiento de DNA?
(Cloruro de sodio). Las sales aumentan el poder iónico de la solución y ocasionan la
precipitación del ADN. El peso molecular del NaCl es 58.44 gr. / mol. Se van a preparar
100 ml de solución madre de NaCl de concentración 5 M.
Cálculos: 100 ml x 58.44 gr. /mol x 5 mol/1000 ml = 29.22 gr. de NaCl.
Se pesan 18.612 gr. de NaCl y se agregan poco a poco a 70 ml de agua bidestilada,
previamente colocados en un frasco de autoclavado limpio. Luego se completa el volumen
a 100 ml. Se autoclava la solución y se guarda a 4°C.
¿Qué función tiene la solución de SDS para el aislamiento de DNA?
Dodecil Sulfato De Sodio es un detergente iónico utilizado para desnaturalizar proteínas en
hibridación, purificación de ácidos nucleicos y sistemas de buffer de electroforesis. SDS
también se utiliza para disociar complejos de proteínas de ácido nucleico en protocolos de
extracción de ADN, para alterar las membranas celulares y para preparar soluciones de
prehibridación y / o hibridación.

Para preparar una solución de SDS al 10%, se debe disolver 100 g de SDS en 900 ml de
agua ddi. Calentar a 68 ° C para ayudar a la disolución. Ajustar el pH a 7.2 agregando unas
gotas de HCl. Por último, se deberá ajustar el volumen total a 1 L con agua ddi, y luego
dispensar en alícuotas.

- Actúa como agente solubilizante de proteínas y de componentes de tejidos y

membranas.
¿Qué función tiene el buffer TE en el aislamiento de DNA?
El tampón TE es una solución tampón de uso común en biología molecular, especialmente
en procedimientos que involucran ADN, ADNc o ARN. El "TE" se deriva de sus
componentes: Tris, un tampón de pH común, y EDTA, una molécula que quela cationes
como el Mg²⁺.
Se encarga de aumentar la estabilidad del ADN en muestras almacenadas a largo plazo o de
uso frecuente, pues inhibe DNasas presentes en una muestra.
Diagrama de flujo

3

Preparación Tris-base
(Tris(hidroximetil)aminometano)
1 M (PM:121.14 g/mol)
Realizar el cálculo para pesar los
gramos necesarios para preparar 50
ml de Tris 1 M. Disolver el Tris base
en 50 ml de agua destilada, ajustar el
pH a 7.6 agregando de manera
controlada HCl concentrado. En un
frasco de vidrio con tapón de rosca
esterilizar por autoclave a 121°C
durante 20 min.
Si al momento de utilizar esta
solución presenta un color
amarillo, será necesario volver
a prepararla. Almacenar a 4°C.
Preparación de SDS
(Dodecilsulfato sódico) 20% (p/v)
Realizar el cálculo para pesar los
gramos necesarios para preparar 20
ml de SDS al 20%. Disolver el SDS
en agua destilada con agitador
magnético, aplicando calor para
favorecer la disolución. Ajustar el pH
a 7.2 de maneracontrolada con HCl.
Almacenar a temperatura
ambiente, no es necesario
esterilizarlo.
Referencias
- Alejos, P., Aragón, M & Cornejo, A. (2009). Extracción y purificación de ADN.
Consultado: agosto 24,
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
Preparación de NaCl 2.5 M
(PM: 58.44 g/mol)
En un frasco de vidrio con
tapón de rosca esterilizar por Realizar el cálculo para pesar
autoclave a 121°C durante 20 los gramos necesarios para
min. Almacenar a 4°C. preparar 50 ml de NaCl 2.5 M.
Disolver el NaCl en 50 ml de
agua destilada.
Realizar el cálculo para pesar los
gramos necesarios para preparar 10
ml de EDTA 0.5 M. Agregar el EDTA En un frasco de vidrio con
en 200 ml de agua destilada y disolver tapón de rosca esterilizar por
con agitador magnético a una autoclave a 121°C durante 20
temperatura de 45°C. Primero se min
deberá ajustar el pH a 8.0 con NaOH
y posteriormente aforar al volumen
final (250 ml).
Preparación de EDTA (Ácido
etilendiaminotetraacético) 0.5
M pH 8 (PM: 372.24 g/mol)
- Limpieza de materiales y
En un frasco de vidrio con tapón entrega
de rosca esterilizar por autoclave
- Limpieza y orden del
a 121°C durante 20 min.
laboratorio
Calcular los volúmenes
necesarios de las soluciones
stock para preparar 10 ml de
solución final: Tris-base 10 mM
pH 7.6 y EDTA 1 mM.
Preparación de buffer TE pH 7.6
2021, de Bistream Sitio web:
4
- Castro, U. (2014). Reactivos empleados en la electroforesis de DNA. Consultado:
agosto 24, 2021, de Biomodel Sitio web:
http://biomodel.uah.es/an/plasmido/0/comp.htm#:~:text=EDTA-,Tris,de
%20tris(hidroximetil)%20aminometano.&text=Un%20tamp%C3%B3n
%20denominado%20%22Tris%2DHCl,tamponante%20que%20mantiene%20el
%20pH.
- Lofne, O. (2011). Dodecil Sulfato De Sodio (SDS). Consultado: agosto 24, 2021, de
Científica Senna Sitio web: https://www.cientificasenna.com/producto/detergentes-
ibi/
- Matzumura, G., Núñez, L & Yañez, A. (2013). Aislamiento de ADN. Consultado:
agosto 24, 2021, de UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA Sitio
web: http://publicacionescbs.izt.uam.mx/DOCS/biomolec.pdf
- Velasco, R. (2005). MOLECULAR MARKERS AND THE DNA EXTRACTION.
Consultado: agosto 24, 2021, de Dialnet Sitio web:
file:///C:/Users/HP/Downloads/Dialnet-
MarcadoresMolecularesYLaExtraccionDeADN-6117966.pdf