Compartimientos de replicación de

virus DNA
Melanie Schmid , a, * Thomas Speiseder , Thomas Dobner , a y Ramón A.
González   segundo

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ABSTRACTO
Los virus emplean una variedad de estrategias para usurpar y controlar las actividades celulares a
través del reclutamiento orquestado de macromoléculas a compartimentos específicos
citoplasmáticos o nucleares. La formación de tales microambientes celulares inducidos por virus
especializados, que han sido denominados viroplasmas, fábricas de virus o centros de replicación
de virus, complejos o compartimentos, depende de las interacciones moleculares entre factores
virales y celulares que participan en la expresión y replicación del genoma viral y están en algunos
casos asociados con sitios de ensamblaje de viriones. Estos compartimentos inducidos por virus
funcionan no solo para reclutar y concentrar los factores necesarios para los pasos esenciales del
ciclo de replicación viral, sino también para controlar los mecanismos celulares de la defensa
antiviral. En esta revisión, resumimos las características de los compartimientos de replicación viral
de diferentes familias de virus y discutimos las similitudes en las actividades virales y celulares que
están asociadas con su ensamblaje y las funciones que facilitan para la replicación viral.
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INTRODUCCIÓN
Los genomas virales se replican, expresan y ensamblan en asociación con
estructuras intracelulares que se forman o reorganizan mediante macromoléculas
virales y celulares. Estos conjuntos moleculares complejos ocupan sitios
citoplásmicos o nucleares, donde se acumulan el genoma viral y las proteínas
virales y celulares. Las moléculas y actividades que están asociadas con estos
compartimentos son diversas pero, invariablemente, incluyen componentes que
dirigen la replicación y expresión del genoma viral. La formación de
compartimentos donde se replican y ensamblan genomas virales se ha descrito
para ARN de sentido negativo (-), ARN de doble cadena (ARNds) y virus de ARN
positivo (+). En el caso de genomas de ARN de cadena positiva de una variedad
de familias de virus, la replicación del ARN se asocia con una reorganización
extensa y la generación de estructuras membranosas simples o dobles cooptadas
por complejos de replicasa viral (RC) asociados a la membrana. Los RC formados
por virus de ARN (+) han sido objeto de intensa investigación, y es para estas
familias de virus que hay más información disponible y se ha incluido en varias
revisiones excelentes ( 1 , - 5 ). Los virus de ARN y ADN que se replican en el

MARCELO COLLANTES
citoplasma forman fábricas o viroplasmas virales que requieren relocalización de
orgánulos, reorganización del retículo endoplásmico (ER), aparato de Golgi,
endosoma, lisosoma, mitocondrias u otras membranas celulares, y cambios en la
distribución y dinámica del citoesqueleto ( 1 , - 5 ). En el caso de los virus de ADN
que se replican en el núcleo, la formación de CR no parece requerir estructuras
membranosas sino, más bien, una reorganización de los componentes nucleares
que acompaña a la formación de estos compartimentos. Esta reorganización
incluye la redistribución de la cromatina y componentes de dominios nucleares,
tales como cuerpos nucleares de proteína de leucemia promielocítica (PML) (PML-
NB), cuerpos de Cajal (CB), gránulos de intercromatina (IG) o el nucléolo.
Aunque el ensamblaje de RC y sus componentes varía entre las diferentes
familias de virus, existen varias similitudes fundamentales entre los virus de ARN,
y se pueden hacer algunos paralelismos con los virus de ADN. Estas similitudes
pueden originarse del requerimiento de controlar los factores celulares comunes
que participan en la replicación o transcripción del genoma viral y la capacidad de
cooptar las vías biosintéticas celulares, así como la evasión de los mecanismos
comunes de la respuesta antiviral celular. En términos generales, los CR
concentran y compartimentan las moléculas virales y celulares que se requieren
para la síntesis de ADN o ARN y, como consecuencia de su ensamblaje y
arquitectura, proporcionan un andamio que maximiza la eficacia de la replicación
viral y simultáneamente oculta los genomas virales y sus productos de la
detección por mecanismos de defensa ( Tabla 1 ). Curiosamente, muchos factores
celulares que regulan las vías que son fundamentales para el metabolismo celular
normal también se asocian con RC y, aunque pueden desempeñar funciones
indirectas, comprender su impacto en la replicación del virus debe arrojar luz sobre
los mecanismos celulares que están en la base del virus-célula interacciones.
TABLA 1
Características de RC inducidas por diferentes familias de virus incluidas en esta
revisión a

Familia Géne Estructura Proteínas asociadas con RC Actividades

de ro y muy cerca celulares
virus espe de RC alteradas
cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

Poxvirid VV MTOC ( 12) ARN Factores de Transporte de

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Familia Géne Estructura Proteínas asociadas con RC Actividades
de ro y muy cerca celulares
virus espe de RC alteradas
cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

ae polimerasa, transcripción núcleo vírico a

factor de nuclear través de
transcripción (G3BP, microtúbulos a
VITF-3, Caprin-1), MTOC;reorde
proteína de factores de namiento de
unión a dsRNA iniciación de vimentina; recl
E3 ( 15 , 18 ) la traducción utamiento de
eIF4G y ribosomas,
eIF4E ( 15 ) chaperones y
mitocondrias
para
RC;reordenam
iento de
membranas
ER ( 12 , 15)

Asfarviri ASF MTOC ADN Factores de Fosforilación

dae V ( 36, 46 ) polimerasa, iniciación de de laminas A /
topoisomerasa, traducción C e
helicasa, eIF4G y interrupción
ligasa, proteína eIF4E de laminas de
de unión al la red de A /

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cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

ADN ( 42 , 43 ) ( 45 , 54 ) C; reordenami

ento de
vimentina; recl
utamiento de
ribosomas,
chaperones,
ubiquitina,
proteasomas y
mitocondrias
para
RC;reorganiza
ción de
microtúbulos;r
edistribución
de
membranas
ER, pérdida
de la
red trans -
Golgi,
reorganización
del
citoesqueleto

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virus espe de RC alteradas
cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

( 36 , 44 , -47 , 
49 , - 52 )

Herpes HSV- PML-NBs Proteínas PML, Sp100, La

viridae 1 ( 67 , - 72 ) reguladoras Daxx, SUMO interrupción
inmediatas- E3 ligasa de PML-
tempranas PIAS2β, NBs; degrada
ICP0, ICP4 e ARN ción
ICP27, polimerasa II, proteasomal
proteína de ADN de PML y
unión a ssDNA polimerasa Sp100; recluta
ICP8, proteína α, ADN miento del
de iniciación polimerasa γ, sistema PQC
de replicación topoisomeras al dominio
UL9, complejo a II, VICE; degrada
helicasa / proteínas ción de las
primasa DDR, proteínas
heterotrimérico proteína de DDR;explotaci
, ADN replicación A ón de DDR
polimerasa, ( 73 , 74 , 82,  celular
proteína 83 , 93 , 96 ) ( 74 , - 77 , 86 
accesoria de , -89 , 103 , 10

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cie
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virus Proteínas Proteínas
virales celulares

polimerasa 4 )
U42, proteínas
estructurales
( 72 , 77, 82 , 8
5 , 90 , 92 , 93)

Herpes HCM PML-NBs Proteínas IE1, Proteasomas La

viridae V ( 111 , 114 , 1 IE2, UL112- , proteína de interrupción
20 ) 113, ADN replicación A, de PML-
polimerasa p53, ARN NBs; reclutami
UL54, factor de polimerasa II ento de
procesividad ( 122 , 127 ,  proteosomas
asociado a la 139) a la periferia
polimerasa de
UL44, proteína RC;acumulaci
de unión ón de p53 en
ADNmc UL57, RC
helicasa ( 109 , 112 , 1
heterotrimérica 23 , 136 , 139 
UL105 / )
complejo de
primasa UL70,

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virus Proteínas Proteínas
virales celulares

subunidad
terminasa
pUL56
( 123 , 128 , -
131 )

Herpes- KSH PML-NBs LANA2, La

viridae V ( 147 , 151) proteína de modificación
unión a ssDNA SUMO-2/3 de
Orf6, factor de PML, la
transformación interrupción
de polimerasa de PML-NBs
Orf 59, ( 147 , 151 )
polimerasa
Orf9,
subcomplejo
tripartito de
primasa /
helicasa ( 147 )

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virales celulares

Herpes HVS PML-NBs Degradación

viridae ( 148 ) del
componente
de PML-NB
Sp100 ( 148 )

Herpes EBV PML-NBs BZLF, BNRF1, PCNA, La

viridae ( 152 ) factor de proteína de interrupción
procesamiento replicación C de PML-NBs
de ADN ( 154 , 156 ) por la
polimerasa dispersión de
BMRF1 los
( 152 , 153 ) componentes
de PML-
NB; inducción
de DDR
mediado por
ATM
( 155 , 156 )

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virales celulares

Herpes VZV PML-NBs Interrupción

viridae ( 158 ) de PML-NBs
( 158 , 159 )

Adenovi Aden PML-NBs E1A, E4orf3, Factor La

ridae oviru ( 162 , 163) E1B-55K, nuclear interrupción
s E4orf6, 1; proteínas de PML-NBs,
proteína de celulares la
unión a ssDNA implicadas redistribución
DBP, proteína en la de los
terminal de replicación componentes
cebador de del ADN, la de PML-NB en
proteína, E2B transcripción estructuras de
DNA y los factores seguimiento;e
polimerasa de corte y nfocando el
( 162 , 180 , 18 empalme complejo MRN
1 , 185 , 186 ) ( 188, 189 , 1 en las pistas y
91 ) la inhibición
de
DDR;explotaci
ón de los
componentes

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de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

del cuerpo de
Cajal y
gránulos de
intercromatina
( 162 , -172 , 1
81 , 183 , 184 
)

Parvovi AAV PML-NBs (en Proteínas Rep Replicación Usurpación de

ridae células de AAV, Ad de proteína Ad RCs
infectadas DBP ( 221 ) A, proteína ( 221 )
con Ad) de
( 221 ) replicación
C, ADN
polimerasa
δ / PCNA,
proteínas
DDR
( 222 , 223 )

Parvovi Parv Distinto de Proteínas no ADN DDR

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virus espe de RC alteradas
cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

ridae oviru cualquier estructurales polimerasa ( 242 , 246 )

s estructura NS1 y NS2, δ / PCNA,
nuclear proteínas de la ADN
prominente cápside VP1 y polimerasa
( 238 ) VP2 α, factor de
( 238 , 239 ) replicación A,
factor de
replicación
C, sensor
DDR y
proteínas de
señalización
( 240 , - 242 
)

Polyom BKV, PML-NBs TAg grande Proteínas La

aviridae JCV, ( 248 , 249, 2 ( 251 , 253 ) DDR, ADN interrupción
SV40 51 , 252) polimerasa α de PML-NBs
/ primasa, en la infección
ADN por el virus BK
polimerasa ( 249 )
δ / PCNA,

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de
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virales celulares

proteína de
replicación A,
proteína de
replicación
C,
topoisomeras
as I y II
( 249 , 251 )

Papillo VPH PML-NBs ADN helicasa ADN Explotación

mavirid ( 268 , 279, 2 E1, proteína polimerasa α del sistema
ae 81 , 283, 289  reguladora E2, / primasa, SUMOylation;r
) proteínas de la ADN eorganización
cápside L1 y polimerasa de PML-
L2 δ / PCNA, NBs; redistribu
( 273, 276 , 27 proteína de ción de las
7 ) replicación A, proteínas
topoisomeras DDR
as I y II, ( 284, 287 )
proteínas
DDR
( 274 , 275 , 

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virus espe de RC alteradas
cie
de
virus Proteínas Proteínas
virales celulares

278 , 279)

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a
 La referencia (s) que respalda la información informada en cada celda se
proporciona entre paréntesis para cada especie de virus.
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FÁBRICAS DEL VIRUS DEL ADN CITOPLÁSMICO

Virus nucleocytoplasmic large DNA.
Los virus de ADN grandes nucleocitoplasmáticos (NCLDV) abarcan siete familias
de virus de ADN eucariotas grandes que infectan una amplia gama de huéspedes,
desde algas hasta insectos y
mamíferos: Ascoviridae , Asfarviridae , Iridoviridae , Mimiviridae , Phycodnaviridae 
y Poxviridae , así como una propuesta reciente familia que incluye a
Lausannevirus y Marseillevirus ( 6 ), todos los cuales poseen un gran genoma que
varía de 150 a 1.2 Mb. Además de compartir varios genes centrales, todos forman
RC complejos citoplásmicos, llamados fábricas virales, que están involucradas en
la replicación y el ensamblaje viral y, por lo tanto, muestran una arquitectura
dinámica a través del ciclo de replicación viral. Sin embargo, algunos miembros de
NCLDV se replican exclusivamente en el citoplasma, mientras que otros se
replican de forma dependiente del tiempo tanto en el núcleo como en el citoplasma
( 7 , 8 ).
Las RC de poxvirus y el virus de la peste porcina africana (VPPA) se han
estudiado con mayor detalle y se han incluido en revisiones recientes ( 4 , 9 ). Al
igual que los aggresomes, que se forman como respuesta celular a la agregación
de proteínas ( 10 ), las fábricas virales de NCLDV se reúnen en el centro
organizador de microtúbulos (MTOC), dependen de la dinámica del motor de
dineína asociada a los microtúbulos y redistribuyen los filamentos de vimentina en
una estructura similar a una jaula. y reclutar mitocondrias, chaperonas, ubiquitina y
proteosomas ( 4 , 11 ) ( Fig. 1 ).

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FIGURA 1
Esquema de los compartimentos de replicación del virus de ADN, que indica la
localización dentro del citoplasma o núcleo. En particular, se muestran las familias
de virus Polyomaviridae , Papillomaviridae , Adenoviridae y Herpesviridae , así
como NCLDV y parvovirus autónomos. Los factores virales y las proteínas están
indicadas en verde y las celulares son grises, con PML-NB, que desempeñan un
papel destacado durante la replicación
de Polyomaviridae , Papillomaviridae , Adenoviridae y Herpesviridae , que se
muestran en azul.
Poxviridae .
Poxviridae posee la característica inusual de replicarse exclusivamente en el
citoplasma. Tras la fusión de la membrana y la liberación en el citoplasma, el
núcleo de poxvirus se transporta a través de microtúbulos (MT) hacia el
MTOC. Tal transporte está asociado con la reordenación de vimentina y el
reclutamiento de chaperonas y mitocondrias a sitios perinucleares, donde
finalmente se forman los compartimentos de replicación ( 12 ). La transcripción
genética temprana, sin embargo, ya se inició dentro del núcleo del virus por la
ARN polimerasa dependiente del ADN viral (Pol) y los factores de transcripción

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virales empaquetados en las partículas del virus junto con el genoma.  Por lo tanto,
un conjunto de aproximadamente 100 primeros ARNm se transcribe y,
posteriormente, se transloca en el citoplasma, donde, mientras que todavía se
asocia con MT, son contratados por los ribosomas para la traducción.Mientras
tanto, los núcleos virales se acumulan cerca del retículo endoplásmico rugoso
(rER). En el caso del virus vaccinia (VV), el prototipo y el miembro más estudiado
de Poxviridae , se requieren proteínas tempranas para recubrir el núcleo viral y
liberar el ADN viral, tan pronto como el núcleo viral alcance el RE ( 13 ). Los pasos
de desensamblaje para la eliminación del genoma dependen de la degradación
proteasómica mediada por ubiquitina de proteínas de la cápside previamente
ubicuitinadas, y se requiere una ubiquitina ligasa basada en Cullin3 para la
replicación del genoma ( 14 ). El genoma liberado desde el núcleo se asocia con
un conjunto de proteínas virales que participan en la replicación del ADN y
organización del precursor RC (revisado en la referencia 12 ), a medida que
avanza la replicación del ADN, el ARNm intermedio y tardío, así como los
ribosomas y factores de traducción en la expansión de las fábricas de ADN ( 15 ),
que luego se liberan del rER cuando comienza el ensamblaje del virión ( 16 , 17).
Los poxvirus codifican más de 130 proteínas, incluidos factores implicados en la
transcripción ( 18 ), que abarcan más de 20 proteínas virales implicadas en la
síntesis de ARN (revisado en la referencia 19 ), así como la replicación del ADN
(revisado en la referencia 20 ). Aunque estos incluyen un repertorio casi completo
de proteínas víricas responsables de la expresión génica viral y la replicación del
ADN, es probable que la reordenación extensa de las membranas ER reclute y
controle muchas proteínas celulares.De hecho, una reciente pantalla de
interferencia de ARN identificó 188 factores celulares necesarios para la infección
por VV, incluidas las funciones nucleares y citoplásmicas ( 14 ). Durante los
tiempos intermedios y tardíos de la infección, la síntesis de proteína celular se
regula negativamente ( 21 , - 23 ) y el ARNm celular se degrada por una enzima
de decapping viral ( 24 , 25 ). Además, se ha sugerido que Poxviridaepromueve la
traducción selectiva y aumentada de los ARNm virales en estudios in
vitro ( 26 ). Los RC altamente complejos rodeados de ER se compararon con los
mininúcleos, donde el ADN viral y los factores de transcripción y traducción se
incluyen dentro de un compartimiento membranoso. Sin embargo, aunque se ha
demostrado recientemente la transcripción y traducción ligada ( 15 ), la
compartimentación de las fábricas de virus conduce a la separación de la
expresión génica y la replicación del genoma, que se producen en
subcompartimientos distinguibles dentro o sobre la superficie de las fábricas de
virus.Katsafanas y Moss mostraron que la transcripción de ARN viral se produce
dentro de la fábrica, ya que tanto el ARN viral G8R como el ARN poli (U) se
localizan en compartimentos distintos que esos autores denominaron cavidades o
túneles de las fábricas de virus. Además, el marcaje con poli (U) mostró una
tinción citoplásmica reducida en comparación con las células no infectadas, lo que
concuerda con la degradación del ARNm celular durante los tiempos de infección
intermedios ( 15 ). La proteína de unión dsRNA E3 virales que contrarresta la
activación de la quinasa sensible a dsRNA (proteína quinasa R [PKR]) también se
observó en RC, al igual que el factor 3 de transcripción viral intermedio. También

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se reclutan factores nucleares necesarios para la transcripción del genoma viral. a
estos sitios ( 18 ), como lo son el celular G3BP y Caprin-1, ambos conocidos por
ser necesarios para la transcripción viral intermedia in vitro ( 15 ). Los factores de
iniciación de la traducción celular, el factor de iniciación eucariótico 4G (eIF4G) y
eIF4E, así como los ribosomas, también están presentes en RC virales; sin
embargo, queda un gran conjunto de ribosomas en el citoplasma, lo que sugiere
que la traducción preferencial del ARNm viral podría lograrse mediante el
secuestro de los factores de iniciación. La traducción del ARNm viral se produce
dentro de RC virales, ya que la β-galactosidasa expresada a partir de un VV
recombinante se limitó a estos compartimentos ( 15 ). Esta compartimentalización
de los factores de traducción, por un lado, sería relevante para la expresión
eficiente de los genes virales y, por otro lado, para la supresión simultánea de la
síntesis de proteínas celulares.
Durante la última fase de la infección, cuando se inicia el ensamblaje del virus, los
sitios de replicación se liberan del rER y las membranas en forma de media luna
se asocian con el ADN viral para iniciar un proceso de ensamblaje complejo
(revisado en la referencia 27 ).
Asfarviridae .
Al igual que Poxviridae , ASFV, el único miembro de la familia Asfarviridae en este
momento, se replica en fábricas de virus que se distribuyen en sitios citoplásmicos
perinucleares. Sin embargo, a diferencia de los poxvirus, el VPPA no solo recluta
factores nucleares en estas fábricas sino que también inicia la replicación del
genoma dentro del núcleo celular ( 28 , 31 ). Se cree que los fragmentos de ADN
precursores cortos se exportan posteriormente del núcleo a los RC citoplásmicos,
donde se usan como cebadores para la replicación del genoma completo
( 30 , - 32 ). Curiosamente, la síntesis de ADN citoplásmico es independiente del
núcleo ( 33 ). Dado su gran genoma, se cree que el virus codifica proteínas que
transportan activamente el genoma viral al núcleo, así como también factores que
dirigen la salida del ADN precursor al citoplasma. Mientras que dos proteínas
estructurales virales, p37 y p14, podrían estar involucradas en la entrada nuclear
( 34 ), la proteína p37 de la matriz viral, que exhibe actividades de transporte
nucleocitoplásmico, podría desencadenar la salida nuclear y el transporte del ADN
precursor viral a RC ( 34 , 35 ).
Tras la entrada del virus y la liberación del virión del sistema endosoma-lisosoma
en el citoplasma, el núcleo del ASFV se transporta al MTOC ( 36 ). Mientras tanto,
la transcripción de genes tempranos y la modificación postranscripcional del
ARNm ocurren dentro del virión; esto está asegurado por proteínas empaquetadas
tales como la ARN polimerasa viral y, por lo tanto, independiente de las enzimas
celulares ( 37 , 41 ). Sin embargo, la expresión genética tardía depende de la
replicación del ADN viral y de las proteínas virales tempranas. Para la síntesis de
ADN, el genoma de ASFV codifica un conjunto de proteínas responsables de la
replicación del ADN citoplásmico, que incluyen ADN polimerasa, topoisomerasa,
helicasa, ligasa y proteínas de unión al ADN ( 42 , 43 ).

MARCELO COLLANTES
El ASFV induce cambios importantes en la organización de la célula
infectada. Durante la fase temprana, las laminas A / C se fosforilan y la red de la
membrana nuclear junto a los sitios donde se acumula ADN viral recién sintetizado
se interrumpe ( 44 ). Los componentes del nucléolo (B23) y las manchas de
empalme (SC35) también se redistribuyen dentro del núcleo, y la desfosforilación y
degradación de la ARN polimerasa II son inducidas y contribuyen a interrumpir la
transcripción celular ( 44 ). Además, el ASFV induce el cierre de la síntesis de
proteína del hospedador reclutando eIF y ribosomas para RC ( 45 ).En puntos de
tiempo posteriores, cuando el ADN viral se acumula en las fábricas citoplásmicas
adyacentes a la membrana nuclear externa, la red de A / C laminina se altera aún
más y se secuestra en focos nucleares y citoplasmáticos. Estos últimos se
reclutan para los RC junto con otros componentes de la membrana nuclear
( 44 ). De manera similar a otros virus, las fábricas de ASFV citoplasmáticas se
han comparado con los agresores, ya que las fábricas virales emergentes se
forman en el MTOC y se rodean de vimentina y reclutan chaperonas celulares,
ubiquitina, proteosomas y mitocondrias. Además, de forma similar a los agresores,
las fábricas de ASFV requieren microtúbulos y proteínas motoras dineínicas para
su formación ( 36 , 46 ).
Los primeros sitios de replicación del ASFV aparecen como focos puntiformes de
ADN viral extranuclear, mientras que las proteínas estructurales se extienden por
todo el citoplasma. Más tarde, estas proteínas se transportan activamente al
MTOC a través de microtúbulos, donde se fusionan con las fábricas de ASFV
( 47 , 48 ). Curiosamente, la reorganización de los microtúbulos parece ser
fundamental para la replicación del ADN, así como la transcripción tardía del gen
( 46 , 47 , 49 ), presumiblemente mediante la estabilización de RC virales y la
concentración de proteínas celulares y virales necesarias para la replicación en el
MTOC ( 46 , 47 , 49 ). Se induce una reorganización adicional de los componentes
celulares a medida que avanza la replicación e implica la reubicación de las
mitocondrias y chaperonas, así como la redistribución de membranas de ER a RC,
la pérdida de la red trans -Golgi y la reorganización extensa del citoesqueleto
( 47 , 50 , - 52 ). El ASFV codifica un homólogo viral de enzimas de conjugación de
ubiquitina celular (UBC), lo que sugiere que el ASFV podría manipular respuestas
de células hospedadoras mediadas por ubiquitina o modificaciones de proteínas
virales o del huésped ( 53 ).
La subdivisión de las fábricas de poxvirus permite la separación de la expresión
del gen viral y la replicación del ADN ( 15 ). De manera similar, durante la infección
por VPPA, los factores de iniciación del huésped se reclutan para RC virales,
mientras que el ARN viral y los ribosomas del hospedador se localizan en las
periferias de las fábricas ( 54 ).
El ciclo de replicación de ASFV tiene lugar principalmente en estas fábricas de
virus, que se observan primero de 6 a 8 h después de la infección (pi).  Durante la
infección en curso, el material membranoso amorfo y circular así como un número
creciente de partículas virales inmaduras y maduras se acumulan en las fábricas
de ASFV de 12 a 24 h pi y siguen un proceso morfogenético complejo análogo al
de los poxvirus (revisado en la referencia 55 ).

MARCELO COLLANTES
Al igual que los poxvirus y el VPPA, otros miembros de las familias restantes de
NCLDV también forman fábricas citoplásmicas que comparten muchas de las
características descritas anteriormente; sin embargo, los genomas de los iridovirus
( 56 ) y los phycodnaviruses ( 57 ) se transportan inicialmente al núcleo, donde
comienza la replicación, mientras que la replicación del genoma de los mimivirus
parece tener lugar completamente en el citoplasma ( 6 ).
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CENTROS DE REPLICACIÓN DE VIRUS ADN NUCLEAR

Al igual que el NCLDV, los virus de ADN que se replican en el núcleo utilizan
estructuras de tipo aggresoma como sitios para el ensamblaje de fábricas
nucleares. Sin embargo, la ultraestructura y la arquitectura detallada de los sitios
de replicación y ensamblaje nuclear no se han estudiado con tanto detalle como
las fábricas citoplásmicas. La evidencia acumulada y los recientes estudios
bioquímicos han encontrado múltiples interacciones entre genomas virales y RC
con componentes y dominios nucleares, y la arquitectura de los compartimentos
de replicación viral ha sido revelada por una variedad de estudios de fluorescencia
y microscopía electrónica.
Tras la internalización de partículas de virus, los núcleos virales son transportados
al MTOC por motores dynectin / dynactin celulares, y los genomas virales se
entregan al núcleo mediante el desmontaje de la cápside viral en el poro nuclear
(revisado en las referencias 5 , 58 , 59 y 60 )
Dentro del núcleo, los genomas virales colonizan sitios nucleares específicos
mediante el uso de componentes celulares para asegurar la expresión y
replicación del gen viral eficiente. Estos llamados centros o compartimentos de
replicación (RC) a menudo se forman junto a PML-NB, estructuras nucleares que
han sido implicadas en la reparación del ADN, la regulación transcripcional, la
senescencia celular, la apoptosis y el estado antiviral inducido por interferón. El
componente estructural principal de PML-NBs es la proteína PML, también
conocida como TRIM19, un miembro de la familia de motivos tripartitos (TRIM)
que funciona como el organizador esencial de PML-NB y regula el tránsito de
proteínas mediante interacciones de proteínas mediadas por SUMO ( revisado en
la referencia 61 ). En la mayoría de los casos, los componentes del PML-NB están
dirigidos a los genomas virales como parte de un mecanismo de defensa
celular. Posteriormente, los factores celulares relocalizados a estos sitios son
utilizados por el virus para su replicación (DNA Pol, RNA Pol, factores de
transcripción, procesamiento postranscripcional y exportación de mRNA) y / o
inhibidos por el virus para prevenir / controlar la defensa antiviral celular ( Factores
reguladores de PML, p53, ATM, ATR, Daxx, STAT, interferón) ( 62 , 64 ) ( figura
1 , tabla 1 ).
La asociación de PML-NBs con aggresomes nucleares proporciona un enlace para
RCs para el almacenamiento, así como la eliminación de proteínas (mal plegadas)
( 63 , 65 ). A diferencia de los virus replicantes citoplásmicos, que ensamblan
partículas de progenie en estrecha asociación con membranas celulares, los

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viriones de virus ADN que se replican en el núcleo suelen ensamblarse muy cerca
de la transcripción viral y centros de replicación del ADN desprovistos de una
membrana circundante ( 1 , 5 ).
Herpesviridae .
Tras la infección con diferentes miembros de la familia Herpesviridae , se forman
centros de replicación similares ( Fig. 1 ). Las proteínas de la PML-NB se reclutan
para el genoma viral, y las RC virales que contienen el genoma parental se forman
adyacentes a las PML-NB. Sin embargo, los RC se establecen mediante
diferentes mecanismos, como se describe aquí, en particular, para el virus del
herpes simple 1 (HSV-1) y el citomegalovirus humano (HCMV).
HSV-1 (alphaherpesvirus).
Poco después de que el genoma del HSV-1 haya ingresado en el núcleo, la
defensa antiviral de la célula huésped se activa y los componentes de los PML-NB
se administran a los sitios asociados con el genoma parental ( 66 , 71 ). El
reclutamiento de PML, Sp100 y Daxx depende de sus motivos de interacción
SUMO. Además, las proteínas SUMOiladas así como la ligasa SUMO E3 celular
PIAS2β se encuentran en estos focos inducidos por HSV-1. Por lo tanto,
recientemente se ha propuesto que la defensa celular contra el ADN extraño está
regulada por la vía SUMO ( 72 ). La proteína reguladora vírica ICP0 se colocaliza
con estos focos e induce la degradación mediada por proteasoma de PML y
Sp100 actuando como una ubiquitina ligasa E3 ( 73 , - 77 ), lo que conduce a la
interrupción de PML-NB. Curiosamente, ICP0 se dirige específicamente a las
formas modificadas con SUMO-1 de las proteínas PML-NB para la degradación
proteasomal ( 78 , - 80 ). La replicación continua requiere el reclutamiento de
diferentes proteínas virales y celulares a los focos inducidos por virus, que
maduran a centros de replicación virales ( 81 , 83 ). Como su nombre lo indica,
estos compartimentos proporcionan un entorno óptimo para la expresión génica
vírica, la síntesis de ADN y el ensamblaje de las nucleocápsides de la progenie
( 84 , 85 ). Además, las estructuras de tipo aggresoma se forman adyacentes a las
RC temprano durante la infección. Estos denominados dominios VAP inducidos
por virus contienen chaperones moleculares, especialmente Hsc70, miembro de la
familia de chaperonas Hsp70, y proteosomas 20S que están secuestrados de una
distribución nuclear difusa, así como proteínas ubiquinadas ( 86 , 89 ).Tanto las
chaperonas moleculares como el sistema ubiquitina proteasoma son componentes
clave del control de calidad de las proteínas celulares (PQC). Inicialmente, la
ubiquitilación de las proteínas celulares (ver a continuación) durante la infección
viral conduce a la formación de los dominios VICE, una estructura similar al
aggresoma nuclear ( 86 ). Por lo tanto, el sistema de PQC celular reclutado para
estas estructuras puede explotarse para diferentes procesos durante la replicación
de HSV-1. Por lo tanto, las chaperonas moleculares permiten el ensamblaje y el
plegamiento adecuado de los complejos proteicos multiméricos virales, que
incluyen el andamio RC, el complejo helicasa / primasa y las cápsides virales.Los
dominios VICE sirven adicionalmente como sitios de almacenamiento para las
proteínas estructurales de la cápside viral que se han producido en exceso en

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comparación con las que se envasan en cápsides. Por lo tanto, se ha sugerido
que los dominios VICE son conjuntos que se forman tarde durante la infección
( 90, 91 ). La expresión viral viral en RC nucleares comienza inmediatamente
después de la entrada del genoma viral en el núcleo. El ADN lineal se circulariza, y
los productos génicos virales de temprano inmediato (IE), temprano (E) y tardío (L)
se expresan secuencialmente. La expresión activa del gen del herpesvirus en RC
requiere la translocación de las proteínas virales ICP0, ICP4 e ICP27, así como la
ARN polimerasa II a estos sitios ( 92 , 93 ). Tanto ICP0 como ICP4 estimulan la
transcripción de los genes E y L, por lo que ICP4 funciona como un activador
transcripcional principal y se requiere para la progresión más allá de la fase
inmediata-temprana. Por el contrario, ICP27 media en la exportación de la mayoría
de los ARNm de herpesvirus, interactuando con los receptores de exportación
celulares Tap / Nxf y Aly / Ref ( 94). La acumulación de proteínas virales y ADN
molde viral así como la translocación de proteínas celulares a los RC permiten la
expresión génica eficiente así como la replicación del genoma viral. Entre las
proteínas herpesvirales asociadas con RC se encuentran la proteína de unión a
ADN monocatenario (ssDNA) ICP8, el complejo helicasa / primasa heterotrimérico
y la polimerasa HSV-1. Además, las ADN polimerasas celulares α y γ y la
topoisomerasa II, así como las proteínas de reparación y recombinación del ADN,
se reclutan para los CR ( 82 , 83 , 95 , 96 ).
El ensamblaje de viriones de progenie, incluida la formación de cápsides y el
empaquetamiento de ADN, es un proceso estrictamente regulado que tiene lugar
en los RC nucleares ( 97 , 98 ). Típicamente, este proceso involucra proteínas que
forman un andamio interno donde se ensambla la cubierta de la cápside y el
genoma se incorpora posteriormente ( 99 , - 101 ). A partir de entonces, la
nucleocápside ensamblada sale del núcleo mediante un mecanismo único de
gemación a través de la membrana nuclear. Finalmente, el virión se transporta a
través de vesículas secretoras de transporte a la membrana plasmática y se libera
tras la fusión de la membrana ( 102 ).
Las características comunes de los virus de ADN son la formación de ubiquitin
ligasas E3, como se describió anteriormente para HSV-1 ICP0, así como la
desregulación de la respuesta de daño celular al ADN (DDR). Lo más interesante
es que tanto la degradación de las proteínas celulares como la modulación de la
DDR están relacionadas en gran medida. Ya en la fase temprana de la infección
por HSV-1, las proteínas implicadas en la recombinación homóloga (HR) ( 83 ) así
como la unión final no homóloga (NHEJ) del DNA ( 95 , 103 ) se reclutan a RC
virales. Curiosamente, a diferencia de los adenovirus, que inhiben este mecanismo
antiviral intrínseco (véase a continuación), la DDR celular parece ser beneficiosa
para el VHS-1. Sin embargo, HSV-1 también manipula el DDR al desactivar
algunos de sus componentes y al utilizar otros. ICP0 interfiere con ambas vías de
DDR al inducir la degradación de diferentes proteínas diana, entre ellas, la
subunidad catalítica de la proteína quinasa DNA-PK dependiente de ADN
( 104 , 105), que está involucrada en la detección de NHEJ, así como del E3
ligasas RNF8 y RNF168 ( 106 , 107 ), que promueven el anclaje de ATM a sitios
de daño del ADN, es decir, el mecanismo de detección de HR.Por el contrario, el

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complejo Mre11-Rad50-Nbs1 (MRN) así como la activación de ATM quinasa, que
están implicados en NHEJ, parecen ser beneficiosos para la replicación de HSV-1
( 103 ). Curiosamente, aunque la proteína de replicación fosforilada A (RPA) se
excluye de RC y se secuestra en dominios VICE adyacentes, evitando así la
señalización de ATR normal ( 108 ), ATR y ATRIP se localizan en RC y se ha
demostrado que conducen a la replicación de HSV-1 ( 73 )
HCMV (betaherpesvirus).
Los centros de replicación de citomegalovirus humanos se forman adyacentes a
PML-NB. Diferentes estudios han sugerido que el reclutamiento de proteínas de
PML a la nucleocápside viral poco después de su administración en el núcleo es
parte de la defensa del huésped antiviral. Sin embargo, esto es posteriormente
obstaculizado por diferentes proteínas HCMV. El represor transcripcional celular
Daxx inhibe la expresión del gen HCMV del principal promotor IE. Esto es eludido
por la proteína de tegumento viral pp71 ( 109 , - 111 ). Curiosamente, pp71
estimula la degradación proteasomal de Daxx por un mecanismo que es
independiente de una vía de ubiquitina funcional ( 112 ). Además, se encontró que
pp71 activaba Daxx SUMOylation, aunque hasta el momento no se ha descrito
ninguna función para esta modificación ( 113 ). Además, el transactivador viral IE1
se colocaliza con PML-NB e interrumpe estas estructuras ( 114 ) al interferir con la
modificación de SUMO de PML ( 115 ). Por lo tanto, tanto pp71 como IE1
cooperan en la alteración de las PML-NB celulares y antagonizan los mecanismos
de defensa del huésped. Además, los estudios sobre estas proteínas HCMV
revelaron un vínculo con la vía de SUMOilación celular, como se ha observado
para otros virus de ADN. De acuerdo con estos efectos sobre PML-NBs celulares,
se encontró que la regulación a la baja de Daxx y / o PML así como del
componente PML-NB Sp100 aumentan la replicación viral ( 116 , - 119 ). Además,
la HCMV quinasa pUL97 parece ser una proteína viral adicional que interfiere con
la función de PML. pUL97 inhibe la formación de complejos entre PML y la
proteína del retinoblastoma (Rb) mediante la hiperfosforilación de Rb
( 120 , 121 ).Curiosamente, la actividad quinasa de pUL97 también inhibe la
formación de aggresomes nucleares ( 121). En contraste con la proteína de
tegumento viral pp65, que induce la agregación y el secuestro inadecuados del
tegumento viral y las proteínas de la cápside, pUL97 evita este efecto
indeseable. Por lo tanto, pUL97 se propone desempeñar un papel importante en el
ensamblaje del virus progenie.
Similar a HSV-1, HCMV expresa sus genes en una cascada regulada
temporalmente, con el ciclo de replicación dividido en fases IE, E y L. Las
proteínas inmediatas-tempranas IE1 e IE2 estimulan la expresión génica viral E y
L, con IE2 como la fuerza impulsora de la replicación de HCMV en general.Como
era de esperar, el ARN Pol II y los factores de empalme se colocalizan con genes
IE en RC ( 122 ).Mientras que IE2 se colocaliza con los RC virales al interactuar
con el genoma viral, se ha informado que la localización de IE1 a PML-NB
depende de la interacción con PML ( 123 ).

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Recientemente, se informó que la replicación viral eficiente requiere proteasomas
celulares activos ( 124 , -126 ). La infección por HCMV específicamente conduce a
una mayor actividad de la ruta proteasomal.Además, la replicación activa del ADN
viral induce el reclutamiento de proteosomas a la periferia de las RC virales, donde
tiene lugar la transcripción del ARN activo. Esto es consistente con la observación
de que la ruta del proteasoma celular se explota para mejorar la expresión génica
temprana y tardía ( 127 ).
Ya temprano durante la infección por HCMV, las proteínas UL112-113 se localizan
junto con IE2 a los focos de preruplicación y se encuentran en RC durante todo el
ciclo de vida viral ( 128 , - 130 ). UL112-113 codifica cuatro fosfoproteínas, que se
supone que reclutan proteínas implicadas en la replicación del ADN, a RC virales
( 128 , 131 ). Estas proteínas virales del núcleo de replicación incluyen la ADN
polimerasa UL54, el factor de procesividad UL44 asociado a la polimerasa y la
proteína de unión a ADNmc UL57, así como un heterotrímero formado por la ADN
helicasa UL105, la primasa UL70 y el factor asociado a la primasa
( 132 , 133 ). Tras la entrada en el núcleo, el genoma de HCMV se circulariza, y un
mecanismo de replicación de círculo rodante produce concatenarios al final de la
infección ( 136 , 135). La subunidad terminasa HCMV pUL56 potencialmente
vincula la replicación del ADN con el empaquetamiento. Curiosamente, esta
proteína participa en la escisión y el empaquetamiento de los genomas virales de
la progenie ( 136 ) y también se localiza en los RC virales ( 137 ).
Como se describió para el VHS-1, los virus de ADN a menudo interfieren con la
maquinaria de DDR celular. La infección por HCMV induce la acumulación del
supresor tumoral p53 ( 138 , - 140 ).Simultáneamente, el virus compromete la
capacidad de p53 para transactivar los objetivos celulares aguas abajo
( 138 , 140 , - 142 ). Por lo tanto, HCMV puede explotar las funciones de p53 para
activar completamente las células infectadas, inhibiendo paralelamente su
capacidad para regular tanto la DDR como la apoptosis. Curiosamente, tanto p53
como RPA se relocalizaron en RC virales ( 143 ). Por lo tanto, podría ser que
ambas proteínas celulares se utilicen para ayudar en el control del daño del ADN
viral y / o para promover la síntesis eficaz del ADN viral, como se ha informado
para otros virus de ADN ( 144 , 146).
Otros herpesvirus.
Curiosamente, aparte de HSV-1 y HCMV, varios herpesvirus contrarrestan las
propiedades antivirales de PML-NB y provocan la alteración de estos cuerpos y / o
la relocalización de componentes específicos de PML-NB. Por lo tanto, los
miembros de la familia de gammaherpesvirus, como herpesvirus asociado a
sarcoma de Kaposi (KSHV) ( 147 ), herpesvirus saimiri (HVS) ( 148 ) y virus de
Epstein-Barr (EBV) ( 152 ), expresan proteínas con propiedades similares a HSV-
1 ICP0. Además, los compartimentos de replicación viral se desarrollan en
asociación con los restos de PML-NB ( 147 , 148 , 152 ).
Para KSHV, se ha demostrado que poco después de la infección, los
componentes de PML-NB se localizan en los genomas virales y los
compartimentos de prereplicación ( 147 ). Curiosamente, PML es SUMO-2

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modificado por LANA2, el antígeno nuclear asociado a la latencia 2. Como la
modificación SUMO-2/3 de PML se ha descrito para inducir la degradación de
PML por ubiquitinación por la ubiquitina ligasa celular RNF4 ( 150 ), esta
modificación probablemente conduzca a la degradación de PML mediada por
proteosoma y, por lo tanto, a la interrupción de PML-NB. Por lo tanto, LANA2
parece interferir con la represión transcripcional mediada por PML ( 151 ). La
replicación del ADN durante el ciclo lítico de la infección por KSHV requiere seis
proteínas virales, que incluyen la proteína de unión a ADNss Orf6, el factor de
procesado de la polimerasa Orf59 y la polimerasa Orf9, así como un subcomplejo
tripartito de primasa / helicasa. Curiosamente, la cotransfección transitoria de
estos factores da como resultado la formación de estructuras nucleares que se
parecen a los compartimentos de replicación. Además, estos pseudo-RC están
rodeados por PML-NBs ( 147 ).
Como se mencionó anteriormente, HVS también antagoniza la defensa de células
intrínsecas del huésped mediadas por PML-NB. Específicamente, la proteína de
teflón HVS Orf3 induce la degradación del componente de PML-NB Sp100,
mientras que la distribución y / o funcionalidad de PML y Daxx permanece sin
cambios. Aunque la PML restringe la replicación de HVS, podría jugar un papel
importante para el establecimiento de una infección latente ( 148 ).
Los herpesvirus pueden causar infección latente y lítica de la célula
huésped. Durante la latencia del EBV, los PML-NB permanecen intactos, y la
replicación del virus no está asociada con estas estructuras nucleares. Sin
embargo, el cambio de la replicación del EBV latente a la lítica altera
inmediatamente los PML-NB al dispersar Sp100, Daxx y NDP55. Por el contrario,
la PML se dispersa solo después del inicio de la replicación lítica (  149 ). Para la
interrupción de PML-NB, la proteína BZLF inmediata temprana de EBV sola es
suficiente. Curiosamente, BZLF compite con PML por SUMO-1 libre, lo que
conduce a una disminución de PML modificada con SUMO-1 ( 152 ). Además, el
VEB expresa una proteína de tegumento que se dirige específicamente a la
defensa intrínseca de la célula huésped, activando de este modo la transcripción
génica temprana del virus. Esta proteína, BNRF1, interrumpe el complejo de
remodelación de la cromatina Daxx-ATRX celular, que parece ser necesario para
el cambio de la infección latente a la lítica por la alteración de la cromatina viral
( 153 ). Otras proteínas que se localizan en los compartimentos de replicación e
interactúan con el factor de procesamiento de la EBV ADN polimerasa BMRF1
incluyen el antígeno nuclear celular proliferante (PCNA) y el factor de replicación C
(RFC), así como varias proteínas del sistema de reparación del desapareamiento
celular. Por lo tanto, EBV podría evitar eventos de recombinación entre los tramos
homólogos en sus secuencias de genoma ( 154 ).Curiosamente, la replicación
activa del ADN del VEB induce un DDR mediado por ATM ( 155 ), que está
modificado por la quinasa viral BGLF4. En última instancia, esto da como
resultado un entorno óptimo para la amplificación del genoma viral, mientras que
la síntesis de ADN de la célula huésped está bloqueada ( 156 , 157 ).
Similar a HSV-1, la proteína del virus de la varicela-zoster (VZV) Orf61, un
homólogo de HSV-1 ICP0, altera las PML-NB celulares. Los motivos que

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interactúan con SUMO (SIM) presentes en Orf61 son críticos tanto para la
interacción como para la dispersión de estas estructuras nucleares ( 158 ). Una
reconstrucción tridimensional (3D) utilizando microscopía electrónica de barrido de
matriz de sección serial confirmó que los NL PML se desmontan mediante la
interacción de SIM Orf61 con PML y reveló que las cápsides de VZV quedan
atrapadas en grandes jaulas de PML ( 159 ).
En conjunto, la replicación de los herpesvirus se produce junto a los cuerpos
nucleares celulares de PML, que se sabe que restringen negativamente la
replicación viral. Curiosamente, los herpesvirus desarrollaron varios mecanismos
para contrarrestar la función de PML-NB. Por lo tanto, es muy probable que
diferentes herpesvirus se dirijan a vías celulares similares, que implican DDR,
remodelación de la cromatina, control del ciclo celular y maquinaria de
transcripción, para fomentar su replicación. Hasta ahora, estos mecanismos han
sido mejor estudiados para HSV-1 y HCMV; sin embargo, los resultados recientes
revelaron las primeras percepciones detalladas sobre la replicación de otros
miembros de Herpesviridae .
Adenoviridae .
Tras la infección de la célula, las partículas de adenovirus (Ad) se transportan
hacia el MTOC y se desensamblan en el poro nuclear. Inmediatamente después
de que el genoma viral se libera en el núcleo, es dirigido por la maquinaria de
represión de la célula huésped. Los componentes PML-NB, como Daxx, median la
represión transcripcional del genoma Ad, específicamente, del promotor E1A
temprano inmediato (revisado en las referencias 64 y 68 ). Curiosamente, esto es
contrarrestado por la proteína de la cápside VI, que ingresa al núcleo en
asociación con el genoma Ad ( 160 ). En el curso de una infección adenoviral,
Daxx se apunta a la degradación proteasomal por la proteína E1B-55K temprana
( 161 ).
Otra proteína temprana, E4orf3, se asocia con cuerpos nucleares de PML e induce
su disrupción desde los focos puntiformes a las estructuras en forma de cadenas
( 162 , 163 ). Específicamente, PML, Sp100, Daxx, SUMO-1 y TIF1α son
reubicados en estas pistas por E4orf3 ( 163 , - 166 ), que podría parecerse a los
agresores nucleares ( 167 ). Estas estructuras que contienen PML se localizan
después adyacentes a RC virales. Por lo tanto, la respuesta antiviral se inhibe,
mientras que los componentes específicos de estos cuerpos nucleares podrían ser
explotados por el virus para una replicación eficiente ( 162 , 163 ).
Además de la defensa antiviral dependiente de interferón mediada por los
componentes de PML-NB, E4orf3 se dirige al complejo de detección de daño de
ADN Mre11-Rad50-Nbs1 (MRN) en las pistas ( 168). En última instancia, el
complejo MRN se redistribuye a los aggresomes citoplásmicos por E4orf3
( 169 ).Además, Mre11 y otras proteínas celulares están ubiquitinadas por E1B-
55K y E4orf6, que ensamblan un complejo de ubiquitina ligasa E3 dependiente de
Cullin y por lo tanto se dirigen a proteínas para la degradación proteasomal
(revisado en la referencia 170 ). Además de Mre11, otras proteínas de la
respuesta celular al daño del ADN, incluyendo la ADN ligasa IV y la helicasa

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Bloom (BLM), se conducen a la degradación dependiente del complejo E1B-55K /
E4orf6 para evitar la concatenación de genomas dsDNA virales mediados por esta
vía ( 168 , 171 , 172 ).
Otra proteína diana del complejo de ubiquitina ligasa E3 es la proteína supresora
de tumores p53. Durante la fase temprana de expresión, p53 es inducida por E1A
(ver a continuación). Dado que p53 transactivates varias proteínas corriente abajo,
la inducción de p53 por E1A es potencialmente proapoptótica ( 173 ).Además de
proteínas de células hospedadoras como el supresor tumoral p53, E1A también
activa la transcripción de genes virales tempranos. Ambos están mediados por la
unión exclusiva de E1A al supresor tumoral de retinoblastoma (pRB)
( 174 , 177 ). Esto conduce a la disociación de pRB del factor de transcripción E2F
y, posteriormente, a la activación constitutiva del promotor temprano E2F sensible
celular y viral E2F ( 178 , 179 ). Por lo tanto, E1A económicamente induce la
progresión del ciclo celular, así como la expresión de proteínas virales requeridas
para la replicación del ADN viral.
La transición a la última fase de la infección de Ad se caracteriza por el inicio de la
replicación del genoma y la posterior expresión de genes de la unidad de
transcripción tardía principal (MLTU). Este cambio coincide con la formación de
RC virales ( 180 ) y una mayor reorganización de los cuerpos nucleares
( 181, - 185 ). La replicación del ADN adenovírico se inicia mediante un
mecanismo único de sensibilización que implica un cebador de proteína viral, la
proteína terminal (TP), y se logra mediante la ADN polimerasa E2B viral. Además,
las proteínas virales y celulares implicadas en la replicación del ADN de la célula
huésped se reclutan en sitios de síntesis de ADN viral ( 186 , 187 ). Los productos
de ADN monocatenario se asocian con la proteína de unión ADNmc (PAD) y
forman inclusiones nucleares que son de tamaño variable y aparecen como
semilunas o esferas ( 180 , 185 ). Alrededor de estos sitios de acumulación de
ssDNA está la zona replicativa periférica, donde tienen lugar tanto la replicación
como la transcripción.Los sitios punteados de replicación activa están dispuestos
como un anillo que rodea el ADNss. Sin embargo, el dsDNA replicado se desplaza
de estos focos de replicación a la periferia, donde sirve como plantilla para la
transcripción de genes virales tardíos ( 185 ). La transcripción activa conduce a la
formación de una zona de transcripción y corte y empalme en forma de anillo que
rodea el ADNss y los focos de replicación ( 188 ). Esta zona contiene ADN de
doble cadena y ARN viral naciente, así como factores de transcripción y corte y
empalme. Estos factores, que juegan un papel importante en mejorar la expresión
del gen Ad, se reclutan de CB, que se desarma progresivamente durante la fase
tardía, y los centros de replicación se fusionan a medida que ocupan regiones de
gránulos de intercromatina ( 181 , 183, 185 , 189 , 191 ).
La transcripción y el empalme, por otro lado, están estrechamente vinculados a la
exportación preferencial de transcripciones de Ad en la última fase de la
infección. La repetición continua de anuncios conduce a la concentración de
factores de empalme y ARN vírico en los gránulos de intercromatina, que se
vuelven progresivamente más grandes ( 182 , 190 ). Esto podría mejorar el
procesamiento o el tráfico, así como el transporte de ARN. La exportación

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preferencial de transcripciones tardías Ad está mediada por las primeras proteínas
Ad E1B-55K y E4orf6. Curiosamente, ambas proteínas están presentes en RC
virales ( 191 ). El mecanismo subyacente, sin embargo, aún no está claro, aunque
los resultados recientes apuntan a diferentes escenarios. Primero, la actividad del
complejo E3 ubiquitina ligasa es necesaria para una exportación eficiente
( 189 , 192 ). Dado que durante la replicación de Ad el transporte de ARNm celular
a granel se bloquea simultáneamente ( 193 , 194 ), es probable que una o más
proteínas implicadas en su exportación se dirijan a la degradación proteasomal,
que a su vez podría promover la exportación preferencial de transcritos virales. En
segundo lugar, otros estudios sugirieron que el receptor celular de exportación de
ARNm celular a granel, TAP / NXF1, participa en la exportación de transcripciones
tardías Ad ( 195 ). Una hipótesis interesante es que los factores de exportación
celular se relocalizan en los centros de replicación y transcripción viral y, por lo
tanto, promueven la exportación eficiente de los ARNm recién transcritos del
núcleo. Simultáneamente, estas proteínas se agotarían en el resto del
compartimento nuclear, lo que también podría explicar el bloqueo del transporte de
ARNm celular. Sin embargo, esto solo se aplica a la fase tardía de la infección,
cuando se forman RC. Durante la fase temprana, Ad explota la vía de exportación
dependiente de CRM1 para sus transcripciones ( 196 ).
De manera similar a los Herpesviridae , los centros de replicación de Ad forman
adyacentes a los NLP-LMP y, por lo tanto, es probable que contrarresten las
actividades antivirales dependientes de PML y se beneficien de los componentes y
el andamio de la PML-NB. Curiosamente, se sabe que las proteínas E1B-55K y
E4orf3 participan en SUMOilación de sustratos celulares ( 197 , 198 ), y ambas se
asocian con PML-NB ( 199 ).
Parvoviridae .
Los miembros de la familia Parvoviridae difieren en algunos aspectos interesantes
de otros virus que se replican en vertebrados. En contraste con los virus tumorales
de ADN, los parvovirus no son capaces de inducir la entrada en fase S de la célula
huésped; más bien, el virus permanece inactivo a menos que la célula anfitriona
entre en la fase S. Además, los parvovirus que infectan a los vertebrados se
pueden distinguir en dos grupos: virus que replican autónomamente y virus que
dependen de la coinfección de un virus auxiliar y, por lo tanto, se clasifican como
dependovirus ( 200 ).
Virus adeno-asociados
Los miembros que pertenecen al género Dependovirus son los denominados virus
adenoasociados (AAV), que se describieron por primera vez como que requieren
coinfección por adenovirus ( 201 , 202 ). Más recientemente, los virus HSV-1 y -2,
CMV y pseudorabies se han identificado como virus auxiliares ( 203 , - 206 ). En
ausencia de un virus auxiliar, el genoma de AAV se integra en el genoma de la
célula huésped ( 207 , 208 ). Sin embargo, en el caso de la infección por el virus
auxiliar de tales células infectadas de forma latente, la expresión del gen AAV se
reactiva y el ciclo de replicación progresa ( 209 ).

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AAV contiene dos marcos de lectura abiertos que codifican cuatro proteínas no
estructurales (Rep) y tres estructurales (Cap) ( 210 , - 212 ), así como una proteína
recientemente identificada que participa en el ensamblaje de la cápside, la
proteína AAP asociada al ensamblaje ( 213 ). Se sabe que Rep78 y Rep68
desempeñan un papel clave durante la amplificación de ADN de AAV ( 211 , 212 ),
mientras que se supone que Rep52 y Rep40 están implicados en el
empaquetamiento de ADN ( 214 , 215 ).
Además, AAV utiliza proteínas auxiliares tanto virales como celulares para su
propia replicación. Hasta ahora, los adenovirus se han estudiado de manera más
exhaustiva en el contexto del virus colaborador de AAV, y por lo tanto se discutirán
principalmente aquí. Se requieren varios productos genéticos tempranos Ad
involucrados en la regulación de diferentes procesos durante la infección de Ad
para la función completa del virus Ad helper ( 208 ). Por lo tanto, Ad E1A potencia
la transcripción de ambos genes Ad early así como de los genes AAV Rep y Cap
( 216 ), y activa la expresión génica celular requerida para la entrada en fase S y la
síntesis de proteínas de replicación de ADN ( 208 ). Además, la ubiquitina ligasa
E3 dependiente de Ad regula la expresión del gen AAV, muy probablemente
facilitando el transporte de ARNm y promoviendo la replicación del ADN de AAV
( 217 ). La proteína de unión a ADN adenovírico DBP estimula la expresión génica
de AAV y el alargamiento del ADN, así como la formación de partículas de AAV
( 218 , 219 ). Por lo tanto, DBP es la única proteína Ad, que se ha propuesto que
esté directamente implicada en la amplificación del genoma de AAV ( 219 ), en
contraste con el cebador de la proteína Ad y la ADN polimerasa, que son ambos
prescindibles para la replicación de AAV.
Curiosamente, AAV usurpa los compartimientos de replicación de Ad para su
propia replicación de ADN en RC asociados a PML-NB ( 220 ). Por lo tanto, el
genoma de AAV y las proteínas Rep se relocalizan en Ad RC ( 221 ). Para
garantizar la amplificación del ADN de AAV, además de Ad DBP, también se
requieren componentes celulares en estas estructuras nucleares, incluyendo RPA,
el factor de replicación C (RFC), PCNA y ADN polimerasa \ delta ( 222 , 223 ). Por
lo tanto, una coinfección con adenovirus no solo proporciona al AAV proteínas y
factores Ad esenciales, sino que también reprograma la célula huésped en
consecuencia. Sin embargo, el ensamblaje de los viriones de la progenie de AAV
no se realiza en los RC, sino que tiene lugar en el nucleolo ( 213 , 224 ).
Curiosamente, las funciones de la célula huésped pueden compensar una
infección por el virus auxiliar en condiciones específicas que inducen una
respuesta de estrés celular ( 225 , 226 ). De acuerdo, la respuesta de daño del
ADN celluar también se induce durante la coinfección de Ad. Recientemente, dos
estudios independientes encontraron que las proteínas DDR se activan y en parte
se relocalizan en RC, por ejemplo, DNA-PK, Nbs1 fosforilada, Ku70 / Ku86 y / o
ATM ( 227 , 228 ). Los experimentos de inhibición han sugerido que existe un
requisito claro, aunque poco claro, para que las proteínas DDR celulares fomenten
o inhiban la replicación de AAV ( 227 ).
Parvovirus autónomos.

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A diferencia de los dependovirus, los parvovirus autónomos dependen
estrictamente de las funciones de la célula huésped, especialmente en la
progresión de la célula a la fase S ( 229 , 230 ). El genoma de los parvovirus
autónomos comprende dos unidades de transcripción, que codifican las proteínas
no estructurales NS1 y NS2 y las proteínas de la cápside VP1 y VP2 (  231 ). NS1
es una fosfoproteína multifuncional que actúa como un activador transcripcional de
promotores virales, así como iniciador y helicasa en la replicación de ADN
parvoviral ( 232 , - 237 ). Además, NS1 se colocaliza con ADN viral replicado en
focos nucleares inducidos por virus ( 238 , 239 ).
Estos compartimentos representan centros de replicación de parvovirus
denominados cuerpos autónomos de replicación asociada a PV (APAR). Además
del ADN de NS1 y parvovirus, las proteínas de replicación de células
hospedadoras que facilitan la amplificación del genoma viral, como PCNA, RPA y
RFC, así como la ADN polimerasa α y δ, se acumulan en estos cuerpos
( 238 , - 241 ). Curiosamente, los RC de parvovirus son distintos de cualquier
estructura nuclear prominente, como PML-NB, nucleolos, cuerpos en espiral y / o
dominios moteados ( 238 ). Por lo tanto, el parvovirus induce la formación de
nuevas estructuras en el núcleo de la célula hospedadora y simultáneamente
recluta proteínas celulares requeridas para estos compartimentos. La acumulación
de ADN viral y componentes de la cápside conduce a la expansión de estos RC,
ya que finalmente ocupan la mayor parte del núcleo de la célula hospedadora
( 242). Hasta la fecha, se han recopilado datos controvertidos sobre si el
ensamblaje de la cápside se produce en el compartimiento nuclear
( 224 , 243 , 244 ) o citoplásmico ( 245 ). Parece probable que la proteína de la
cápside VP2 desencadena el ensamblaje citoplásmico de los oligómeros VP1 /
VP2 y, además, media la importación nuclear de estos complejos por su señal de
importación nuclear. Secuencialmente, las cápsides virales se pueden ensamblar
en el compartimento nuclear ( 246 ).
Similar al AAV, el virus diminuto de los ratones (MVM), un parvovirus autónomo,
se ha descrito recientemente para inducir una respuesta robusta al daño del ADN
y explotar esta vía celular para su propio beneficio. Las proteínas del sensor DDR
(Nbs1, Mre11, ATM, DNA-PK y RPA) y las proteínas de señalización (γH2AX,
Ku70 y Ku86) se acumulan en cuerpos de APAR en respuesta a la replicación de
ADN viral activo. Las modificaciones reguladas por virus de DDR celular incluyen
la degradación dependiente del proteasoma de Mre11 y, aparentemente, la
utilización de ATM, ya que los inhibidores de esta quinasa restringen la replicación
de MVM. A diferencia de AAV, la señalización de DDR en células infectadas con
MVM está mediada por esta ATM quinasa ( 247 ).
Polyomaviridae .
La unión de los factores de transcripción celular al genoma poliomavírico media su
importación al núcleo. Posteriormente, el genoma se entrega a sitios nucleares
específicos, a saber, PML-NB ( 248 ).
Durante la progresión del ciclo de vida viral, varias proteínas virales y celulares se
colocalizan con el genoma de poliomavirus (PyV) en PML-NB ( Fig. 1 ). Estos

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factores incluyen proteínas implicadas en la expresión génica y la replicación del
ADN, así como proteínas de la cápside viral. En conjunto, esto sugiere que estos
sitios nucleares pueden ser importantes para la replicación de PyV. Curiosamente,
los estudios sobre varios tipos de PyV han dibujado diferentes escenarios. Por lo
tanto, la ausencia de PML, el principal componente estructural de PML-NBs, no
tiene ningún efecto sobre la replicación viral o incluso la potencia
( 249 , 250 ). Específicamente, los virus BK (BKV) parecen contrarrestar las
funciones de PML-NB mediante una reorganización dramática de estas
estructuras y la dispersión de dos de sus componentes principales: Sp100 y Daxx
( 249 ). En contraste, aunque la PML restringe la replicación del virus JC, este
virus no modula directamente a los PML-NB ( 250 ). De forma similar, el virus de
simio 40 (SV40) no relocaliza los componentes de PML-NB ni interrumpe estas
estructuras. Curiosamente, la transfección del antígeno T grande viral solo TAg
induce ya su localización a PML-NB. Por lo tanto, la deposición de RC virales en
PML-NB parece no solo ser un efecto pasivo mediado por un mecanismo de
defensa antiviral dependiente de PML, sino que también parece que PyV induce
activamente CR en estos sitios ( 249 , 250 ). El estudio más detallado sobre las
fábricas de PyV se realizó recientemente utilizando un poliomavirus murino, y los
investigadores demostraron que aunque las RC de PyV se encuentran adyacentes
a los NLP-PML, el establecimiento de estos centros y el crecimiento efectivo del
virus no dependían de la proteína PML ( 251 ).
En general, la replicación del ADN de PyV se ha localizado adyacente a PML-NB
( 248 , 249 , 252 , 253 ).Curiosamente, la expresión del gen SV40 también tiene
lugar en PyV RC en PML-NB. Sin embargo, la restricción espacial a PML-NBs solo
explica la amplificación del ADN, mientras que la transcripción parece ser una
consecuencia indirecta después del suministro del genoma a estos sitios
nucleares ( 254 ).
Concomitante con el inicio de la síntesis de ADN viral, se inicia la transcripción
génica tardía. Después de la transcripción de genes tardíos, las proteínas
estructurales VP1, VP2 y VP3 se transportan al núcleo a través de su señal de
localización nuclear (NLS) ( 255 , 256 , 257 ). Sin embargo, las proteínas de la
cápside no se importan como monómeros, sino como subunidades de la cápside,
especialmente como pentámeros VP1 y complejos VP2 / 3 ( 258 ). Dado que se ha
encontrado que las grandes TAg y VP1 se colocalizan adyacentes a PML-NB, se
ha propuesto un acoplamiento espacial de la replicación del ADN y el ensamblaje
de la cápside ( 248 , 252 , 253 ). Curiosamente, Garcea y sus colaboradores
establecieron un mecanismo nuevo e imprevisto de ensamblaje de viriones ( 251 )
que es contrario al proceso de ensamblaje de virus de ADN más grandes,
incluidos herpes y adenovirus, a saber, la encapsidación del genoma viral en
cápsidas preformadas ( 98 , 259). ) Ya en 1980, se había propuesto la
polimerización de las subunidades de la cápside en el genoma viral (  260 ). Sin
embargo, los pentámeros de VP1 parecen ensamblar primero las estructuras
tubulares, en las que se integra el genoma viral, y finalmente se forman partículas
de viriones icosaédricos mediante un mecanismo de gemación ( 251 ).

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De forma similar a los parvovirus y los virus del papiloma (véase a continuación),
los poliomavirus reclutan activamente proteínas DDR celulares para los RC y
explotan sus funciones ( 261 , - 264 ).Específicamente, PyV recluta proteínas
implicadas en recombinación homóloga, como ATM quinasa y el complejo MRN
( 261 , 263 ), y activa estas rutas ( 265 ). Tanto la relocalización como la activación
son esenciales para el crecimiento de PyV ( 261 , - 265 ). Curiosamente, la TAg
multifuncional grande induce focos de replicación que contienen PML y relocaliza
las proteínas DDR a estas estructuras, aunque se ha demostrado que esto es
independiente de la PML ( 251 , 263 ). De forma similar a los adenovirus, Mre11
se recluta en los sitios de replicación de SV40 y luego se degrada ( 263 ).
Papillomaviridae .
Comparado con Herpesviridae y Adenoviridae , se sabe poco sobre la replicación
productiva de los virus del papiloma, ya que el estudio de estos virus se ha visto
obstaculizado por la ausencia de un sistema de cultivo celular apropiado.
Los virus del papiloma infectan específicamente las células epiteliales
escamosas. La replicación productiva de los virus del papiloma puede dividirse en
una fase temprana y tardía, y la fase tardía, que incluye la síntesis del ADN vírico,
la producción de proteínas de la cápside y el ensamblaje del virión, se restringe
exclusivamente a las células epiteliales diferenciadas. Es probable que, tras la
infección, el transporte del genoma hacia el núcleo esté regulado por la proteína
de la cápside L2 a través de la interacción con los microtúbulos ( 266 ). Dado que
se requiere la división celular para la translocación y expresión del genoma
nuclear ( 267 ), el genoma viral puede entrar en el núcleo celular solo durante la
ruptura de la membrana mitótica.
Comparable con otros virus de ADN nuclear, el genoma del virus del papiloma se
localiza en PML-NB ( Fig. 1 ). Curiosamente, estas estructuras nucleares fomentan
la transcripción del virus del papiloma ( 268 ), en contraste con la mayoría de los
virus de ADN, que desarrollaron mecanismos para antagonizar la función
restrictiva de los LNM-PML.
En general, la replicación del ADN viral se logra mediante dos proteínas virales
tempranas, E1 y E2 ( 269 , - 272 ). En contraste con E2, que solo es necesario
para la iniciación, E1 posee actividades de ATPasa y ADN helicasa, lo que
también desencadena la elongación de la síntesis de ADN ( 273 , 274 ). Excepto
por E1 y E2, la maquinaria huésped de iniciación de replicación, que incluye ADN
polimerasa α / primasa, ADN polimerasa δ / PCNA, RPA y topoisomerasas I y II,
es proporcionada por la célula huésped ( 275 , 276 ).
Curiosamente, al igual que otros virus de ADN, el virus del papiloma también
parece explotar el sistema de SUMOilación celular. Por lo tanto, E1 interactúa con
la enzima conjugadora de SUMO celular, que aparentemente desencadena la
modificación SUMO-1 de esta proteína viral. Se ha demostrado que estas
funciones son esenciales para la acumulación intranuclear de la proteína, así
como para la replicación eficiente del genoma viral dependiente del origen
( 277 , 278 ).

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Además, la replicación del ADN del virus del papiloma está estrechamente
relacionada con la respuesta al daño del ADN celular. E1 y E2 activan y
relocalizan el DDR celular a RC virales. La orientación del DDR celular conduce a
la supresión del crecimiento de la célula huésped. Mientras que E2 recluta
componentes ATM DDR para los RC virales, E1 activa específicamente esta vía
DDR celular ATM ( 279 ). Tanto la detención del crecimiento como la activación
ATM dependen de la actividad ATPasa de E1 y su unión al origen viral de la
replicación. Curiosamente, la DDR celular se activa para facilitar la amplificación
del ADN viral, estimulando así la replicación del virus del papiloma ( 280 ).Antes
de la expresión génica inicial, el genoma vírico se localiza en PML-NB por la
proteína de la cápside viral L2, lo que respalda la transcripción génica temprana
del virus ( 268 ). La presencia del genoma del VPH en las células basales conduce
a un aumento del número total de NLP-PML, así como a niveles elevados de
proteína PML modificada postraduccionalmente ( 281 ). Se ha descrito que la
oncoproteína E6 del VPH se colocaliza con LMP-NB ( 282 ) y para inducir la
degradación proteasómica de la LMP-IV, aparentemente superando las funciones
restrictivas de estos cuerpos nucleares ( 283 ). Curiosamente, estas estructuras
celulares también están asociadas con RC papilomavirales ( 269 , 284 , 288 ). Se
ha propuesto que L2 se localiza en PML-NBs, donde se asocia con E2 y recluta el
genoma viral en sitios de ensamblaje.Posteriormente, se podría reclutar L1 a RC
para ensamblaje de virión de progenie ( 268 , 284 ). Aunque, diferentes estudios
observaron ningún requisito de PML-NB para la replicación del ADN del virus del
papiloma ( 281 , 288 ), es evidente que estas estructuras nucleares se reorganizan
por L2 ( 289 ) y son sitios diana para el ensamblaje del virión.
Go to:CONCLUSIONES
Como parásitos intracelulares obligados, los virus han coevolucionado con la
célula huésped. En consecuencia, los cambios en las actividades celulares y la
arquitectura que se inducen en una célula infectada por virus probablemente
reflejen un "tira y afloja" entre las defensas celulares opuestas y los mecanismos
que los virus emplean para desviar o utilizar la maquinaria celular y las vías
metabólicas. . El ensamblaje de inclusiones o agregados de virus es un paso
esencial para la replicación productiva de los virus de ARN y ADN de una amplia
variedad de familias diferentes, y aunque estas estructuras muestran diferentes
localizaciones subcelulares, arquitecturas y composiciones, parecen compartir
varias similitudes fundamentales: ) las fábricas de virus funcionan como andamios
que anclan genomas virales, concentran macromoléculas virales y celulares y
facilitan el ensamblaje de complejos de replicación. Los virus de ARN y ADN que
se replican en el citoplasma utilizan membranas celulares como armazones,
mientras que los virus de ADN nuclear dependen principalmente de la naturaleza y
organización de dominios nucleares, en particular PML-NB, para el ensamblaje de
los compartimentos de replicación que emplean andamios de proteínas. (ii)
Aunque a menudo no está claro cómo los genomas virales se dirigen a
ubicaciones subcelulares específicas, el ensamblaje de los compartimentos de
replicación se acompaña de la reorganización del citoesqueleto y las proteínas
motoras asociadas. A menudo, los genomas virales se dirigen al MTOC, donde se

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ensamblan los aggresomes perinucleares, como se ha encontrado para los
togavirus, flavivirus, bunyavirus, coronavirus y arterivirus, así como para varios de
los NCLDV.Curiosamente, los genomas de los virus de ADN están dirigidos a
PML-NBs o por ellos y también hacen uso de aggresomes nucleares y en algunos
casos citoplásmicos. Esto sugiere que una respuesta celular dedicada a
contrarrestar la invasión de proteínas extrañas / mal plegadas puede ser
responsable de dirigir genomas virales y proteínas estructurales, iniciando así una
respuesta agresiva que es cooptada por virus para generar sitios de
ensamblaje. Los virus de muchas familias diferentes emplean o modulan la ruta de
ubiquitina-proteasoma para la degradación de sustratos celulares, lo que hace que
los agresores sean sitios apropiados donde se concentran los chaperones, la
ubiquitina y los proteosomas 26S. (iii) La formación de funciones de fábricas
virales citoplásmicas para ocultar el genoma viral y las transcripciones de un
arsenal de mecanismos de defensa celular que incluyen la cinasa citoplásmica
sensible a dsRNA (PKR), así como los receptores de tipo Toll (TLR) y ácido
retinoico citoplasmático genes inducibles I (RIG-I) helicasa, que desencadenan la
producción de interferón tipo I. En el núcleo, los PML-NB son sitios primarios de la
respuesta dependiente del interferón así como intrínseca a la infección
( 64 , 67 , 290 ). Muchas proteínas codificadas por los virus de ADN y ARN
colocalizan y perturban a los LMP-NB, sugiriendo que, como en el caso de los
aggresomes citoplásmicos, la alteración de los LMP-LN puede ser una estrategia
viral para evadir un mecanismo de defensa celular. Las actividades celulares que
están reguladas por PML-NB incluyen la reparación del daño del ADN, la
apoptosis, la vía de la ubiquitina y la expresión génica ( 136 ).Curiosamente, como
se describió en las secciones anteriores, los virus de ADN que se replican en el
núcleo modulan, reubican o inducen la degradación de los factores celulares
implicados en cada una de estas actividades.
Es probable que el progreso en la comprensión de los mecanismos moleculares
que subyacen a la formación de centros de replicación formados por virus de ADN
continúe avanzando rápidamente en el futuro cercano. Por ejemplo, análisis
tridimensionales de células infectadas a través de tomografía electrónica ayudarán
en el estudio de su arquitectura, mientras que los estudios bioquímicos deberían
ayudar a determinar sus composiciones de proteínas y ácidos nucleicos, así como
las interacciones que se establecen entre los componentes virales y celulares.

MARCELO COLLANTES