GENÈTICA MICROBIANA

La genética analiza la herencia de las funciones fisiológicas que constituyen las propiedades del organismo.

La unidad básica de la herencia es el GEN este es un segmento de ácido desoxirribonucleico (DNA) que
codifica en su secuencia de nucleótidos información para propiedades fisiológicas específicas.

Se identifican los genes en base a su fenotipo o propiedades estructurales y fisiológicas de un organismo.

La base química para la variación del fenotipo es un cambio en el genotipo o alteración en la secuencia de DNA
en un gen o ya sea en la organización de los genes.

Enzimas de restricción: Proteínas que fragmentan el DNA en lugares específicos (fragmentos de restricción
de DNA).

La amplificación de regiones específicas de DNA se logra con enzimas bacterianas utilizando la reacción
en cadena de polimerasa (PCR).

Plásmidos: Elementos genéticos pequeños que transportan genes y son capaces de replicación independiente en
bacterias y levaduras.

ÁCIDOS NUCLEICOS Y SU ORGANIZACIÓN EN GENOMAS

EUCARIÓTICO, PROCARIÓTICO Y VIRAL
La información genética en bacterias se almacena como una secuencia de bases de DNA.

Una gran parte de moléculas de DNA son bicatenarias, con bases complementarias, unidas por puentes de
hidrógeno en el centro de la molécula.

La orientación de las dos cadenas de DNA es antiparalela:

Una cadena tiene orientación química de 5′→ 3′ y su cadena complementaria sigue una dirección
3′→ 5′.
La complementariedad de las bases permite que una cadena (cadena de plantilla) proporcione la
información para que la copia con la expresión de la información se codifique.
Los pares de bases se apilan en el centro de la doble hélice de DNA y determinan la información
genética.

Cada una de las cuatro bases se une a una fosfo-2′ desoxirribosa para formar un nucleótido.
 ÀCIDO RIBINUCLEICO

La estructura general del RNA es de una sola cadena (ssRNA).

Depende del pareamiento entre las bases en las cadenas formadoras de asas, con el resultado de que la
molécula de RNA de una sola cadena asume una estructura capaz de expresar información genética (DNA).

Función: Comunica la secuencia génica del DNA en forma de RNA mensajero (mRNA) a los ribosomas. Este
proceso se conoce como transcripción y traducción. El mRNA (ssRNA) es transcrito en la forma de
complemento de RNA en la cadena de codificación de DNA y este se traduce por ribosomas.

Genoma de las células eucariotas

El genoma es la totalidad de información genética en un organismo.

El genoma de las células eucariotas se transporta en dos o más cromosomas lineales separados del
citoplasma por medio de una membrana que limita el núcleo.

Las células eucariotas diploides contienen dos homólogos de cada cromosoma.

Algunos genes eucarióticos son interrumpidos por intrones que son secuencias interpuestas de DNA que se
pierden en el mRNA procesado cuando se traducen.

Las mutaciones o cambios genéticos no pueden detectar en las células diploides porque la
contribución de una copia génica compensa los cambios en la función de su homólogo.

El gen que no alcanza su expresión fenotípica en presencia de su homólogo es recesivo que aquel que
rebasa el efecto del homólogo es dominante.

Los efectos de las mutaciones pueden diferenciarse en las células haploides que transportan una sola
copia de la mayor parte de los genes.

Genoma de células procariotas

La mayor parte de genes procariotas son transportados en los cromosomas bacterianos.

Los genes bacterianos son haploides. Los genomas procarióticos (> 90%) consisten en una sola molécula
de DNA circular que contiene de 580 kbp a más de 5 220 kbp de DNA.

Los círculos de DNA están cerrados por enlaces covalentes (cromosomas y plásmidos bacterianos), que
contienen la información genética necesaria para su propia replicación.

Las células procariotas no contienen un núcleo, y por lo tanto no existe una membrana que separa los
genes bacterianos del citoplasma.

Algunas especies bacterianas causan enfermedades en organismos superiores porque poseen genes
específicos que actúan como determinantes patógenos. Estos genes a menudo se agrupan en el DNA (Isla de
patogenicidad).Estos segmentos de genes pueden ser bastante grandes (hasta 200 kbp) y codifican un grupo
de genes de virulencia.

Las islas de patogenia:

1) Tienen un contenido de G + C diferente del resto del genoma.

2) Guardan una relación más cercana en el cromosoma con los genes de tRNA.

3) Están flanqueados por repeticiones directas.

4) Contienen genes diversos que son importantes para la patogenia (resistencia a antibióticos, adhesinas,
invasinas y exotoxinas,pueden participar en la movilización genética).

Los genes esenciales para el desarrollo bacteriano “genes constitutivos” pueden transportarse en los
cromosomas y plásmidos transportan genes relacionados con funciones especializadas.

Los transposones son elementos genéticos que contienen varios genes que incluye aquellos necesarios para
la migración de un locus genético a otro.

Transposones no portan información genética necesaria para acoplarse a su propia réplica de la división
celular, y por esta razón su propagación depende de su integración física con un replicón bacteriano.

Genoma viral

Los virus son capaces de sobrevivir, pero no de proliferar en ausencia de una célula hospedadora.

La replicación del genoma viral depende de la energía metabólica y maquinaria de síntesis de

macromoléculas del hospedador.

Para la propagación exitosa de los virus se requiere:

1) Una forma estable que permita que el virus sobreviva en ausencia de su hospedador.

2) Un mecanismo para la invasión de la célula hospedadora.

3) Información genética necesaria para la replicación de los componentes virales en el interior de la

célula.

4) Información adicional que pueda ser necesaria para el empaquetamiento de los componentes
virales y la liberación del virus resultante desde la célula hospedadora.

TRANFERENCIA DE DNA

El intercambio genético bacteriano está tipificado por la transferencia de fragmentos pequeños de genoma
donador a una célula receptora, seguida de su recombinación genética.

La replicación puede lograrse a través de la integración del DNA donador en un cromosoma del
receptor.

Las enzimas de restricción (endonucleasas de restricción) proporcionan a las bacterias mecanismos para
diferenciar entre DNA y el DNA de otros orígenes biológicos.

Mecanismos de recombinación

El DNA donador que no porta información necesaria para su propia replicación debe combinarse con el DNA
del receptor a establecerse en la cepa receptora.

La recombinación puede ser homóloga, una consecuencia de la enorme semejanza de las secuencias del DNA
del donante y el receptor o no homóloga, como resultado de la recombinación catalizada por enzimas entre
dos secuencias de DNA diferentes.

Mecanismos de transferencia génica

El DNA puede transferirse de un organismo a otro este DNA puede incorporarse de manera estable en el
receptor, modificando de manera permanente su composición genética (Transferencia génica horizontal)
para diferenciarla de la herencia proveniente de genes paternos, un proceso conocido como herencia
vertical.

Los tres mecanismos amplios que median el desplazamiento eficiente del DNA entre las células son:

La conjugación requiere que la célula donadora y receptora se encuentre en contacto para la transferencia
de una sola cadena de DNA. El receptor completa la estructura del DNA bicatenario mediante la síntesis de la
cadena que complementa a la cadena adquirida del donador.

En la transducción, el DNA del donador se transporta en un fago cubierto y se transfiere al receptor por un
mecanismo utilizado para la infección por bacteriófagos. La transformación consiste en la captación directa
de DNA “desnudo” del donador por la célula receptora, lo cual puede ser natural o forzado.

MUTACIÓN Y REORDENACIÓN GENÉTICA

Mutaciones espontáneas

Las mutaciones espontáneas para un gen dado en un entorno natural por lo general ocurren con una
frecuencia de 10-6 a 10-8 en una población derivada de una sola bacteria.

Las mutaciones incluyen sustituciones de bases, deleciones y inserciones e reordenamientos.

Las sustituciones de bases pueden surgir como consecuencia de la colocación inapropiada de pares de bases
entre bases complementarias durante la replicación.

Mutágenos

La frecuencia de mutaciones se incrementa en gran medida por la exposición de las células a los mutágenos.
La luz ultravioleta (UV) es un mutágeno físico que daña el DNA al unir bases cercanas de timina para
formar dímeros. Pueden introducirse errores de secuencia durante la reparación enzimática de este daño
genético.

Los mutágenos químicos pueden actuar al alterar la estructura física o química del DNA. Los compuestos
químicos reactivos alteran la estructura de las bases en el DNA.

Reversión y supresión

La recuperación de la actividad perdida como consecuencia de una mutación (reversión fenotípica), puede
o no ocasionar el restablecimiento de la secuencia original de DNA, como sería obligado para la reversión
genotípica. Una mutación en un segundo locus (mutación de supresión) restablece la actividad perdida.

En la supresión intragénica, después de que una mutación primaria ha cambiado la estructura enzimática
de forma tal que se ha perdido su actividad, una segunda mutación en un sitio diferente en los genes de la
enzima restablece la estructura necesaria para la actividad.

La supresión extragénica es causada por una segunda mutación que se encuentra fuera del gen
PROPIEDADES GENERALES DE LOS VIRUS

Los virus son los agentes infecciosos más pequeños (su tamaño va de casi 20 a 300 nm de diámetro) y contienen un solo
tipo de ácido nucleico (RNA o DNA) en su genoma.

El ácido nucleico se encuentra rodeado por una cubierta proteínica; está envuelto por una membrana constituida por
lípidos.

La unidad infecciosa en conjunto se denomina virión.

Cápside: Cubierta proteínica que rodea al ácido nucleico del genoma.

Capsómeros: Unidades morfológicas que se observan por microscopia electrónica en la superficie de partículas virales
icosaédricas.

Virus defectuosos: Una partícula viral que es deficiente desde el punto de vista funcional en algunos aspectos de la
replicación.

Envoltura (cubierta): Una membrana con lípidos que rodea algunas partículas virales. Se adquiere durante la
maduración viral por un proceso de gemación a través de la membrana celular.

Nucleocápside: Complejo de proteínas y ácido nucleico que representa la forma empacada del genoma viral.

Unidades estructurales: Unidades proteínicas básicas de los bloques de construcción de la cubierta.

Subunidad: Una sola cadena polipeptídica viral plegada.

Virión: Partícula viral completa.

CLASIFICACIÓN DE LOS VIRUS

Morfología del virión, lo que incluye tamaño, forma, tipo de simetría, presencia o ausencia de peplómeros y presencia
o ausencia de membranas.
Propiedades del genoma viral.
Organización del genoma y replicación.
Propiedades de las proteínas virales.
Propiedades antigénicas.
Propiedades fisicoquímicas del virión.
Propiedades biológicas.

ORIGENES EVOLUTIVOS

Las dos teorías sobre el origen de los virus pueden resumirse de la siguiente manera:

1. Los virus pueden derivarse de componentes de ácidos nucleicos de DNA o RNA de células hospedadoras que adquieren
la capacidad de replicarse de manera autónoma y evolucionan de forma independiente.

2. Los virus pueden ser formas degeneradas de parásitos intracelulares.

SISTEMA TAXONÓMICO UNIVERSAL DE VIRUS

Los virus se separan en grupos principales (denominados familias) con base en la morfología del virión, la estructura del
genoma y las estrategias de replicación.

Los nombres de cada familia de virus tienen el sufijo -viridae.

En cada familia hay subdivisiones (género) que por lo común se basan en diferencias biológicas, genómicas, fisicoquímicas
o serológicas.

Los nombres del género se acompañan del sufijo- virus.

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS VIRUS

Proteínas virales

Su principal objetivo es facilitar la transferencia de ácidos nucleicos virales de una célula hospedadora a otra. Sirven para
proteger el genoma viral contra la inactivación por las nucleasas, participan en la unión de la partícula viral a las células
susceptibles y proporcionan la simetría estructural de la partícula viral.

Las proteínas determinan las características antigénicas del virus.

Los mecanismos de respuesta inmunitaria protectora del hospedador se dirigen contra determinantes antigénicos de las
proteínas o glucoproteínas expuestas en la superficie de la partícula viral.

Ácido nucleico viral

Los virus contienen un solo tipo de ácido nucleico (ya sea DNA o RNA) que codifica la información genética necesaria para
la replicación de los virus.

El genoma puede ser monocatenario o bicatenario, circular o lineal, segmentado o no segmentado.

Envolturas lipídicas de los virus

Varios virus diferentes contienen envolturas lipídicas como parte de su estructura.

Los lípidos se adquieren cuando la nucleocápside viral forma vesículas a través de la membrana celular en el trayecto de
su maduración.

La gemación ocurre sólo en sitios donde se han insertado proteínas virales específicas en la membrana de la célula
hospedadora.

Glucoproteínas virales

Las envolturas virales contienen glucoproteínas las envolturas de glucoproteínas son codificadas por el virus. Sin embargo, los
carbohidratos añadidos a las glucoproteínas virales son reflejo de la célula hospedadora en la cual creció el virus.

Las glucoproteínas de superficie de un virus con envoltura son las que unen a la partícula viral con la célula hospedadora
al interactuar con el receptor celular.

Participan en la fusión de la membrana como una etapa de la infección.

Las glucoproteínas también son antígenos virales importantes.

ESTERILIZACIÓN
Proceso que destruye o elimina todas las formas de vida microbiana y se lleva a cabo en instalaciones promotoras de salud
por métodos físicos o químicos.

Es la remoción de suciedad visible (orgánica e inorgánica) de objetos y superficies, y normalmente se logra manual o
mecánicamente usando agua con detergentes o productos enzimáticos.

Los principales métodos de esterilización son: vapor a presión, calor seco, gas de óxido de etileno, plasma de gas de
peróxido de hidrógeno y ácido peracético.

Dentro del área microbiológica, la esterilización a la llama es un proceso aplicado a materiales resistentes al calor
sometiéndose a altas temperaturas por un corto periodo de tiempo.

En el laboratorio de biomedicina el principal método de esterilización es con calor húmedo a presión utilizando:

Autoclave: Aparato que cierra herméticamente y que en su interior desarrolla vapor bajo presión, el cual se presuriza y eleva
la temperatura, permitiendo que el calor húmedo elimine a los microorganismos.

Existen dos tipos de autoclaves o esterilizadores de vapor:

El gravitacional : Posee una cámara interna y una cubierta externa, la cual una vez cerrada la puerta del esterilizador
herméticamente, arroja vapor caliente dentro de la cámara interna y va penetrando; desplaza el aire y después lo expande por
la parte inferior de la misma; esto debido a que el aire pesa más que el vapor y por gravedad el aire queda abajo y el vapor
llena la cámara, obligando a salir el aire por un sistema que cuenta con una válvula termosensible para su drenaje.

Pre-vacío: Evacua el aire por completo antes de introducir vapor, cuenta con una bomba de vacío que desplaza el aire de la
cámara según el grado de vacío reemplazando por vapor a través de un sistema de inyectado, que facilita la penetración del
vapor a los paquetes reduciendo los tiempos de funcionamiento.

Generalmente, las condiciones universales de esterilización por calor húmedo a presión en autoclave
gravitacional son:

Temperatura: 121° C
Humedad relativa: 90%
Tiempo total del ciclo: 45 minutos
Llenado de la cámara alcanzando la temperatura adecuada: 5 minutos.
Exposición para la penetración del vapor a los paquetes: 20 minutos.
Completa expulsión de vapor: 5 minutos.
Secado y enfriamiento de los paquetes: 15 minutos.

Identificación de microorganismos

Proteoma es el conjunto de proteínas expresadas del genoma de cualquier organismo vivo, mientras que la
proteómica es el estudio y caracterización del proteoma.

La identificación genotípica se basa en el análisis de las secuencias de genes específicos con las características
de que deben ser genes que codifiquen para una función vital osea que se encuentren presentes en todos los
microorganismos.

La identificación fenotípica son las características o manifestaciones observables osea la expresión de los genes
codificados en el genoma.

Clasificación de los medios de cultivo de acuerdo con su utilidad:

Simples: Se utilizan para permitir el desarrollo de todos los microorganismos.

Cuando el medio es sólido, se emplea para el estudio de las características morfológicas de las colonias
bacterianas.

Enriquecidos: Son los medios de cultivo cuya composición ha sido complementada por la adición de líquidos
corporales, vitaminas, aminoácidos y proteínas específicas u otros nutrientes claramente definidos.

Selectivos: Son los medios de cultivo simples o enriquecidos, adicionados con alguna o algunas sustancias
químicas que impiden el crecimiento de ciertos microorganismos.

Diferenciales: Son los medios de cultivo simples o enriquecidos, pero que han sido adicionados con alguna o
algunas sustancias químicas que al reaccionar con algunos tipos específicos de bacterias presentan
manifestaciones observables a simple vista.