IDENTIFICAION DE COLIFAGOS EN AGUA RESIDUALES

Acosta Rivera Kendry Paola, Vargas Monterrey Dianny Karime, Quintero Buelvas Glenda Marcela
Curso Microbiología Básica, Grupo5, Departamento de Ciencias Básicas, Universidad de Pamplona

RESUMEN: Introducción: en el presente informe se realizó una metodología rápida y sencilla para la determinación de colifagos
somáticos llevando a cabo el respectivo procedimiento para la realización de esta practica materiales y métodos: fue empleada la técnica
de centrifugación y filtración por membrana para obtener contenido fagico y posteriormente utilizando el agar TSA. Resultados: Los virus
poseen un solo tipo de ácido nucleico de tamaño relativamente pequeño con respecto a otros agentes biológicos, rodeado por una cáscara o
cápside formada por numerosas copias de una proteína o de un número limitado de ellas. La bacteria hospedera E.coli debe encontrarse en
fase loga-rítmica para que el virus se replique adecuadamente, ya que la generación de nuevas partículas virales depende de la replicación
del material genético bacteriano; para los resultados de esta práctica obtuvimos resultados positivos y negativos se observaron 8 zonas de
aclaramiento esto significa presencia de colifagos y por lo tanto la presencia de la bacteria E.coli esta debe encontrarse en fase loga-rítmica
para que el virus se replique adecuadamente, ya que la generación de nuevas partículas virales depende de la replicación del material genético
bacteriano.conclucion: la metodología empleada permitió en tan solo 16 horas determinar la presencia de colifagos somáticos; nos permitió
conocer indicadores bacterianos para la contaminación del agua como E.coli, haciendo una profundizando sobre el tema de virus.
Palabras Claves: Agua residual, bacteria, colifago, virus.

ABSTRACT: ABSTRACT: Introduction: in this report a quick and simple methodology for the determination of somatic coliphages
was carried out by carrying out the respective procedure for the realization of this practice materials and methods: the centrifugation and
membrane filtration technique was used to obtain content phage and subsequently using TSA agar. Results: Viruses have a single type of
nucleic acid of relatively small size with respect to other biological agents, surrounded by a shell or capsid formed by numerous copies of
a protein or a limited number of them. The E. coli host bacterium must be in the logarithmic phase for the virus to replicate properly, since
the generation of new viral particles depends on the replication of the bacterial genetic material; for the results of this practice we obtained
positive and negative results, 8 zones of clearing were observed, this means the presence of coliphages and therefore the presence of
E.coli bacteria must be in the logarithmic phase for the virus to replicate properly, since the generation of new viral particles depends on
the replication of the bacterial genetic material. Conclusion: the methodology used allowed in only 16 hours to determine the presence of
somatic coliphages; It allowed us to know bacterial indicators for water contamination like E.coli, doing a deepening on the virus issue.

Key words: Wastewater, bacteria, coliphage, virus.

1. Introducción Los bacteriófagos son virus que requieren bacterias

Actualmente el monitoreo de la calidad del agua es un
mecanismo importante para el control de
enfermedades, ya que el agua constituye un vehículo
significativo de transmisión de patógenos que pueden
generar diversos padecimientos, principalmente los
gastrointestinales. Las enfermedades transmitidas por
el agua están íntimamente relacionadas con la
alteración su calidad, así como por deficiencias en el
tratamiento o por contaminación en los sistemas de
distribución. Los tres grupos principales de
organismos patógenos que se transmiten a través del
agua son bacterias, protozoarios y virus1.
Microbiólogos, epidemiólogos y responsables de la calidad
de agua han debatido sobre la utilidad de hacer seguimiento
y monitoreo a la presencia de virus y/o bacteriófagos, como
indicadores de contaminación, comprobando así la
eficiencia de los procesos de potabilización2.
1
como hospederos para su replicación. Los colifagos
que se utilizan en la evaluación de la calidad del agua
se dividen en dos grupos: colifagos somáticos y
colifagos de ARN F-específicos3.
Los virus poseen un solo tipo de ácido nucleico de
tamaño relativamente pequeño con respecto a otros
agentes biológicos, rodeado por una cáscara o cápside
formada por numerosas copias de una proteína o de un
número limitado de ellas. Algunos grupos de virus
presentan por fuera de la cápside una envoltura lipídica
de origen celular en la que se insertan glicoproteínas.
No presentan sistemas enzimáticos propios, por lo que
por sí solos no son capaces de replicarse y requieren
para su propagación y mantenimiento de células
animales, vegetales o bacterias para cumplir su ciclo
de reproducción, lo que define su parasitismo celular
obligatorio3.
La caracterización de los virus que han sido estudiados 44°C, Luego de llevar a cabo estas pruebas se pesó 0.08g
ha permitido observar la gran variedad en el tamaño y de nitrato de amonio (NH4NO3) y 0.11g nitrato de estroncio
forma que estos poseen. Es así, que se puede observar (Sr(NO3)2) utilizando la balanza analítica y papel aluminio;
un tamaño entre 28 nm en los virus mas pequeños estos reactivos fueron agregados al TSA fundido,
seguidamente se le agrego el reactivo solución de cloruro
denominados precisamente picornavirus (pico de
7,5 ml y 3 ml de cada muestra del agua centrifugada
pequeño) hasta 300 nm en los virus más grandes que
teniendo como resultado 9 ml con ayuda de la micropipeta
se conocen como son los poxvirus La forma es también y puntas estériles.
muy variada entre los diferentes virus, pudiéndose
observar formas icosahédricas o helicoidales en virus Posteriormente de la sustancia del Erlenmeyer se agregaron
que no tiene envoltura por fuera de la cápside hasta a las cajas de Petri y se le hizo movimiento delicado para
formas esféricas, filamentosa o pleomórficas en los una buena homogenización y estas fueron incubadas con
una temperatura de 37°C.
virus con envoltura o muy complejos como el virus de
la rabia1. Reactivos: Cloruro trifenil tetrazolio, Nitrato de
amonio, Nitrato de estroncio.
Como ya se mencionó anteriormente la estructura de
un virus está basada en su simplicidad, a pesar de esto
existe diversidad, lo que es utilizado para la 4. Resultados y Análisis
clasificación de los virus1:
Virus desnudos: La estructura de los virus más simples
está compuesta por un solo tipo de ácido nucleico
(ADN o ARN) rodeado de una cáscara proteica que se
denomina cápside (del griego capsa que significa caja)
que resulta de la reunión de subunidades proteicas
codificadas por el genoma viral que se ensamblan
basados en principios geométricos y pueden
determinar diferentes tipos de simetrías (icosahédrica
o helicoidal, principalmente)1.
Virus envueltos: La estructura de las partículas virales
del grupo de virus denominados envueltos, está
formada además de la nucleocápside por una envoltura
que la rodea de origen celular1.

2. Materiales y Métodos
Prueba centrifugación: se inició tomando 28 ML de la
muestra, en este caso agua residual o agua cruda, agregando
14 ml a cada tubo de fondo cónico; seguidamente fueron
llevados a la prueba de centrifugación a 3.500rpm durante
15 minutos.
Prueba de filtración: Filtro marca Gast, se llevaron los tubos
de fondo cónico a la prueba de filtración, se utilizo carriles
de membrana de marca microclar agregándole los 28 ml del
agua centrifugada llevando a cabo el proceso de filtración.
Inicialmente se tuvo el agar TSA en un medio solido este
fue llevado a la estufa para fundirlo y seguidamente fue
inducido a baño serológico para mantener su temperatura a
2
V= Volumen inoculado adquiere un nuevo conocimiento sobre virus se
profundizo sobre este tema conociendo morfología,
𝑋̅ . 𝐼𝑁𝑉𝐸𝑅𝑆𝑂
𝑈𝐹𝑃 = estructura, tamaño, forma; la detección de los
V
colifagos es una alternativa a los indicadores
8 bacterianos de contaminación del agua, ya que son
= 1.33 → 𝑥̅
6 unos indicadores de contaminación fecal, y al mismo
1.33 . 1 𝑢𝑓𝑝 tiempo de la posible presencia de virus de transmisión
𝑈𝐹𝑃 = = 0.88
1.5 𝑚𝑙 entérica y con la práctica se confirma la presencia de
estos agentes infecciosos en la muestra examinada.
Placas Numero de muestra
1 3
2 5
3 0 7. Referencias Bibliográficas
4 0 1. Arbiza J. Biología viral. Temas Bacteriol y Virol
5 0 Médica . 2008:11-22.
6 0 http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BiologiaViral
Análisis: De acuerdo al crecimiento o a la formación .pdf.
de zonas de aclaramiento se tienen a través de la 2. Villamizar RA, Ortíz OO, Darghan EA.
formula se obtuvieron 0.88 UFP/ml. Metodología rápida y sencilla para la
determinación de colifagos somáticos como
indicadores de contaminación fecal en una planta
de tratamiento de agua localizada al noreste
5. Discusión colombiano Resumen Introducción. Rev Univ y
salud. 2015;17(1):57-68.
En la microbiología la calidad del agua se basa en la 3. Izaguirre YP. LOS BACTERIÓFAGOS EN LA
presencia de indicadores de contaminación por materia BIOLOGÍA. 2004;(January).
fecal, E. coli es el microorganismo mas frecuente y
usado para el estudio de agua residual o agua cruda, A
través de los procesos realizados se obtuvieron
resultados positivos y negativos para esto se tomó agua
contaminada con el objetivo de llevar a cabo la
visualización y determinación de colifagos somáticos
en este caso traslucidos por lo que se pudo observar en
las dos primeras cajas de Petri, esto nos permite
analizar que la bacteria E. coli está presente en la
visualización de fagos ya que hace parte de las
bacterias coliformes, y en los resultados negativos no
hubo presencia de fagos en las 4 últimas cajas de Petri
esto puede deberse a que no hubo una buena
homogenización de las muestra problema, o no se le
agrego suficiente agar debido a que ya estaba
coagulando.

6. Conclusión
En esta práctica de laboratorio se realizó una
metodología para determinar colifagos que se
encuentran en una muestra de agua contaminada este
proceso se llevó a cabo con un procedimiento; se
3