Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar?
Humberto Gonzalez y Reyna Fierro
Recibido: 26 de noviembre de 2008
Aceptado: 18 de febrero de 2009
La vida en la tierra tiene muchas manifestaciones,
desde animales y plantas de gran tamano, hasta mi-
croorganismos. Todos juegan un papel muy impor-
tante en la naturaleza. Si se toma una muestra de tie-
rra, se coloca en agua esteril, se agita y se inocula me-
dio de cultivo rico en nutrientes, se esperara que to-
das las bacterias y hongos presentes, se desarrolla-
ran en ese medio. Sin embargo, esto no es as, ya que
por medio de tecnicas de biologa molecular, parti-
cularmente la Reaccion en Cadena de la Polimera-
sa (PCR), se ha descubierto la existencia de microor-
ganismos que no se desarrollan en los medios de cul-
tivo comunmente utilizados y que, hasta la fecha, no
se han podido cultivar en el laboratorio. A estos mi-
croorganismos se les ha dado el nombre de micro-
organismos no cultivables [8, 14].
Estos microorganismos no cultivables viven, se desa-
rrollan y se dividen en condiciones muy particulares,
y no se han podido cultivar en el laboratorio!. En es-
te trabajo se describe como se descubrio que exis-
ten estos microorganismos y se discute por que no
se han podido cultivar en en laboratorio.
En general, para obtener muestras del DNA de cual-
quier organismo, se requiere una cantidad considera-
ble de material; para obtener dicho material, se cul-
tiva al organismo y se colectan las celulas por cen-
trifugacion, a este paso se le llama enriquecimien-
to. Con el avance de la tecnologa, se ha logrado ais-
lar DNA de: muestras de aire filtrado a traves de ta-
mices que logran detener microorganismos; esto se
ha realizado en una diversidad de suelos que no tie-
nen senales de vida, del interior de plantas y de aguas
oceanicas o de fuentes termales, sin pasar por el pa-
so de enriquecimiento, o sea sin cultivar a los mi-
croorganismos. Este DNA se usa como molde pa-
ra la amplificacion, por PCR, de los genes riboso-
males existentes en la muestra. Esta tecnica se rea-
liza con una DNA-polimerasa termoestable y oligo-
nucleotidos complementarios (primers, o cebadores
universales) con las regiones conservadas de los ge-
42
nes ribosomales que se encuentran en todas las bac-
terias. Los fragmentos sintetizados se pueden clonar
en vectores o se determina su secuencia nucleotdi-
ca directamente. Las secuencias obtenidas de los ge-
nes del RNA ribosomal se comparan con las existen-
tes en los bancos de datos (ej. Ribosomal Databa-
se Project [6]), hay mas de 30,000 secuencias exis-
tentes de un numero casi igual de especies bacte-
rianas. Con este enfoque, se ha revelado una diver-
sidad de microorganismos que no es posible detec-
tar con los metodos de microbiologa tradicional [4,
13, 21]. Tambien existen programas (tanto libres co-
mo comerciales) para verificar que las secuencias ob-
tenidas de ADN ambientales no sean artefactos o
quimeras (hbridos de genes de diferentes microor-
ganismos) [11]. Si las secuencias no se parecen a la
de ningun microorganismo existente en mas de un
97 %, es posible que se trate de una bacteria nue-
va, tal vez aun no cultivada. La secuencia obteni-
da permite tambien identificar fragmentos de secuen-
cia que no se encuentran en ninguna otra especie re-
portada, o sea que son exclusivos de esta especie. Es-
tas secuencias particulares pueden sintetizarse mar-
cadas con nucleotidos fluorescentes y pueden utili-
zarse en las muestras originales para ver al micros-
copio de epifluorescencia o confocal, el tipo y dis-
tribucion de las bacterias que presentan los genes
marcados.
Visualizar a las bacterias es un paso hacia su ais-
lamiento, pero cultivar a muchas de las que han si-
do detectadas de este modo, ha sido difcil. White-
sides en 1997 logro cultivar bacterias del genero Vi-
brio de un estado no cultivable, aunque es importan-
te resaltar que el desarrollo de estas bacterias se inhi-
be con altas concentraciones de nutrientes [20], y es-
tos resultados se prestaron a controversia [4]. Asmis-
mo, se logro desarrollar un Bacillus a partir de espo-
ras de aproximadamente 250 millones de anos [18].
Encontrar las condiciones para cultivar bacterias no
cultivables continua siendo un reto para los micro-
biologos [7].
Se ha acordado que a las bacterias no cultivables
detectadas solo por su secuencia de genes riboso-
Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar?
Humberto Gonzalez y Reyna Fierro
Recibido: 26 de noviembre de 2008
Aceptado: 18 de febrero de 2009
La vida en la tierra tiene muchas manifestaciones,
desde animales y plantas de gran tamano, hasta mi-
croorganismos. Todos juegan un papel muy impor-
tante en la naturaleza. Si se toma una muestra de tie-
rra, se coloca en agua esteril, se agita y se inocula me-
dio de cultivo rico en nutrientes, se esperara que to-
das las bacterias y hongos presentes, se desarrolla-
ran en ese medio. Sin embargo, esto no es as, ya que
por medio de tecnicas de biologa molecular, parti-
cularmente la Reaccion en Cadena de la Polimera-
sa (PCR), se ha descubierto la existencia de microor-
ganismos que no se desarrollan en los medios de cul-
tivo comunmente utilizados y que, hasta la fecha, no
se han podido cultivar en el laboratorio. A estos mi-
croorganismos se les ha dado el nombre de micro-
organismos no cultivables [8, 14].
Estos microorganismos no cultivables viven, se desa-
rrollan y se dividen en condiciones muy particulares,
y no se han podido cultivar en el laboratorio!. En es-
te trabajo se describe como se descubrio que exis-
ten estos microorganismos y se discute por que no
se han podido cultivar en en laboratorio.
En general, para obtener muestras del DNA de cual-
quier organismo, se requiere una cantidad considera-
ble de material; para obtener dicho material, se cul-
tiva al organismo y se colectan las celulas por cen-
trifugacion, a este paso se le llama enriquecimien-
to. Con el avance de la tecnologa, se ha logrado ais-
lar DNA de: muestras de aire filtrado a traves de ta-
mices que logran detener microorganismos; esto se
ha realizado en una diversidad de suelos que no tie-
nen senales de vida, del interior de plantas y de aguas
oceanicas o de fuentes termales, sin pasar por el pa-
so de enriquecimiento, o sea sin cultivar a los mi-
croorganismos. Este DNA se usa como molde pa-
ra la amplificacion, por PCR, de los genes riboso-
males existentes en la muestra. Esta tecnica se rea-
liza con una DNA-polimerasa termoestable y oligo-
nucleotidos complementarios (primers, o cebadores
universales) con las regiones conservadas de los ge-
42
nes ribosomales que se encuentran en todas las bac-
terias. Los fragmentos sintetizados se pueden clonar
en vectores o se determina su secuencia nucleotdi-
ca directamente. Las secuencias obtenidas de los ge-
nes del RNA ribosomal se comparan con las existen-
tes en los bancos de datos (ej. Ribosomal Databa-
se Project [6]), hay mas de 30,000 secuencias exis-
tentes de un numero casi igual de especies bacte-
rianas. Con este enfoque, se ha revelado una diver-
sidad de microorganismos que no es posible detec-
tar con los metodos de microbiologa tradicional [4,
13, 21]. Tambien existen programas (tanto libres co-
mo comerciales) para verificar que las secuencias ob-
tenidas de ADN ambientales no sean artefactos o
quimeras (hbridos de genes de diferentes microor-
ganismos) [11]. Si las secuencias no se parecen a la
de ningun microorganismo existente en mas de un
97 %, es posible que se trate de una bacteria nue-
va, tal vez aun no cultivada. La secuencia obteni-
da permite tambien identificar fragmentos de secuen-
cia que no se encuentran en ninguna otra especie re-
portada, o sea que son exclusivos de esta especie. Es-
tas secuencias particulares pueden sintetizarse mar-
cadas con nucleotidos fluorescentes y pueden utili-
zarse en las muestras originales para ver al micros-
copio de epifluorescencia o confocal, el tipo y dis-
tribucion de las bacterias que presentan los genes
marcados.
Visualizar a las bacterias es un paso hacia su ais-
lamiento, pero cultivar a muchas de las que han si-
do detectadas de este modo, ha sido difcil. White-
sides en 1997 logro cultivar bacterias del genero Vi-
brio de un estado no cultivable, aunque es importan-
te resaltar que el desarrollo de estas bacterias se inhi-
be con altas concentraciones de nutrientes [20], y es-
tos resultados se prestaron a controversia [4]. Asmis-
mo, se logro desarrollar un Bacillus a partir de espo-
ras de aproximadamente 250 millones de anos [18].
Encontrar las condiciones para cultivar bacterias no
cultivables continua siendo un reto para los micro-
biologos [7].
Se ha acordado que a las bacterias no cultivables
detectadas solo por su secuencia de genes riboso-
Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar? H. Gonzalez y R. Fierro.
Figura 1. Cultivo en placa de Streptococcus thermophilus.
males se les designe como candidatos. Algunos
ejemplos de estas son las bacterias magnetotacticas
acuaticas (obtenidas de un lago en Alemania) que
se caracterizan por pegarse a imanes, y son llama-
das Magnetobacterium bavaricum [17]; o el candi-
dato Liberobacter, un patogeno de ctricos [9] que
es cercano a bacterias simbiontes beneficas del gene-
ro Mesorhizobium que crecen con facilidad en el la-
boratorio. La posicion filogenetica de las bacterias
no cultivables se ha empezado a estudiar recien-
temente. Ademas, no solo se han detectado bacte-
rias no cultivables sino tambien hongos, en particu-
lar, los que forman endo-micorrizas asociados a mu-
chas plantas [2, 16].
Existen diversas opiniones en torno al problema de
no poder cultivar microorganismos de los cuales se
ha documentado su existencia. Se ha pensado que
estos pueden requerir nutrientes particulares que
solo se encuentran en condiciones naturales. Algu-
nos nutrientes tal vez sean proporcionados por mi-
croorganismos asociados.
En la naturaleza, es comun encontrar comunida-
des bacterianas en las que coexisten varias espe-
cies y generos de bacterias. En estas comunidades
pueden existir dependencias metabolicas complejas.
El enfoque de la microbiologa tradicional tiene co-
mo primer paso el obtener cultivos puros de bacte-
rias (axenicos) y, tal vez, esto ocasiona que solo se
desarrollen parte de los miembros de la comunidad.
Otro factor que puede influir, es que los medios tpi-
cos de crecimiento son demasiado ricos en nutrien-
tes, aun los medios mnimos tienen un exceso de car-
bono, de nitrogeno o de fosforo, y podran inhibir
43
el crecimiento de microorganismos que, en condicio-
nes naturales, viven precariamente; a estos micro-
organismos se les ha designado como oligotrofos.
Los microorganismos con comportamiento opues-
to, que pueden vivir en medios ricos, se designan
copiotrofos [10].
Entre hongos y bacterias se han identificado oligotro-
fos [1, 12, 19]; estos poseen sistemas de transporte
de nutrientes de alta afinidad que les permiten to-
marlos del medio aun en concentraciones muy ba-
jas, practicamente sin nutrientes. Estos microorga-
nismos pueden crecer sobre vidrio, en agua desti-
lada, sobre plasticos, o bien tomando las trazas de
compuestos volatiles del ambiente.
Algunas bacterias oligotrofas toman trazas de amo-
nio de la atmosfera pero no fijan nitrogeno. Se ha
calculado que en los laboratorios y hospitales exis-
ten concentraciones de amonio suficientes para man-
tener el crecimiento de oligotrofos (debido a agen-
tes limpiadores o vapores de orina). Los oligotro-
fos deben considerarse como posibles agentes pa-
ra la biorremediacion, ya que se ha observado que,
una vez que los contaminantes alcanzan concentra-
ciones bajas, algunas bacterias no pueden tomar-
los ni degradarlos. Los oligotrofos, con alta afinidad
por los contaminantes, tal vez pudieran finalizar la
limpieza [3, 5, 15].
Figura 2. Reactivos para preparar medios de cultivo.
En resumen, existen bacterias y hongos que no se
han logrado cultivar en el laboratorio. Estos microor-
ganismos se detectaron amplificando parte de los ge-
nes ribosomales que son variables en todos los orga-
nismos. Una buena parte de la investigacion en mi-
crobiologa se dedica actualmente a encontrar me-
44
dios de cultivo adecuados para estos organismos no
cultivables para conocer mas acerca de la gran va-
riedad de formas de vida que habitan en la Tierra?
Glosario
Biorremediacion. Limpieza de contaminantes me-
diante agentes biologicos como bacterias.
Confocal. Sistema de microscopa en donde la fuen-
te luminosa es un laser que ilumina la muestra ba-
rriendo zonas muy pequenas y que es analizado por
computadora.
DNA-polimerasa. Enzima que sintetiza DNA a
partir de un molde y desoxinucleotidos, requiere un
cebador o primer complementario a una parte del
molde.
Epifluorescencia. Sistema de microscopa en don-
de se ilumina la muestra con un haz de luz ultravio-
leta que pasa por el ocular y se analiza la fluorescen-
cia que produce la muestra.
Filogenetica. Es la disciplina encargada de la re-
construccion de la historia evolutiva de los taxo-
nes es decir, los grupos de la clasificacion de los
seres vivos, que se representa en forma de arbol
filogenetico.
Genes ribosomales. informacion genetica codifi-
cada en el DNA que dirige la sntesis del RNA
ribosomal.
PCR. reaccion en cadena de la polimerasa, sntesis
del mismo fragmento de DNA varias veces ( 30), ti-
po produccion en cadena. Para esto se requiere una
enzima polimerasa de DNA que sea resistente a tem-
peraturas elevadas (95 C) para que pueda desnatu-
ralizarse el DNA antes de cada sntesis.
Primers. cadenas cortas de residuos de nucleotidos
(normalmente 20 para PCR) que presentan un ex-
tremo 3 OH en donde la DNA polimerasa puede em-
pezar la sntesis de DNA.
Vectores. vehculos geneticos en donde puede clo-
narse un fragmento de DNA y amplificarse o expre-
sar la protena que tiene codificada.
Bibliografa
1. Aragi Y, Taga N, Simidu U. (1977): Isolation and
distribution of oligotrophic marine bacteria. Can
J. Microbiol 23:981-7.
ContactoS 71, 4245 (2009)
2. Baumann P., Moran N. A. (1997): Non-cultivable
microorganisms from symbiotic associations of in-
sects and other hosts. Antonie Van Leeuwenhoek
72:39-48.
3. Bernard L., Mougel C., Maron P. A, et al. (2007):
Dynamics and identification of soil microbial po-
pulations actively assimilating carbon from 13C-
labelled wheat residue as estimated by DNA- and
RNA-SIP techniques. Environ Microbiol 9:752-
64.
4. Bogosian G., Aardema N. D., Bourneuf E. V.,
et al. (2000): Recovery of hydrogen peroxide-
sensitive culturable cells of Vibrio vulnificus gi-
ves the appearance of resuscitation from a viable
but nonculturable state. J. Bacteriol 182:5070-5.
5. Bohonos N., Chou T. W., Spanggord R. J. (1977):
Some observations on biodegradation of pollu-
tants in aquatic systems. Jpn J. Antibiot 30
Suppl:275-85.
6. Center for Microbial Ecology (2007): Riboso-
mal Database Proyect II, ed. Series. Vol. 2007.
http://rdp.cme.msu.edu/.
7. Head I. M., Saunders J. R., Pickup R. W. (1998):
Microbial evolution, diversity, and ecology: A de-
cade of ribosomal RNA analysis of uncultivated
microorganisms. Microb Ecol 35:1-21.
8. Hugenholtz P., Pitulle C., Hershberger K. L., et
al. (1998): Novel division level bacterial diversity
in a Yellowstone hot spring. J. Bacteriol 180:366-
76.
9. Jagoueix S., Bove J. M., Garnier M. (1994): The
phloem-limited bacterium of greening disease of
citrus is a member of the alpha subdivision of the
Proteobacteria. Int J. Syst Bacteriol 44:379-86.
10. Koch A. L. (2001): Oligotrophs versus copio-
trophs. Bioessays 23:657-61.
11. Komatsoulis G. A., Waterman M. S. (1997): A
new computational method for detection of chi-
meric 16S rRNA artifacts generated by PCR am-
plification from mixed bacterial populations. Appl
Environ Microbiol 63:2338-46.
12. Kuznetsov S. I., Dubinina GA, Lapteva N. A.
(1979): Biology of oligotrophic bacteria. Annu
Rev Microbiol 33:377-87.
13. Li W., Hartung J. S., Levy L. (2006): Quanti-
tative real-time PCR for detection and identifica-
tion of Candidatus Liberibacter species associa-
ted with citrus huanglongbing. J. Microbiol Met-
hods 66:104-15.
14. Liesack W., Stackebrandt E. (1992): Occurrence
of novel groups of the domain Bacteria as revealed
by analysis of genetic material isolated from an
Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar? H. Gonzalez y R. Fierro. 45

Figura 3. La familia de lo vivo se ha agrupado en tres dominios (grupos muy grandes). Las ramas que estan alejadas
no son muy similares, las que estan mas cercanas son grupos relacionados. Se han descrito aproximadamente 1.75
millones de especies en la tierra. Todava se describen nuevas especies, entre ellas muchas de los microorganismos
no cultivables. Los grupos son: Archaea: microorganismos procariontes muy primitivos; Bacteria: Procariontes que se
separaron de los primeros muy temprano en la evolucion; Eukarya: Todas las formas de eucariontes incluyendo plantas
y animales.

Australian terrestrial environment. J. Bacteriol
174:5072-8.
15. Lopez L., Pozo C., Rodelas B., et al. (2005):
Identification of bacteria isolated from an oli-
gotrophic lake with pesticide removal capacities.
Ecotoxicology 14:299-312.
16. Singh B. K., Millard P., Whiteley A. S., et
al. (2004): Unravelling rhizosphere-microbial in-
teractions: opportunities and limitations. Trends
Microbiol 12:386-93.
17. Spring S., Amann R., Ludwig W., et al. (1993):
Dominating role of an unusual magnetotactic bac-
terium in the microaerobic zone of a freshwater
sediment. Appl Environ Microbiol 59:2397-2403.
18. Vreeland R. H., Rosenzweig W. D., Powers D.
W. (2000): Isolation of a 250 million-year-old ha-
lotolerant bacterium from a primary salt crystal.
Nature 407:897-900.
19. Wainwright M., Barakah F., al-Turk I, et al.
(1991): Oligotrophic micro-organisms in industry,
medicine and the environment. Sci Prog 75:313-
22.
20. Whitesides M. D., Oliver J. D. (1997): Re-
suscitation of Vibrio vulnificus from the viable
but nonculturable state. Appl Environ Microbiol
63:1002-1005.
21. Zehr J. P., Mellon M. T., Zani S. (1998): New
nitrogen-fixing microorganisms detected in oli-
gotrophic oceans by amplification of nitrogena-
se (nifH) genes. Appl Environ Microbiol 64:5067.
cs
Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar? H. Gonzalez y R. Fierro.
Figura 1. Cultivo en placa de Streptococcus thermophilus.
males se les designe como candidatos. Algunos
ejemplos de estas son las bacterias magnetotacticas
acuaticas (obtenidas de un lago en Alemania) que
se caracterizan por pegarse a imanes, y son llama-
das Magnetobacterium bavaricum [17]; o el candi-
dato Liberobacter, un patogeno de ctricos [9] que
es cercano a bacterias simbiontes beneficas del gene-
ro Mesorhizobium que crecen con facilidad en el la-
boratorio. La posicion filogenetica de las bacterias
no cultivables se ha empezado a estudiar recien-
temente. Ademas, no solo se han detectado bacte-
rias no cultivables sino tambien hongos, en particu-
lar, los que forman endo-micorrizas asociados a mu-
chas plantas [2, 16].
Existen diversas opiniones en torno al problema de
no poder cultivar microorganismos de los cuales se
ha documentado su existencia. Se ha pensado que
estos pueden requerir nutrientes particulares que
solo se encuentran en condiciones naturales. Algu-
nos nutrientes tal vez sean proporcionados por mi-
croorganismos asociados.
En la naturaleza, es comun encontrar comunida-
des bacterianas en las que coexisten varias espe-
cies y generos de bacterias. En estas comunidades
pueden existir dependencias metabolicas complejas.
El enfoque de la microbiologa tradicional tiene co-
mo primer paso el obtener cultivos puros de bacte-
rias (axenicos) y, tal vez, esto ocasiona que solo se
desarrollen parte de los miembros de la comunidad.
Otro factor que puede influir, es que los medios tpi-
cos de crecimiento son demasiado ricos en nutrien-
tes, aun los medios mnimos tienen un exceso de car-
bono, de nitrogeno o de fosforo, y podran inhibir
43
el crecimiento de microorganismos que, en condicio-
nes naturales, viven precariamente; a estos micro-
organismos se les ha designado como oligotrofos.
Los microorganismos con comportamiento opues-
to, que pueden vivir en medios ricos, se designan
copiotrofos [10].
Entre hongos y bacterias se han identificado oligotro-
fos [1, 12, 19]; estos poseen sistemas de transporte
de nutrientes de alta afinidad que les permiten to-
marlos del medio aun en concentraciones muy ba-
jas, practicamente sin nutrientes. Estos microorga-
nismos pueden crecer sobre vidrio, en agua desti-
lada, sobre plasticos, o bien tomando las trazas de
compuestos volatiles del ambiente.
Algunas bacterias oligotrofas toman trazas de amo-
nio de la atmosfera pero no fijan nitrogeno. Se ha
calculado que en los laboratorios y hospitales exis-
ten concentraciones de amonio suficientes para man-
tener el crecimiento de oligotrofos (debido a agen-
tes limpiadores o vapores de orina). Los oligotro-
fos deben considerarse como posibles agentes pa-
ra la biorremediacion, ya que se ha observado que,
una vez que los contaminantes alcanzan concentra-
ciones bajas, algunas bacterias no pueden tomar-
los ni degradarlos. Los oligotrofos, con alta afinidad
por los contaminantes, tal vez pudieran finalizar la
limpieza [3, 5, 15].
Figura 2. Reactivos para preparar medios de cultivo.
En resumen, existen bacterias y hongos que no se
han logrado cultivar en el laboratorio. Estos microor-
ganismos se detectaron amplificando parte de los ge-
nes ribosomales que son variables en todos los orga-
nismos. Una buena parte de la investigacion en mi-
crobiologa se dedica actualmente a encontrar me-
44
dios de cultivo adecuados para estos organismos no
cultivables para conocer mas acerca de la gran va-
riedad de formas de vida que habitan en la Tierra?
Glosario
Biorremediacion. Limpieza de contaminantes me-
diante agentes biologicos como bacterias.
Confocal. Sistema de microscopa en donde la fuen-
te luminosa es un laser que ilumina la muestra ba-
rriendo zonas muy pequenas y que es analizado por
computadora.
DNA-polimerasa. Enzima que sintetiza DNA a
partir de un molde y desoxinucleotidos, requiere un
cebador o primer complementario a una parte del
molde.
Epifluorescencia. Sistema de microscopa en don-
de se ilumina la muestra con un haz de luz ultravio-
leta que pasa por el ocular y se analiza la fluorescen-
cia que produce la muestra.
Filogenetica. Es la disciplina encargada de la re-
construccion de la historia evolutiva de los taxo-
nes es decir, los grupos de la clasificacion de los
seres vivos, que se representa en forma de arbol
filogenetico.
Genes ribosomales. informacion genetica codifi-
cada en el DNA que dirige la sntesis del RNA
ribosomal.
PCR. reaccion en cadena de la polimerasa, sntesis
del mismo fragmento de DNA varias veces ( 30), ti-
po produccion en cadena. Para esto se requiere una
enzima polimerasa de DNA que sea resistente a tem-
peraturas elevadas (95 C) para que pueda desnatu-
ralizarse el DNA antes de cada sntesis.
Primers. cadenas cortas de residuos de nucleotidos
(normalmente 20 para PCR) que presentan un ex-
tremo 3 OH en donde la DNA polimerasa puede em-
pezar la sntesis de DNA.
Vectores. vehculos geneticos en donde puede clo-
narse un fragmento de DNA y amplificarse o expre-
sar la protena que tiene codificada.
Bibliografa
1. Aragi Y, Taga N, Simidu U. (1977): Isolation and
distribution of oligotrophic marine bacteria. Can
J. Microbiol 23:981-7.
ContactoS 71, 4245 (2009)
2. Baumann P., Moran N. A. (1997): Non-cultivable
microorganisms from symbiotic associations of in-
sects and other hosts. Antonie Van Leeuwenhoek
72:39-48.
3. Bernard L., Mougel C., Maron P. A, et al. (2007):
Dynamics and identification of soil microbial po-
pulations actively assimilating carbon from 13C-
labelled wheat residue as estimated by DNA- and
RNA-SIP techniques. Environ Microbiol 9:752-
64.
4. Bogosian G., Aardema N. D., Bourneuf E. V.,
et al. (2000): Recovery of hydrogen peroxide-
sensitive culturable cells of Vibrio vulnificus gi-
ves the appearance of resuscitation from a viable
but nonculturable state. J. Bacteriol 182:5070-5.
5. Bohonos N., Chou T. W., Spanggord R. J. (1977):
Some observations on biodegradation of pollu-
tants in aquatic systems. Jpn J. Antibiot 30
Suppl:275-85.
6. Center for Microbial Ecology (2007): Riboso-
mal Database Proyect II, ed. Series. Vol. 2007.
http://rdp.cme.msu.edu/.
7. Head I. M., Saunders J. R., Pickup R. W. (1998):
Microbial evolution, diversity, and ecology: A de-
cade of ribosomal RNA analysis of uncultivated
microorganisms. Microb Ecol 35:1-21.
8. Hugenholtz P., Pitulle C., Hershberger K. L., et
al. (1998): Novel division level bacterial diversity
in a Yellowstone hot spring. J. Bacteriol 180:366-
76.
9. Jagoueix S., Bove J. M., Garnier M. (1994): The
phloem-limited bacterium of greening disease of
citrus is a member of the alpha subdivision of the
Proteobacteria. Int J. Syst Bacteriol 44:379-86.
10. Koch A. L. (2001): Oligotrophs versus copio-
trophs. Bioessays 23:657-61.
11. Komatsoulis G. A., Waterman M. S. (1997): A
new computational method for detection of chi-
meric 16S rRNA artifacts generated by PCR am-
plification from mixed bacterial populations. Appl
Environ Microbiol 63:2338-46.
12. Kuznetsov S. I., Dubinina GA, Lapteva N. A.
(1979): Biology of oligotrophic bacteria. Annu
Rev Microbiol 33:377-87.
13. Li W., Hartung J. S., Levy L. (2006): Quanti-
tative real-time PCR for detection and identifica-
tion of Candidatus Liberibacter species associa-
ted with citrus huanglongbing. J. Microbiol Met-
hods 66:104-15.
14. Liesack W., Stackebrandt E. (1992): Occurrence
of novel groups of the domain Bacteria as revealed
by analysis of genetic material isolated from an
Sabas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar? H. Gonzalez y R. Fierro. 45

Figura 3. La familia de lo vivo se ha agrupado en tres dominios (grupos muy grandes). Las ramas que estan alejadas
no son muy similares, las que estan mas cercanas son grupos relacionados. Se han descrito aproximadamente 1.75
millones de especies en la tierra. Todava se describen nuevas especies, entre ellas muchas de los microorganismos
no cultivables. Los grupos son: Archaea: microorganismos procariontes muy primitivos; Bacteria: Procariontes que se
separaron de los primeros muy temprano en la evolucion; Eukarya: Todas las formas de eucariontes incluyendo plantas
y animales.

Australian terrestrial environment. J. Bacteriol
174:5072-8.
15. Lopez L., Pozo C., Rodelas B., et al. (2005):
Identification of bacteria isolated from an oli-
gotrophic lake with pesticide removal capacities.
Ecotoxicology 14:299-312.
16. Singh B. K., Millard P., Whiteley A. S., et
al. (2004): Unravelling rhizosphere-microbial in-
teractions: opportunities and limitations. Trends
Microbiol 12:386-93.
17. Spring S., Amann R., Ludwig W., et al. (1993):
Dominating role of an unusual magnetotactic bac-
terium in the microaerobic zone of a freshwater
sediment. Appl Environ Microbiol 59:2397-2403.
18. Vreeland R. H., Rosenzweig W. D., Powers D.
W. (2000): Isolation of a 250 million-year-old ha-
lotolerant bacterium from a primary salt crystal.
Nature 407:897-900.
19. Wainwright M., Barakah F., al-Turk I, et al.
(1991): Oligotrophic micro-organisms in industry,
medicine and the environment. Sci Prog 75:313-
22.
20. Whitesides M. D., Oliver J. D. (1997): Re-
suscitation of Vibrio vulnificus from the viable
but nonculturable state. Appl Environ Microbiol
63:1002-1005.
21. Zehr J. P., Mellon M. T., Zani S. (1998): New
nitrogen-fixing microorganisms detected in oli-
gotrophic oceans by amplification of nitrogena-
se (nifH) genes. Appl Environ Microbiol 64:5067.
cs