Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Análisis Químico Clínico II
Nombre del docente: Q.F. Patricia Jiménez Granizo Mg.
Informe #8: Determinación de Glucosa
Nombre del estudiante: Heidy Yomira Toala Laje
Semestre: Noveno Grupo: 2 Paralelo: “C”
Objetivos de la práctica de laboratorio
 Determinar de forma cuantitativa la concentración de glucosa presente en suero, empleando un método
enzimático.
Instrucciones o consideraciones previas
La glucosa es un hidrato de carbono presente en nuestro organismo, el aumento o disminución de sus valores
produce patologías relacionadas con el metabolismo de acuerdo a los alimentos que ingiere. El diagnóstico precoz
y el control de los pacientes diabéticos tiene por objeto evitar la cetoacedosis y las complicaciones resultantes de la
hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
Fundamento del método
La glucosa presente en la muestra es oxidada por una enzima denominada glucosa oxidasa (GOD) a ácido glucónico
y agua oxigenada. El agua oxigenada reacciona con la 4-aminoantipirina y el fenol (Reacción de Trinder) en
presencia de la enzima peroxidasa (POD) que cataliza la reacción, produciendo una quinona coloreada la cual se
lee colorimétricamente a 546 nm.
El esquema de reacción es el siguiente:

glucosa  2 H 2O  O 2 GOD
 ácido glucónico  H2O2
2H2O2  4 - aminoantipirina  fenol POD
 quinona coloreada  4H2O
Condiciones de la reacción

Intervalo de referencia
 Glucosa en suero: 75 – 115 mg/dl
Reactivos de laboratorio
R1: Monoreactivo
 Tampón fosfatos 100 mmol/L pH 7,5
 Glucosa oxidasa ≥ 10 KU/L
 Peroxidasa > KU/L
 4-aminoantipirina 0.5 mmol/L
 Fenol 5 mmol/L.
CAL: Patrón de glucosa
 Glucosa 100 mg/Dl (5,55 mmol/L)
Patrón primario de matriz orgánica. El valor de la concentración es trazable al material de referencia certificado
9176.
Muestra
 Suero E 17/12
Materiales de laboratorio
 Pipeta automática de volumen variable (5-50 µl).
 Pipeta automática de volumen variable (100-1000 µl).
 Tubos de ensayo (12 x 100 mm).
 Gradilla.
 3 Cubetas de caras paralelas (1 cm).
 Reloj cronómetro.
 Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
 Punta para pipeta color azul (50-1000 µl).
 Papel absorbente
Equipos de laboratorio
 Espectrofotómetro UV-vis.
 Baño de agua a 37 ° C.

Espectrofotómetro UV-VIS. Baño maría

Marca Genesys 20 Marca Medinger
Modelo 4001/4 Modelo GDR
Catálogo 4001 Referencia 12-8-1MT
SN 3SGE113009 Temperatura 37°C
Voltaje 110V Código 4801119
Código 4804177

Actividades a desarrollar

Tubos Blanco Standard Muestra

R1 Monoreactivo 1 ml 1 ml 1 ml
Muestra ----------- ------------- 10 ul
CAL Patrón ----------- 10 ul -----------
Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura
ambiente o 5 minutos a 37°C.
Leer la absorbancia de la muestra y el patrón a 500 nm
frente al blanco de reactivo.

Resultados obtenidos (Observaciones, cálculos, datos, ecuaciones, tablas, gráficos, figuras, fotos)

Muestra: Suero E 17/12

Concentración del standard: 100 mg/dl
Absorbancia del standard: 0.202
Absorbancia de la muestra: 0.170
Factor = Concentración del standard = 100 mg/dl = 495.04
Absorbancia del standard 0.202

Glucosa mg/dL = Absorbancia de la muestra x factor = 0.170 x 495.04 = 84.1568 mg/dl.

Descripción Resultado
Fecha 08/01/2020
Identificación de la muestra E 17/12
Hora inicio ensayo 8:25 am
Absorbancia del blanco 0.000
Concentración del estándar (mg/dl, umol/l) 100 mg/dL
Absorbancia del estándar 0.202
Factor de calibración (mg/dl, umol/l) 495.04
Absorbancia de la muestra 0.170
Concentración de la muestra (mg/dl, umol/l) 84.1568 mg/dL.
Hora de finalización del ensayo 8:45 am
Analista Madelyne Rivera
Observaciones El valor de glucosa presente en la muestra se encuentra
dentro de los valores de referencia.

Imagen 1. Kit para la determinación de Imagen 2. Muestra empleada para

glucosa en muestras biológicas (suero). determinar la concentración de glucosa.

Imagen 3. R1 “monoreactico” y CAL Imagen 4. Tubos colocados en baño

“patrón de glucosa” maria por 5 minutos a 37°C.
Conclusiones
 Se logró determinar de la concentración de glucosa en suero mediante un método enzimático (Reacción de
Tinder), el cual indica que el valor obtenido se encuentra dentro del intervalo de referencia.
Recomendaciones
 Las muestras de suero deben estar libre de hemólisis y ser preferentemente frescas. Pueden conservarse hasta
12 horas en refrigerador (2-10 °C).
 Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente. Los reactivos son para uso diagnóstico “in vitro”.
 Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de química clínica.
 Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a las leyes ambientales vigentes.
 Los reactivos provistos son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
 La separación del coágulo del suero, debe ser realizada dentro de ½ a 1 hora después de haberse realizado la
extracción.
 Manipular con precaución los equipos.
 Medir correctamente las alícuotas indicadas.
 Rotular los tubos donde va a realizar las determinaciones.
 Durante el procedimiento leer cuidadosamente el inserto.
 Usar el equipo de protección adecuado.
Bibliografía
 Analyticon Biotechnologies Ag. Fluitest GLU. Glucose. Lichtenfels/Germany.