BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

AREA MICROBIOLOGÍA

ASIGNATURA LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

CÓDIGO LQF 306L

M.C. ALMA LÓPEZ GARCÍA

VERANO 2010

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M.C. Alma López García

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS OBJETIVOS: a. Educacional:

Los

alumnos

egresados

de

la

carrera

de

Químico

Farmacobiólogo serán poseedores de conocimientos, habilidades y actitudes valorativas que le permitirán comprometerse con el desarrollo responsable de la nación y su cambiante realidad. Para lo cual contará con las herramientas como son aptitudes y un pensamiento reflexivo, crítico y científico que le permitirán ser un profesionista de alto desempeño laboral con un espíritu emprendedor, innovador y propositivo. Por lo que el egresado pondrá en uso las herramienta y el conocimiento obtenido a lo largo de su estancia en la universidad. b. General: Es una materia práctica que tiene como finalidad proporcionar un panorama general del laboratorio de inmunología. Revisar de manera general la importancia de las reacciones antígeno-anticuerpo en el diagnóstico de determinadas enfermedades infecciosas, y su aplicación como métodos inmunológicos cualitativos y cuantitativos con el fin de obtener información diagnóstica-clínica y pronostica de los pacientes. c. Específicos: • Definir la terminología empleada comúnmente en laboratorio de Inmunología. • • Aplicar las medidas de seguridad en el laboratorio clínico. Adquirir destreza manual para desarrollar las metodologías básicas aplicadas en Inmunología • Aplicar medidas de seguridad en el trabajo con muestras biológicas como sangre y suero humanos. • Comprender la importancia del laboratorio de Inmunología para su formación profesional. • Motivar en el alumno su interés por la búsqueda de información actualizada sobre el área de conocimiento y desarrollar en él su capacidad para la interpretación, discusión y síntesis • • Desarrollar en el alumno la capacidad de trabajo en equipo y liderazgo. Desarrollar la capacidad de auto-aprendizaje, a través de lectura, comprensión y discusión de artículos

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M.C. Alma López García

• Desarrollar capacidad de observación y una actitud abierta a la búsqueda del conocimiento. 3 M. constructiva. • Contribuir a los cambios de hábitos de higiene en el alumno. Alma López García . propositiva y responsable.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS • Desarrollar en el alumno valores éticos profesionales acerca del conocimiento y aplicación de los mismos en la manipulación de las formas farmacéuticas en los pacientes. • Desarrollar en el alumno una actitud crítica.C. consciente de la continua evolución de la ciencia.

Se debe poseer un manual de seguridad que contenga información sobre la conducta a seguir en caso de una contingencia OBJETIVO: El alumno de habituara a las medidas de seguridad necesarias en el laboratorio. Queda estrictamente prohibido comer.C. los riesgos de un laboratorio de Inmunología pueden extenderse a laboratorios adyacentes. no se permitirá el acceso al laboratorio. así como instrucciones escritas y verbales de aquellos que solo tienen una exposición limitada al ambiente del laboratorio son las medidas disponibles más importantes para prevenir las infecciones adquiridas en el laboratorio. La educación del personal que manipula a diario las muestras. DESARROLLO: El conocimiento de las propiedades fisicoquímicas y de la infecto-contagiosidad de los microorganismos. también están expuestos a todos los riesgos asociados a cualquier ambiente de laboratorio como incendio. riesgos eléctricos. Comunicarse con sus compañeros solo en la medida indispensable. son necesarias para no correr ningún riesgo de adquirir aún en forma accidental. así como introducir algún objeto en la boca. es el momento para aclararlas. leer y recordar la metodología a seguir de acuerdo con las indicaciones del profesor. químicos. La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia. Colocar todo los artículos personales en la zona lateral o en los cajones de las mesa de trabajo.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 1 SEGURIDAD EN EL LABORATORIO INTRODUCCIÓN: Los laboratorios de Inmunología son ambientes especiales. La puerta del laboratorio debe mantenerse cerrada. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de utilizarla. una infección por este tipo de partículas. mal funcionamiento de los equipos. materiales radiactivos. Además del riesgo por infección los laboratorios de Inmunología. se enlistan a continuación los reglamentos y normas que habrán de seguirse en el Laboratorio del área de Microbiología. lavarse las manos con agua y jabón desinfectante. las muestras clínicas de pacientes recibidas para su estudio significan un riesgo para el personal debido a los agentes infecciosos que pueden contener. Antes de iniciar la práctica. situaciones ambientales como pisos deslizantes. Si se tienen dudas. peligros dependientes de desastres naturales. potencialmente infecciosas y la educación por medio de avisos sobre riesgos biológicos. sistemas de circulación de aire deficiente. Permanecer en la zona de trabajo asignada para cada equipo. Alma López García . con la finalidad de asegurar la integridad física de los alumnos. Al iniciar y finalizar las prácticas. Entrar al laboratorio con la bata puesta y abotonada. permite definir las normas que en materia de seguridad. beber o fumar en el laboratorio. pasado este tiempo. 4 M. Con base en lo anterior. así como para mantener una organización adecuada para el desarrollo de las prácticas correspondientes.

sección. almacenamiento. nombre del alumno. equipo. siempre se deberá desinfectar el material que se le proporcione en el laboratorio. Residuo peligroso biológico-infeccioso: El que contiene bacterias. transporte. el material de desecho no contaminado deberá depositarse en los contenedores correspondientes. etc. derramamiento de suspensiones virales. así como los generados en la producción de biológicos Los instrumentos y aparatos para transferir. cristalería entera o rota. inocular y mezclar cultivos Las muestras biológicas para análisis químico. pipetas Pasteur. jeringas. con el fin de reducir el riesgo de transmisión de enfermedades. agujas hipodérmicas. En la NOM referida. tubos de ensayo y similares. envasado. 5 M. materias o partes que pueden ser nocivos. tales como: Desinfección: Destrucción de microorganismos patógenos en todos los ambientes. En adición.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra (rotura de material. En general. bisturíes. físicos o químicos contrarios a su vida o desarrollo. Rotule todo el material que se va a incubar. las disposiciones anteriores tienden al cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995. Sea cuidadoso con el material y equipo que se le proporciona. de acupuntura y para tatuaje. se consideran residuos peligrosos biológico-infecciosos los siguientes: La sangre Los cultivos y cepas almacenadas de agentes infecciosos Los cultivos generados en los procedimientos de diagnóstico e investigación. tratamiento y disposición final de los Residuos Peligrosos biológico-infecciosos que se generan en establecimientos e instituciones relacionadas con el sector salud. en la cual se establecen los requisitos para la separación. microbiológico. por los distintos medios mecánicos. así como fecha de entrada y salida. Todo el material que se va a incubar o desechar. citológico e histológico Los residuos anatómicos derivados de la atención a pacientes de los laboratorios Los equipos y dispositivos desechables utilizados para la exploración y toma de muestras Los objetos punzo cortantes usados o sin usar Los que han estado en contacto con pacientes o sus muestras clínicas durante el diagnóstico y tratamiento. En forma previa a su lavado.). deberá colocarse en el sitio indicado por el profesor. que se generan en hospitales y establecimientos de atención médica. lancetas. se establecen además definiciones de interés para los laboratorios y áreas de microbiología.C. recolección. virus u otros microorganismos con capacidad de causar infección o que contiene o puede contener toxinas producidas por microorganismos que causan efectos nocivos a seres vivos y al ambiente. con los siguientes datos: grupo. cajas de Petri. Alma López García . incluyendo navajas. porta y cubreobjetos.

El cumplimiento de las consideraciones señaladas con anterioridad. deberán ser tratados por métodos físicos o químicos.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Con base en lo anterior. como para su desarrollo en condiciones asépticas. Alma López García . los residuos peligrosos infecto-contagiosos.C. si se trata de residuos patológicos. los cuales: Deberán garantizar la eliminación de microorganismos patógenos Deberán volver irreconocibles a los residuos peligrosos biológico-infecciosos Deberán ser cremados. 6 M. garantiza la seguridad que deberá observarse tanto para alcanzar los objetivos de las prácticas.

una dilución 1/10 puede prepararse de diferentes maneras: Por ejemplo: 1 ml de muestra en 9 ml de diluyente 0.1 ml de muestra en 0.5 ml de diluyente En la práctica el cálculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras diferentes que cumplen ciertas expectativas. Sustituyendo los valores conocidos tenemos: 1/d=1/10 Vm=5 ml Vt= ? Así: 1/10=5 ml/Vt despejando Vt tenemos que Vt=10 x 5/1=50 ml volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra volumen de muestra = 50-5 = 45 ml Ejemplo N°2 Prepare exactamente 200 ml de una dilución 1/50. DESARROLLO: Así. la dilución directa y la dilución en serie. OBJETIVO: El alumno aprenderá a calcular diluciones en forma directa o en serie.C.5 ml de muestra en 4.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 2 DILUCIONES INTRODUCCIÓN: Se les llama diluciones a las soluciones con concentración menor obtenidas al agregar volúmenes conocidos de diluyente a una solución de concentración conocida. Las diluciones se expresan en forma de una proporción. Dado que en una dilución lo que se indica es la relación entre el volumen de la solución original y el volumen total en que se encuentra.9 ml de diluyente 0. Para realizar una dilución directa se puede hacer uso de la siguiente expresión: 1/d=Vm/Vt donde 1/d= dilución Vm= volumen de muestra Vt= volumen total (volumen de diluyente + volumen muestra) de Ejemplo N°1 Lleve 5 ml de muestra a una dilución 1/10. Dilución directa. Alma López García . una dilución 1/10 indica que se tiene un volumen de la solución original contenido o diluido en 10 volúmenes totales. por ejemplo 1/10 (1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de lo que se está diluyendo y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total en que se encuentra. de los cuales 9 corresponden al diluyente. Sustituyendo los valores conocidos tenemos: 1/d=1/50 7 M.

los demás tubos toman la alícuota ya diluida del tubo previo. Dilución seriada Este tipo de dilución soluciona los inconvenientes que presenta el calculo directo de las diluciones altas. sin embargo como la muestra ya se encuentra diluida previamente 1/ 100. la muestra se puede diluir 1/ 100 (Vm= 0. Así.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Vm=? Vt= 200 ml Así: 1/50=Vm/200 Despejando Vm tenemos que Vm=200 x 1/50=4 ml Volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra Volumen de diluyente = 200-4=196 ml Sin embargo. en microbiología permite el calculo de la población microbiana en la muestra de estudio. En el ejemplo de la dilución 1/ 10 000. 4 y 10 los más usados.999 ml de diluyente y 0.9 de diluyente.001 ml de muestra. multiplicando sus denominadores tenemos: 1/ 100 x 1/ 100= 1/ 10 000 En este caso el factor de dilución es de 100. Alma López García . Debe insistirse en que solo el primer tubo lleva la alícuota de la muestra sin diluir. siendo 2. se desperdicia mucho reactivo o se incurre en un error de medición. una dilución 1/ 10 000 se prepararía con 1 ml de muestra y 9 999 ml de diluyente o bien 9.C. de la cual se toma una alícuota que se diluye en varios tubos y se siembra por vertido en placa.1 ml de esta dilución en un segundo tubo con 9. El número de tubos y las diluciones intermedias se plantean considerando el volumen de los tubos así como el volumen mínimo que se puede medir fácil y exactamente con las pipetas disponibles. 8 M. las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es necesario hacer una dilución alta por ejemplo 1/ 10 000.1 ml + Vt= 10 ml) en un primer tubo y colocar 0. Además. La diferencia entre la dilución de dos tubos consecutivo se conoce como factor de dilución. El segundo tubo tendrá una dilución 1/ 100.

La sangre capilar o periférica es la que fluye después de aplicar una punción superficial cutánea. las muestras de sangre pueden ser de sangre capilar o periférica y de sangre venosa. Esta muestra se obtiene por punción de una de las tres venas del pliegue del codo: la basílica. Se usan en relación de una parte de anticoagulante por cada nueve partes de sangre. Algunas pruebas pueden realizarse con sangre capilar o periférica y se aconseja cuando no es posible obtener una muestra de sangre venosa o no se desea puncionar la vena. 9 M. una prueba diagnóstica del embarazo. 20x32 o el sistema para la extracción de sangre intravenosa al vacío Vacuntainer  . se comprueban con propósitos de diagnóstico (inmunodiagnóstico). Se emplean jeringas desechables con agujas de tipo 21x32. La cantidad máxima de sangre a extraer será estrictamente la necesaria para las pruebas. habitualmente se usan 0. Anticoagulantes.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 3 TOMA DE MUESTRA INTRODUCCIÓN: En el laboratorio de inmunología la muestra a estudiar es principalmente sangre y sus derivados suero o plasma. Los anticoagulantes más usados son el citrato de sodio. los cuales desde el descubrimiento de la alta especificidad de las reacciones antígeno-anticuerpo (Ag-Ac). No debe olvidar soltarlo tan pronto empiece a obtenerse la muestra. En el plasma o suero se determina principalmente la presencia de anticuerpos. una prueba que señala un proceso inflamatorio agudo. Alma López García . Aún más. hongos y virus sino a la identificación del propio microorganismo. Sangre capilar o periférica. Inicialmente los investigadores se dedicaron a la detección de anticuerpos en el suero del paciente como un signo de infección y así a la identificación serológica del microorganismo. Antes de puncionar se coloca el torniquete aproximadamente a 8 cm de distancia arriba del pliegue del codo.4%. DESARROLLO: Obtención de Muestra de Sangre. proporcionan un medio para la detección y cuantificación de antígenos no infecciosos y anticuerpos de importancia clínica tales como la determinación del grupo sanguíneo. OBJETIVO: Aprender el procedimiento apropiado para la obtención de sangre venosa de las venas del dobles del codo. la determinación de la proteína C-reactiva. El citrato de sodio se emplea al 3.8% y el oxalato de sodio al 1. el VDRL. Previamente se realiza la limpieza del área elegida con torunda y alcohol. la detección de antígenos asociados a tumores y la demostración de la hormona gonadotropina coriónica. parásitos.C. oxalato de sodio y EDTA. Sangre venosa. El EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético) se utiliza al 10% y es uno de los anticoagulantes de elección para el trabajo de rutina. hoy en día la sensibilidad y especificidad de los inmunoensayos permiten no solo la detección de anticuerpos contra una amplia variedad de organismos infecciosos incluyendo bacterias. Se puede obtener de la yema del dedo.5ml de volumen total con la muestra de sangre. Sin embargo. Para efectuar análisis serológicos. la cefálica o la mediana cubital.25ml de la solución para completar a 2.

C. y dependiendo del tipo de análisis debe analizarse inmediatamente o puede conservarse adecuadamente refrigerada entre 4 y 8ºC para el análisis posterior. Alma López García . La muestra debe rotularse correctamente y separase según el caso en plasma o suero. 10 M.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Manejo y conservación de la muestra.

4. colocar en un puente de tinción y cubrirlos (contar el número de gotas) con colorante de Wright.5-1. Dejar secar completamente los frotis.0%).C. basófilos (0.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 4 OBSERVACION DE LEUCOCITOS (CUENTA DIFERENCIAL) INTRODUCCIÓN: Los cinco principales tipos de leucocitos son los neutrófilos (5070%). colocar una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio. Por cuenta diferencial se entiende la determinación del porcentaje relativo de cada tipo de leucocito en una muestra de sangre. Cuando la preparación esté completamente seca. A partir de la muestra de sangre preparar 2 extendidos (frotis) siguiendo las indicaciones del instructor.4 Microscopio DESARROLLO: 1. Dejar el colorante 1 minuto y añadir el mismo número de gotas de solución reguladora pH 6. Alma López García .4 durante 8 minutos. 2. 3. linfocitos (20-30%). OBJETIVO: Identificar los diferentes tipos de leucocitos en un frote teñido MATERIAL Y EQUIPO Portaobjetos Lancetas desechables Algodón Colorante de Wright Solución reguladora pH 6. 5. Para facilitar la identificación consultar las láminas a color que ilustran los diferentes leucocitos. los eosinófilos (1-5%). el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un color púrpura que facilita la diferenciación. Se realiza en extendidos (frotis) preparados cuidadosamente y teñidos con colorantes tales como Wright. Lavar suavemente la preparación por 30 segundos y secar el exceso de agua. y monocitos (2 – 6%). 11 M.

B y D. B. 5. anti-B y anti-D.C. posteriormente se encontró que existe como seis antígenos a los cuales Fisher y Race designaron con letras C. a 2000 r. Se centrífuga por 2 min. Se obtiene aproximadamente 5 ml de sangre venosa y se colocan en un tubo con EDTA (0. 6. AB y O. Se incuba a 37°C por 30 minutos. c. el D es responsable de la condición Rh positivo. Se marcan tres tubos de la siguiente manera: anti-A. y se agrega una gota del suero tipificador según corresponda. 3.5 ml de solución salina y se elimina perfectamente el sobrenadante. se centrífuga y se busca la aglutinación. Muestras de sangre con anticoagulante Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Lancetas desechable Aplicadores de madera o palillos Sueros tipificadores anti-A anti-B anti-D (Rh) 8. OBJETIVO: Demostrar por medio de una reacción de aglutinación la presencia de los Ag eritrocitarios A. 2.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 5 DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO INTRODUCCIÓN: Alrededor de 1900 Karl Landsteiner descubrió que en el humano existen cuatro tipos de sangres con respecto a la presencia o ausencia de dos antígenos específicos denominados A y B. d. La tipificación de eritrocitos en el laboratorio se realiza con antisueros específicos contra los antígenos A. 7. 4. para separar el plasma del paquete celular. Se toman 0. Este último se caracteriza por la ausencia de los antígenos A y B.1 ml del paquete celular y se resuspenden en 1. E. Este antígeno se designó inicialmente como factor Rh.1 ml de EDTA al 1% por cada ml de sangre). Alma López García . Los tubos se centrifugan 1 min a 2000 r. En 1940 Landsteiner y Wiener reportaron que el suero de conejo producido contra eritrocitos de mono Rhesus podía aglutinar los eritrocitos del 85% de una población caucásica. Se agregan 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y se agitan suavemente.p. Se busca la presencia de aglutinación agitando suavemente los tubos.m. 9. Si la prueba en el tubo anti-D es negativa se realiza el siguiente procedimiento. B y D. 5.9 ml de solución salina para una suspensión aproximada del 5%.m. La aglutinación se reconoce por la formación de grumos. Uno de estos antígenos. 12 M. MATERIALES Y EQUIPO 1. Estos cuatro grupos se conocen actualmente como tipos A. 7. 2. 4.p. 6. D. 3. y puede realizarse por métodos en tubo o en portaobjetos. e. 8. Si persiste la negatividad se lavan los eritrocitos 3 veces con 0. Placa oscilatoria DESARROLLO: Método en tubo 1.

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 10. 5. 3. Mezclar los reactivos con un aplicador de madera diferente para cada gota. Método en portaobjetos 1. Se agrega una gota del suero de Coombs y se agita suavemente. Depositar 2 gotas de sangre en tres diferentes divisiones de un portaobjetos. Buscar la presencia de aglutinación. Alma López García . 4. una gota de anti-B y una gota de anti-D respectivamente. se centrífuga y se busca la aglutinación Interpretación: Si aglutina en el paso 6 es Rh positivo Si aglutina en el paso 10 es Du Si persiste la negatividad es Rh negativo. 2. 13 M. Agitar suavemente en la placa oscilatoria. Agregar de izquierda a derecha una gota del antisuero anti-A.C.

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 6 DETERMINACIÓN DEL TITULO DE ANTICUERPOS ABO DEL SUERO.C. 2. la presencia de anticuerpos fuertemente reactivos en el suero de los que carecen de los antígenos correspondientes. durante 1 minuto. Además de la aglutinación se puede observar hemólisis. El “título” es una medida relativa de anticuerpos o antígenos en una reacción serológica. Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgM y son producidos en respuesta a una inmunización. dado que algunas bacterias presentan sustancias similares a los antígenos A o B. INTRODUCCIÓN: El sistema de grupo sanguíneo ABO posee una característica única. Agregar 0. 2. El título del anticuerpos A o B del suero se reporta como el recíproco de la máxima dilución en la cual es posible observar eritrocitos aglutinados. 3.1 ml de solución salina cada uno de ellos. por lo que se debe comprobar la presencia de hemoglobina libre 14 M.1 ml del suero problema al tubo n° 1.p. mezclan suavemente y centrifugar a 1000 r. 5. El título de anticuerpos en el suero problema se determina como el recíproco de la dilución máxima en la que se observa aglutinación. mezclar bien y transferir 0. INTERPRETACIÓN 1. Colocar en una gradilla una serie de 6 tubos rotulados del 1 al 6 y se agregar 0. Se dice que estos anticuerpos se producen de manera “natural” en base a que los inmunógenos son probablemente de origen bacteriano. Alma López García . Se determina realizando a partir del suero problema diluciones seriadas. 4. Agregar 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar. OBJETIVO: Establecer a través de diluciones seriadas el concepto de título aplicado en las reacciones serológicas MATERIAL Suspensión de eritrocitos de grupo A o B al 5 % en SSI Suero (plasma) de grupo O Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Lancetas desechable Aplicadores de madera o palillos Sueros tipificadores anti-A anti-B DESARROLLO: 1. Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación.m. Incubar a 37°C por 15 minutos.1 ml.1 ml al tubo n° 2 y así sucesivamente hasta el tubo n° 6 del cual se desechan 0.

OBJETIVO: Realizar las pruebas de compatibilidad sanguínea denominadas “Pruebas Cruzadas” MATERIAL Y EQUIPO Muestras de sangre con y sin anticoagulante Pipetas graduadas de 1 ml y 5 ml 8 tubos de ensaye de 10 X 75 mm Solución salina isotónica. se realiza mezclando el suero del receptor con los eritrocitos del donador. sobre la base de estos grupos se selecciona la unidad de sangre de grupo ABO y Rh compatible y se procede a efectuar las denominadas pruebas cruzadas mayor y menor.C. la sangre del donador no debe administrase. receptor 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del 15 M. esta sangre no puede darse al receptor porque tiene anticuerpos capaces de reaccionar y destruir la sangre administrada. donador pm/s. Se obtiene una muestra de sangre del donador y receptor y se procede igual a lo descrito en los incisos 1 y 2 de la práctica anterior. La prueba cruzada mayor. En primer lugar. deben determinarse con exactitud los anfígenos de los grupos sanguíneos principales: el grupo ABO y el Rh del paciente. 2. denominada prueba de compatibilidad. En ambas pruebas una suspensión de los eritrocitos respectivos se mezclan con el suero y la mezcla se incuba a 37°C durante unos 30-60 minutos. pero es posible aproximarse mucho si se realizan las pruebas correctas de hemaglutinación. Se agregan a cada tubo los siguientes reactivos en el orden indicado: PM/S. Si se produce hemaglutinación. Por supuesto este objetivo es difícil de lograr. Después del periodo de incubación los eritrocitos se lavan para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. Baño serológico Centrífuga Solución de albúmina bovina al 10% DESARROLLO: 1. y se añade el reactivo de Coombs (anti-globulina).BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 7 PRUEBAS CRUZADAS INTRODUCCIÓN: El objetivo de una transfusión es el proporcionar al paciente (receptor) el tipo preciso de sangre. Se disponen 4 tubos etiquetados como sigue: PM/S =Prueba Mayor en solución salina pm/s =Prueba Menor en solución salina PM/A =Prueba Mayor en albúmina pm/a =Prueba Menor en albúmina 3. los eritrocitos del receptor son incubados con suero del donador y se observa si hay aglutinación. Alma López García . Si se produce hemaglutinación. En la prueba cruzada menor.

5. 16 M. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al 5%) del donador pm/a. En caso de que no se presente la aglutinación. 6. Al paquete celular se le agrega un agota del suero de Coombs y se busca la presencia de hemaglutinación. Se lava el paquete celular de cada tubo con 1 ml de solución salina y se centrifuga nuevamente descartando el sobrenadante. Se centrifugan 1 minuto a 2000 r. será indicativo de que hay incompatibilidad entre el posible donador y el receptor (paciente). los tubos se centrifugan nuevamente y se descarta el sobrenadante. Interpretación: Si hay aglutinación en cualquiera de los tubos. y se busca la presencia de aglutinación.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PM/A. Se mezclan bien y se incuban a 37°C por 30 minutos. las sangres son compatibles. Si no la hay. Repetir el lavado 2 veces.p.m.C. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al 5%) del receptor 4. 7. Alma López García .

continuar con el siguiente paso. MATERIAL Y EQUIPO 1. 5. OBJETIVO: Demostrar en el suero problema anticuerpos contra los antígenos bacterianos.02.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 8 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE INFECCIÓNES BACTERIANAS (REACCIONES FEBRILES) INTRODUCCIÓN: La aglutinación de células bacterianas con antisueros es una de las pruebas serológicas mas antiguas de la inmunología práctica. 4. En la aglutinación de los antígenos bacterianos con sus anticuerpos portaobjetos produce un agregado macroscópico. Muestras de sueros problema Placa de vidrio marcada en 6 cuadros Pipetas graduadas de 1 y 0. Se agrega una gota de cada antígeno comenzando por la izquierda arriba.08 ml del suero problema en cada una de las seis divisiones. Se inició como un método para el diagnóstico de las infecciones bacterianas y fue propuesta por Widal en 1896.C. La pruebas de aglutinación bacteriana tienen dos aplicaciones principales en el diagnóstico. y 0. Se mezclan las gotas con palillos diferentes y se agita suavemente en la placa de rotación durante dos minutos. 0. 0. 4. Alma López García . 7. 3. 5.01. Se toma otra placa y se depositan 0. 6. La lectura se hace observando la aglutinación macroscópica.2 mL Pipeta Pasteur Placa oscilatoria Equipo con antígenos: “O” de Salmonella typhi “H” de Salmonella typhi “H” de Salmonella enteritidis paratyphi A “H” de Salmonella enteritidis paratyphi B Brucella abortus Proteus OX-19 DESARROLLO: 1. 2. Si aparece aglutinación con alguno de los antígenos. Se agrega una gota del antígeno seleccionado. 3. 0. se mezclan con un palillo y se revisa la presencia de aglutinación. mientras se intenta el reconocimiento del agente es posible la identificación serológica. En una placa de vidrio perfectamente limpia se depositan 0. 2. La identificación bacteriológica completa del agente patógeno es un proceso que lleva tiempo (3 o más días). las células bacterianas desconocidas pueden identificarse por medio de anticuerpos conocidos.08. respetando el orden establecido. INTERPRETACIÓN: 17 M. o bien utilizando bacterias conocidas pueden identificarse los anticuerpos en el suero del paciente. 6.005 ml del suero problema.04.

1/40. 3. Alma López García . 2. 4. 1/80.C. El titulo de anticuerpos del suero problema se reporta como el recíproco de la máxima dilución que muestra aglutinación. Los volúmenes de suero empleados corresponden respectivamente a diluciones 1/20. 18 M. La mejor indicación de una infección activa es un aumento en el título de dos determinaciones sucesivas con una diferencia de 5-7 días concomitantes a la infección. La mayoría de los títulos mayores de 160 son presuntivos de infección. 1/160 y 1/320.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 1.

Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador. un anticuerpo antilipídico encontrado en el suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crónicas en otras condiciones aparte de la sífilis. Repita el mismo procedimiento para cada muestra. Suelte para permitir que la pipeta aspire un poco de muestra. OBJETIVO: Demostrar en el suero problema anticuerpos anti-lipídicos de personas con sífilis. 5. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno de RPR. Lámpara DESARROLLO: Procedimiento cualitativo 1.C. Tarjetas de Prueba (círculos de aproximadamente de 18 mm) 3. Si una muestra contiene reaginas. Control Positivo RPR. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. Equipo con antígeno: Suspensión de Antígeno RPR conteniendo micropartículas de carbón activado.2 mL 4. ocurre la floculación con las partículas de carbón contenidas en la suspensión del antígeno. Deseche la pipeta/agitador. la cual aparece como un cúmulo negro. 4. Muestras de sueros problema 2. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. coloque la pipeta dentro de la muestra. los controles y las muestras. extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del círculo. Pipetas graduadas de 1 y 0. 5. NO EXTIENDA! 19 M. Coloque una gota de la suspensión del antígeno sobre cada muestra. Control Negativo RPR. El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que contiene micropartículas de carbón para realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 9 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE INFECCIÓNES BACTERIANAS (Prueba Rápida de Reagina. Al tiempo que oprime y mantiene presionado dicho extremo. MATERIAL Y EQUIPO 1. No limpie la aguja. 3. RPR) INTRODUCCIÓN: La prueba de RPR es una prueba de floculación no treponémica macroscópica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas. Alma López García . Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área. Rotador mecánico 6. 2. Sosténgalo en posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de que el paso por la aguja es correcto.

Extienda sobre el total de la superficie de cada círculo donde se colocaron las diluciones. Ejemplo: Número de tubo 1 2 3 4 Dilución del suero 1:2 1:4 1:8 1:16 Resultado Positivo Positivo Positivo Negativo . exactamente sobre cada una de las gotas de las diluciones anteriores utilizando el frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja No. uniforme pero sin flóculos visibles. INTERPRETACIÓN: Reactivo: Presencia de flóculos grandes o pequeños en el centro o la periferia del círculo de prueba.5 mL del tubo No. Agregar a cada uno de ellos 0. 7.05 mL de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de reacción. 7. 2. Pasar 0. Alma López García . 20 M. Continuar esta operación hasta el tubo No.5 mL de solución salina.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 6. 2 y mezclar. 3. 11. Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente resuspendido. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. 10. 1 al tubo No. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente. 6. El diagnóstico final debe estar en base a la correlación de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clínicos. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa. Se recomiendan pruebas serológicas confirmativas como el ensayo de microhemaglutinación para anticuerpos treponémicos (MHA-TP). Procedimiento cuantitativo 1. 4. 8.C. Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando procedimientos cuantitativos. 5. Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente. 8. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.5 mL de suero problema en el tubo No. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. 1 y mezclar. Débil reactivo: Presencia de flóculos pequeños pero definidos. El título del suero problema será: 1:8. 9. Depositar 0. No reactivo: Apariencia lisa. 4. Depositar 0. 18 sin bisel. Leer el resultado macroscópicamente. INTERPRETACIÓN: La última dilución que contenga agregados macroscópicos indica el título de la muestra.

se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona. Alma López García . Las muestras que son noreactivas pero dudosas.C. Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para pruebas cuantitativas. 21 M. Las muestras de suero que son reactivas en pruebas cualitativas deben ser cuantificadas para establecer un tratamiento en el cual los cambios de título puedan ser determinados como un indicador de la respuesta al mismo. sin el soporte de una historia positiva o evidencia clínica.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LIMITACIONES DE LA PRUEBA El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo único de una prueba no treponémica.

1. sin embargo se encuentra aumentado en la mayoría de los pacientes con artritis reumatoide. Reactivo de latex-FR 7. Alma López García . 22 M. OBJETIVO: Realizar la determinación del Factor Reumatoide y la Proteina C Reactiva por aglutinación en placa. la infección o el estrés. No es específica de una enfermedad sino que es un indicador del proceso inflamatorio. Solución salina isotónica 10. 1. Se coloca una gota de la dilución en la placa de vidrio oscura y se añade una gota del reactivo latex-FR. 5.5 ml del amortiguador para una dilución 1/40 y así consecutivamente. 2. 1/320 y 1/640. MATERIAL Y EQUIPO 1. 1/80. La determinación del factor reumatoide se lleva a cabo con partículas de latex cubiertas de IgG. Pipeta Pasteur 6. 1/160. 3. Proteína C Reactiva (PCR). un conjunto de proteínas del suero cuya concentración aumenta de manera drástica durante el daño tisular. Se mezcla y se agita suavemente en la placa rotatoria durante dos minutos.5 ml de la dilución 1/20 en 0. 1/40. Aplicadores de madera o palillos 5. El suero se inactiva previamente calentando en baño serológico a 56°C por 15 min o 60°C por 1 min. 1/40 con solución salina isotónica y se coloca una gota de la dilución en una placa de vidrio oscuro. Utiliza una suspensión acuosa de partículas de latex recubiertas de anticuerpos específicos anti. Por el método de aglutinación en latex en placa.2 ml 4. Placa de vidrio oscuro marcada 3.1 ml de suero y 1.2 9.9 ml del amortiguador. En personas sanas. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero 1/20.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 10 FACTOR REUMATOIDE Y PROTEINA C REACTIVA INTRODUCCIÓN: Los factores reumatoides son anticuerpos dirigidos contra los determinantes antigénicos de la región Fc de las IgG. utiliza una suspensión estabilizada de partículas de latex sensibilizadas con IgG humana. Placa rotatoria DESARROLLO: Factor Reumatoide (FR). 4. Solución amortiguadora de glicina-cloruro de sodio pH 8. Muestras de sueros 2. La Proteína C Reactiva forma parte de las proteínas de fase aguda. Se busca la aglutinación macroscópica. Reactivo de latex. estos anticuerpos pueden hallarse en baja concentración. Pipetas graduadas de 1 y 0. El suero problema se diluye 1/5. Por el método de aglutinación en latex en placa.C.Proteína C Reactiva.Proteína C Reactiva 8. Ya inactivado se diluye 1:20 con amortiguador de glicinacloruro de sodio colocando 0. las cuales se preparan con 0.

23 M.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 2. Se busca la aglutinación macroscópica.C. 4. Alma López García . Se añade una gota del reactivo latex-PCR se mezcla bien y se agita suavemente en la placa rotatoria por 3 min. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero a partir de 1/80. 3.

25 ml de estreptolisina.7 ml de solución amortiguadora c) 1:500 con 0. Preparar diluciones secundarias añadiendo primero el volumen de solución amortiguadora y posteriormente el volumen del suero diluido según se indica a continuación: Tubos N° ml amortiguado r Dilución ml suero diluido Unidades Todd 1 0. en la cual si el suero del paciente contiene anticuerpos contra la enzima (antiestreptolisinas) neutralizarán su capacidad hemolítica y ocurrirá inhibición de la hemólisis. EXCEPTO al tubo control (-).2 0.C.1 0.8 ml de solución amortiguadora b) 1:100 con 0. 24 M. Preparar a partir del suero problema las siguientes diluciones iniciales: a) 1:10 con 0. 3.6 ml de la dilución 1:100 + 2.2 11 0. destruyen la membrana de los eritrocitos ocasionando la hemólisis.1 0.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 11 DETERMINACIÓN DE ANTIESTREPTOLISINAS INTRODUCCIÓN: Las estreptolisinas son enzimas hemolíticas producidas por la mayoría de los estreptococos del grupo A.2 4 1 5 12 50 10 12 16 25 333 50 62 83 125 0 5 6 0 0 5 3 0 0.4 ml de solución amortiguadora 2.5 0.1 0.5 0.4 (+) (-) 0. 1 2 0. Alma López García .4 0.3 0.3 5 8 --9 10 0.3 0.3 12 0. la estreptolisina O recibe este nombre debido a que sensible al oxígeno.2 0. Mezclar suavemente y añadir a cada tubo 0.3 7 0.1 250 0 --- --- 4. solo posee actividad en estado reducido.7 5 5 1:10 1:100 1:500 0. En el laboratorio las ASO pueden determinarse por una reacción serológica de neutralización. OBJETIVO: Determinar el titulo de anticuerpos contra la estreptolisina “O” en el suero problema MATERIAL Y EQUIPO Muestras de suero Suspensión de eritrocitos al 5% Amortiguador para ASO (fosfatos pH 6.2 ml del suero problema + 1. 4 3 --4 5 6 0.3 ml de la dilución 1:10 + 2. Este producto bacteriano es una de las muchas toxinas extracelulares y enzimas producidas por los estreptococos. 0. Rotular los tubos de ensaye con números del 1 al 12 y dos más como control (+) y control (-). 0. En particular. razón por la cual se le incorpora un reductor (el hidrosulfito de sodio) inmediatamente antes de usarla.5) Estreptolisina O Baño serológico Centrífuga Pipetas graduadas de 1 ml y 5 ml 15 tubos de ensaye de 10 X 75 mm DESARROLLO: 1. 0.4 0.

7.. 6. Mezclar por agitación e incubar a 37°C por 15 min. Alma López García .BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 5. mezclar e incubar a 37°C por 30 min.C. Determinar el título de antiestreptolisinas (unidades Todd) como el de la máxima dilución que no presenta hemólisis. 8. Añadir a cada tubo 0. 25 M.25 ml de una suspensión de eritrocitos al 5%. Centrifugar los tubos a 2500 rpm por 2 min. Comprobar la presencia de hemólisis completa en el tubo control (+) y la ausencia de hemólisis en el tubo control (-) 9.

el suero u orina de la paciente se incuban con el anticuerpo.25 ml de la orina diluida y se agita suavemente. MATERIAL Orina del Paciente (10 ml) Solución salina isotónica (SSI) Equipo de diagnostico de hGC Pipetas serológicas de 1 ml DESARROLLO: 1. el cual requiere de equipo especial para su realización.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 12 DETERMINACIÓN DE LA HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA INTRODUCCIÓN: Las pruebas de laboratorio para el diagnóstico del embarazo se basan en la determinación de la gonadotropina coriónica humana (hGC).p. existen otras técnicas inmunológicas para la determinación de la hGC.C.0 ml de solución salina. las pruebas ulteriores ratas hembra o ranas. más sensibles al detectar concentraciones menores de hGC. Efectuar la lectura 2 horas después. se agregan 0.25 ml de antisuero anti-hGC. Hasta los años 60. OBJETIVO: Determinar la presencia de la hormona Gonadotropina Coriónica Humana en una muestra de orina. Esta técnicas varían en su sensibilidad.m. 4. Si existe hGC en la muestra. Se usa el filtrado o el liquido sobrenadante 2. el anticuerpo permanece activo y se produce la aglutinación. 3. Cuando se realiza la prueba. hormona producida por la placenta y que puede detectarse tanto en el suero como en la orina. Actualmente estas pruebas han sido sustituidas por pruebas inmunológicas. Las primeras pruebas utilizaban ratones y conejos. De preferencia en una gradilla con el espejo adecuado. Se filtran unos 5 ml de orina o se centrifuga a 3000 r. Se colocan en el tubo apropiado 0. Los ensayo de aglutinación denominados de “inhibición de la aglutinación” consisten de eritrocitos de conejo o partículas de látex recubiertas con hGC. 6. 5 minutos para precipitar el material insoluble. 5. Alma López García . Además de la aglutinación. las pruebas de embarazo eran bioensayos en los cuales la presencia de la hGC en el suero o en la orina se demostraba por su efecto en animales. Se agrega una gota de la suspensión de eritrocitos sensibilizados y se agita suavemente hasta lograr una suspensión homogénea. La excreción de hGC alcanza su máximo durante la duodécima a decimocuarta semana de gestación y a partir de entonces desciende de nivel. La presencia de hGC en el suero u orina se demuestra por un sistema indicador. por ejemplo 0. tales como los inmunoensayos enzimáticos (ELISA) y el radioinmunoanálisis (RIA). por ejemplo las pruebas con eritrocitos tienden a ser más sensibles que la que emplean partículas de látex. Si la muestra no contiene hGC.5 ml de orina y 1. Se diluye un volumen de orina en dos volúmenes de solución salina. Las pruebas inmunológicas dependen del anticuerpo anti-hGC. 26 M. el anticuerpo es inactivado y los eritrocitos o partículas de látex no aglutinan. esto es las pruebas inmunológicas son. Se coloca en una superficie libre de vibraciones o del calor.

INTERPRETACION Para la lectura se interpretan los esquemas celulares en el fondo del tubo de ensayo Prueba positiva = un botón claramente definido Prueba negativa = un tapiz difuso de células PRUEBA NEGATIVA PRUEBA POSITIVA 27 M. Alma López García . 4. Tubos diferentes a los apropiados distorsionan la lectura 3.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS RECOMENDACIONES 1. No deben mezclarse los goteros o tocar con ellos los tubos de ensayo.C. Los reactivos deben agregarse en el orden establecido. Los residuos de orinas anteriores falsearan la prueba. 2.

m. y la indirecta que demuestra la presencia de Ac en el suero. En esta practica se empleará para poner de manifiesto los Ac anti-Rh en el suero de la madre en la incompatibilidad materno-fetal.1 ml al tubo n° 2 y así sucesivamente hasta el tubo n° 6 del cual se desechan 0.1 ml de solución salina cada uno de ellos.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 13 PRUEBA DE COOMBS La prueba de Coombs se emplea para poner de manifiesto los anticuerpos que no provocan una aglutinación visible. Para ello se utiliza el llamado suero de Coombs obtenido en conejos inmunizados con Ig humana. Añadir 2 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar. Alma López García . Existen dos Pruebas de Coombs: la directa que demuestra Ac adheridos a eritrocitos.C. MATERIAL Suero problema Suspensión de glóbulos rojos Rh + al 5% Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Suero de Coombs 1. Agregar 0. 5. Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación. 28 M.1 ml. Incubar a 37°C por 30 minutos. Éste funciona como anti-Ig que se enlaza con los Ac que hayan reaccionado con los determinantes antigénicos de los eritrocitos. mezclan suavemente y centrifugar a 1000 r. Colocar en una gradilla una serie de 6 tubos rotulados del 1 al 6 y se agregar 0. 4.p.1 ml del suero problema al tubo n° 1. 2. mezclar bien y transferir 0. 3. Agregar 1 gota del Suero de Coombs. 6. durante 1 minuto.

IVAN. BROSTOFF JONATHAN Y MALE DAVID. IMMUNOLOGY 4ª EDICIÓN. ESPAÑA 7. 4. 29 M. 1998. CHARLES A. 6. MOSBY. REGUEIRO JOSE R. LICHTMAN A. ROITT. IVAN. H. Y TRAVERS PAUL.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS BIBLIOGRAFÍA 1. BROSTOFF JONATHAN Y MALE DAVID. PANAMERICANA. 5. ROITT. 2ª EDICIÓN. Y LOPEZ LARREA CARLOS. ROITT. INTERAMERICANA. IVAN. Y POBER J. EDITORIAL MÉDICA PANAMERICANA.C. 1996. K. S. ROITT. INMUNOLOGIA BIOLOGÍA Y PATOLOGÍA DEL SISTEMA INMUNE. JANEWAY. 8ª EDICIÓN. ABBAS. INMUNOLOGIA 5ª EDICIÓN. 2. IMUNOLOGIA FUNDAMENTOS. ESSENTIAL IMMUNOLOGY. INMUNOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR. EDICIONES HARCOURT. CURRENT BIOLOGY-GARLAND. Alma López García . 2ª EDICIÓN. 3. IVAN. 1994.2000. 1998. BLACKWELL SCIENTIFIC PUBLICATIONS. 3ª EDICIÓN. 1999. A. IMMUNOBIOLOGY THE IMMUNE SYSTEM IN HEALTH AND DISEASE.McGRAW-HILL. 1996. 9ª EDICIÓN.

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