ESCUELA: CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE

SERVICIOS No. 85 “DR JOSE MARÍA LICEAGA”

LUGAR: COATZACOALCOS, VER.
SUBMÓDULO: 3CMICRO “CUANTIFICA MICROORGANISMOS”
PROFESOR: Q.F.B. JESÚS MELESIO ORNELAS MIJANGOS
NOMBRES:
1. CABRERA ARREDONDO LITZI GERALDINE
2. CRUZ CUEVAS KARLA BERENICE
3. GARCÍA ALFONSO LESLY ALONDRA
4. GARCIA PERALTA LUIS FELIPE
5. MONTALVO MERCHANT DIANA DE LOS ÁNGELES
6. TEJEDA DE LA PAZ DULCE MARÍA
7. WONG HERNÁNDEZ LUIS FERNANDO
EQUIPO: 7
GRADO Y GRUPO: 4ALM
ESPECIALIDAD: TÉCNICO LABORATORISTA QUÍMICO
COMPETENCIA PROFESIONAL: COMPETENCIA PROFESIONAL 7. “CUANTIFICA
MICROORGANISMOS VIABLES Y TOTALES POR MÉTODOS INDIRECTOS
PREPARANDO MUESTRAS E INSUMOS EN DIFERENTES PRODUCTOS
SIGUIENDO INSTRUCCIONES Y PROCEDIMIENTOS Y APLICANDO BUENAS
PRÁCTICAS DE LABORATORIO”
TEMA: TRABAJO DE INVESTIGACIÓN DE “MÉTODOS INDIRECTOS PARA
CUANTIFICAR MICROORGANISMOS VIABLES Y TOTALES”
PERIODO SEMESTRAL: FEBRERO 2020-JULIO 2020
FECHA DE ENTREGA: 30/04/2020
 MÉTODOS INDIRECTOS DE CUANTIFICACIÓN DE
MICROORGANISMOS VIABLES.
NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)
El método del Número más probable, también conocido como el método de los
ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones
de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. El método
se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos
específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a
partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una
única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El método
requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo,
en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un
volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y,
pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o
más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras
que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. Al
aumentar el factor de dilución, se alcanza un punto en el que algunos tubos
contendrán tan sólo un microorganismo y otros tubos no contendrán ninguno. Al
calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna célula, se
puede estimar el número más probable de microorganismos presentes en la
muestra original, a partir de una tabla estadística. La precisión del método del
número más probable aumenta con el número de tubos que se usan; cinco tubos
por dilución se consideran como una relación adecuada entre precisión y
economía. Este método se usa para contar microorganismos difíciles de cultivar
en medio sólido, o para determinar el número de células que pueden crecer en un
medio líquido determinado, como el análisis para determinar la contaminación del
agua potable, determinando el número de bacterias Escherichia coli que pueden
crecer en un medio con lactosa. La presencia de E. coli en el agua potable es una
prueba de contaminación. En microbiología, el método se emplea habitualmente
realizando diluciones en serie de un cultivo de bacterias en un medio de
crecimiento, y luego divisiones adicionales en serie hasta obtener partes alícuotas.
Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de
colonias, o el caro y tedioso recuento microscópico. En biología molecular, una
aplicación habitual se da en las plantillas de ADN diluidas para la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR).
MEDIDA DEL ATP
Por medio de la bioluminiscencia se puede detectar la cantidad de ATP presente
en una superficie. Esto se relaciona directamente con la suciedad biológica,
entendiéndose por tal a la constituida por sustancias orgánicas de origen vegetal o
animal, incluyéndose a los microorganismos. Es opinión generalizada que el ATP
es rápidamente destruido luego de la muerte celular por acción de la ATPasa. En
la presente comunicación se publican resultados que ponen en discusión esta
afirmación. Se concluye que, en las condiciones de trabajo descriptas, la
bioluminiscencia es muy sensible para determinar materia orgánica de origen
animado, pero es poco sensible para los microorganismos en particular.
INCORPORACIÓN DE PRECURSORES RADIACTIVOS
Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una población
bacteriana. En esta técnica se adiciona al medio un compuesto marcado
radiactivamente que puede ser incorporado a la célula, y luego se determina la
cantidad de marca incorporada por toda la población.
DETERMINACION DE CO2
La actividad metabólica que realizan los microorganismos en cualquier proceso de
descomposición puede ser cuantificada por medición de la producción de CO2 o
por el consumo de O2 (Alef 1995). El presente estudio tuvo como objetivo
determinar la evolución del CO2 producido por los microorganismos en un suelo
patagónico enmendado con distintas cantidades de lodos de piscicultura y de
salmonicultura lacustre y su relación con la estabilidad de la materia orgánica.

MÉTODOS INDIRECTOS DE CUANTIFICACIÓN DE

MICROORGANISMOS TOTALES.
MÉTODO DE TURBIDEZ
Para algunos experimentos, es necesario estimar turbidez, ya que es una forma
práctica de monitorizar el crecimiento bacteriano. Como una bacteria se multiplica
en un medio líquido, éste se torna turbio o de aspecto nublado por las células. El
instrumento usado para medir la turbiedad es un espectrofotómetro (colorímetro).
En el espectrofotómetro, un haz de luz es transmitido a través de la suspensión
bacteriana a un detector sensible a la luz. Mientras incremente el número de
bacterias, menor será la luz captada por el detector. Este cambio en la luz se
registrará en la escala del instrumento como el porcentaje de transmisión.
También se registra una expresión logarítmica llamada absorbancia (algunas
veces nombrada densidad óptica), un valor derivado del porcentaje de transmisión
que puede ser reportado. Más de un millón de células por mililitro deben estar
presentes para que la primera señal de turbidez sea visible. Aproximadamente de
10 millones a 100 millones de células por mililitro son necesitadas para hacer una
suspensión suficientemente turbia para leer en el espectrofotómetro. La turbidez
no es útil para medir contaminación en líquidos por la pequeña cantidad relativa de
bacterias.
MÉTODO DETERMINACIÓN DEL PESO SECO EN LAS CÉLULAS
Es el método más directo para las mediciones cuantitativas de la masa celular y
probablemente el más fácilmente realizable y reproducible, aunque se debe aplicar
sólo en suspensiones celulares muy densas y las células deben ser lavadas muy
bien para removerles todo material extra. Se utiliza para bacterias filamentosas y
mohos. En este proceso, el fungus es removido del medio de crecimiento, filtrado
para remover material extraño, drenado en un secador y después es pesado.
El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se encuentran
en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105°C
hasta peso constante. Esta técnica es útil para grandes volúmenes de muestra,
debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un
gran número de bacterias.
La desventaja de este método es que componentes volátiles de la célula pueden
perderse por el secado y puede existir alguna degradación. También la muestra
seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente
tiene una humedad relativa alta.
MÉTODO DETERMINACIÓN DEL PESO HÚMEDO
Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la
separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para
grandes volúmenes de muestra.
La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio
intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida
puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy
empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30%
del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular. Para corregir el peso
húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el espacio
intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de
polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio
intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.
Peso seco: El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se
encuentran en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un
horno a 105°C hasta peso constante. Esta técnica es útil para grandes volúmenes
de muestra, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el
peso de un gran número de bacterias.
La desventaja de este método es que componentes volátiles de la célula pueden
perderse por el secado y puede existir alguna degradación. También la muestra
seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente
tiene una humedad relativa alta.
MÉTODOS INDIRECTOS DE DETERMINACIÓN DE LA BIOMASA
Estos métodos se basan funda-mentalmente en la determinación de algún
componente celular específico, en la cuantificación de alguna actividad enzimática
(métodos bioquímicos) o en la medida de consumo de sustrato o de la formación
de algún producto (métodos cinéticos). También se incluyen en este apartado
algunos métodos fisicoquímicos. Los métodos bioquímicos y cinéticos determinan,
más que la viabilidad de las bacterias la actividad ya que dependen más del
estado metabólico de los microorganismos que del número de individuos.
PROTEÍNAS
Existen varias técnicas para el análisis de proteínas totales de una muestra
biológica. Algunos están muy extendidos y se caracterizan por su sensibilidad,
rapidez y simplicidad. Es el caso de las técnicas de Lowry et al. (1951) y Bradford
(1976). La principal desventaja de la de-terminación de proteínas es que su
cantidad en las células está sujeta a fuertes variaciones debido, funda-
mentalmente, a cambios en las condiciones fisicoquímicas y al estado fisiológico
celular.
LÍPIDOS
Los lípidos son un componente fundamental de las membranas celulares. Su
determinación para la estimación de la biomasa de una población bacteriana
ofrece muchas ventajas sobre otros métodos. La principal ventaja es su alto
contenido específico y que se encuentran en cantidades relativamente constantes.
Otra ventaja muy importante es que los lípidos no forman parte de las reservas
celulares y se degradan rápidamente durante la lisis bacteriana.
Aproximadamente, entre un 90-98% de los lípidos de las membranas celulares
está en forma de fosfolípidos (Lazarova y Manem,1995). Las técnicas de análisis
se basan, fundamentalmente, en la extracción celular de los fosfolípidos con un di-
solvente orgánico, su posterior hidrólisis ácida para liberar el fosfato y, por último,
la determinación colorimétrica de éste. Son técnicas relativamente sencillas,
reproducibles y sensibles (de 0,1 a 1 nmol de fosfato; Findlay et al., 1989).
POLISACÁRIDOS
La mayoría de las células procariotas contienen ácido murámico (un
peptidoglicano) como componente de la pared celular. Existen varias técnicas para
la determinación del ácido murámico en mues-tras que contengan
microorganismos. Todas ellas se basan en la con-versión del ácido murámico a
lactato, seguida del análisis enzimático o químico de la concentración de lactato.
El ácido murámico se extrae de las células mediante una hidrólisis alcalina y se
purifica posteriormente mediante cromatografía de intercambio iónico. Otros
aumentar las de ADP y AMP (Uh-linder y White, 1983).
 BIBLIOGRAFÍAS
CABRERA ARREDONDO LITZI GERALDINE

1. Anónimo. (23 de enero del 2013). Medición del crecimiento Microbiano.

29/04/2020, de Google.pdf Sitio web:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_1983
7.pdf
CRUZ CUEVAS KARLA BERENICE

2. Camacho A... (28 de mayo del 2009). Cuenta en placa de bacterias.

29/04/2020, de Microsoft Word Sitio web:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-en-
placa_6527.pdf
GARCÍA ALFONSO LESLY ALONDRA

3. Betty A. Forbes. (2009). Microorganismos Viables. En Diagnostico

Microbiológico (Páginas: 973). Panamá: Editorial Medica Panamericana.
URL: https://books.google.com.mx/books?
id=239cauKqSt0C&pg=PA973&dq=cuantificar+microorganismos+viables+li
bro&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwjxvpjlmr7nAhUCR6wKHZ7vDfIQ6AEIKTAA#v=on
epage&q=cuantificar%20microorganismos%20viables%20libro

4. Paco Camarasa Menor. (2014). Métodos en microbiología. 29/04/2020, de

SlideShare Sitio web: https://www.slideshare.net/gathycat/mtodos-en-
microbiologa
GARCÍA PERALTA LUIS FELIPE

5. ENRIQUE IAÑEZ PAREJA. (17 de agosto de 1998). CRECIMIENTO A

NIVEL DE POBLACIONES. 29/04/2020, de Hipertextos del área de biología
Sitio web: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-
ianez/14_micro.htm
MONTALVO MERCHANT DIANA DE LOS ÁNGELES

6. Ramírez S. (2017). Análisis de técnicas de recuento de Microorganismos.

29/04/2020, de GOOGLE PDF Sitio web: file:///C:/Users/Rub
%C3%AD/Downloads/3665-Texto%20del%20art%C3%ADculo-6051-1-10-
20181029%20(1).pdf
TEJEDA DE LA PAZ DULCE MARÍA

7. Bertha Olivia Arredondo-Vega. (2007). CONCENTRACIÓN, RECUENTO

CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO. 29/04/2020, de ResearchGate Sitio
web:
https://www.researchgate.net/publication/253237563_CONCENTRACION_
RECUENTO_CELULAR_Y_TASA_DE_CRECIMIENTO

WONG HERNÁNDEZ LUIS FERNANDO

8. Anónimo. (2008). RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES. 29/04/2020, de

StuDocu Sitio web: https://www.studocu.com/es-mx/document/instituto-
tecnologico-de-queretaro/quimica/practicas/recuento-de-celulas-
viables/3056381/view