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Centro de Gestión Industrial


Asegurar la calidad de los ensayos desarrollados en el laboratorio

Alexis Fonseca

DETERMINACIÓN DE AZÙCARES PARTIENDO DEL METODO DE MILLER (DNS)


MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÌA VISIBLE.

1. RESUMEN

El siguiente informe describe el paso a paso que se debe seguir para desarrollar el método del ácido 3,5
dinitro salicílico (DNS), partiendo de una solución patrón de glucosa 0,1g/0,1L, donde se pudo realizar,
analizar y ajustar una curva de calibración y una muestra problema.

ABSTRACT

The following report describes the step to be followed to develop the method of dinitro salicylic acid 3.5
(DNS), based on a pattern of glucose 0.1g / 0.1L solution, which could be performed, analyze and adjust a
calibration curve and a test sample.

2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL

 Determinar la cantidad de azúcares presentes en el zumo de naranja por medio del método de
(DNS).

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Establecer la longitud de onda de la máxima absorción para las diferentes soluciones preparadas.
 Conocer y aplicar los principios de la curva patrón aplicada a la cuantificación de azúcares
reductores con el reactivo (DNS).
 Cuantificar los azúcares reductores presentes en la naranja.

3. INTRODUCCIÓN

Hoy en día es muy importante saber el contenido de azúcares y demás compuestos de un analito, para
esto existen diferentes tipos de métodos analíticos, uno de los màs acordes y con buenos resultados de
azùcares como reductores, es el mètodo (DNS), dicho mètodo se basa en una reacciòn redox que pasa
entre los azùcares reductores y el DNS presentes en una muestra.
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4. MATERIALES, INSTRUMENTOS Y REACTIVOS

 Balón aforado de 500 mL


 Pipetas aforadas 5, 10 mL
 Vasos de precipitados 50, 250 mL
 Matraz Erlenmeyer 100 mL
 Pipetas 1, 2, 3, 4, 5, 10 mL
 Vidrio de reloj
 Tubos de ensayo
 Balanza analítica
 Plancha de calentamiento con agitación
 Espectrofotómetro UV 1800 SHIMADZU
 Glucosa grado analítico
 Hidróxido de sodio
 Tartrato de sodio – potasio
 Ácido 3,5 dinitro salicílico
 Ácido clorhídrico concentrado

5. TABLAS DE DATOS

Tabla 1: Tabla de estándares para la curva de calibración:

En la tabla se muestra que se utilizó una solución patrón de glucosa 0,1g/L, agua, más el DNS y de allí las
cantidades necesarias para la preparación de la curva, tomando el blanco como punto de referencia para
la toma de la absorbancia del espectrofotómetro.

SOLUCIÒN BLANCO 1 2 3 4 5
Vol. Solución 0 1 2 3 4 5
glucosa 0,1%
(ml)
Volumen 0 0 0 0 0 0
Muestra (ml)
Volumen agua 10 9 8 7 6 5
(ml)
Volumen total 10 10 10 10 10 10
(ml)

Tabla 2: Tabla de datos para la construcción de la curva.


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Para la construcción de la curva es necesario saber las concentraciones reales de todas las soluciones.
Para hallar esta concentración se usó la siguiente ecuación:

V1 C1 = V2 C2

De esta ecuación despejamos C2, obteniendo así:

SOLUCIÓN CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA

BLANCO 0 0

1 10 0,2386

2 20 0,6099

3 30 0,9628

4 40 1,2984

5 50 1,7181

Tabla 3: Tabla de datos de la absorbancia tomados para las muestras.

Para el análisis de la muestra es necesario realizar diluciones ya que los azúcares están muy
concentrados y obtendríamos resultados que no se ajustarían a la curva.

Las dos diluciones realizadas para la muestra fueron 10:100 y de la diluida 10:100.

 10:100 Por 10 ml muestra, se agregaron 90 ml de agua.


 10:100 Por 10 ml de la solución ya diluida, se agregaron 90 ml de agua.

MUESTRA CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA


1 - -
2 34,789 1,147

6. CÁLCULOS Y RESULTADOS
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Con la tabla 2 se obtiene la siguiente gráfica que relaciona la señal transmitida a diferentes
concentraciones.

2.0000
1.8000
1.6000 f(x) = 0.03 x
1.4000 R² = 1
ABSORBANCIA

1.2000
1.0000
0.8000
0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
0.0000 10.0000 20.0000 30.0000 40.0000 50.0000 60.0000
CONCENTRACIÒN (mg/l)

Se realizó una curva de tendencia lineal en donde se encontraron datos de un coeficiente de correlación
mayor al 0, 95 demostrando poca dispersión en los datos y por lo tanto son aceptables.
Para los análisis de la muestra, se compararon los resultados con información obtenida en módulos de
nutrición dietética.
FACTORES MUESTRA 1 MUESTRA 2
Volumen solución (ml) 4 4
Volumen DNS (ml) 1 1
Volumen total (ml) 5 5
Absorbancia a (540nm) - 1,147

Y por medio del factor de dilución podemos saber cuál es el contenido de azúcares en los 10 ml de la
disolución:
34,789 * 10 = 347,89mg/l / 1000mg = 0,34789 g
De allí convertir a gramos para saber si la concentración se acerca al dato real.
V = 10 ml
D = 1,0506 g/ml
m = 10 * 1,0506 g/ml = 10,506 g
Con los valores hallados podemos hallar el contenido de azúcares reductores en la muestra haciendo una
regla tres sencilla.
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0,34789 g (muestra) 10,506 g

X 100 g
X = 3.3113 g

ANÀLISIS DE RESULTADOS

De los datos obtenidos en las tablas se puede observar que luego de realizar la curva de calibración se
realizaron dos análisis a las muestras, donde en una de ellas al realizar la medición en el
espectrofotómetro no arrojó ningún dato ya que como lo mencionábamos anteriormente se debían
hacer diluciones para evitar que el valor de la concentración y de la señal cayeran fuera de la curva, al no
quedar bien diluido se evidencia que el resultado queda fuera de la curva; el análisis restante nos da
valores muy cercano a lo real , comparándolos con bibliografía de la de nutrición se concluye que los
datos son cercanos pero no muy confiables para esto los resultados pueden ser alterados por las
características de madurez de la naranja analizada , en donde vemos que por cada 100 g de naranja el
contenido de azúcares reductores es de 4,75 g mientras el obtenido fue de 3,3113 g fijando así un valor
aceptable por las condiciones de la fruta.

CONCLUSIONES

En el espectrofotómetro se logra realizar el ajuste de los parámetros para su debida medida, entre ellos
la longitud de onda adecuada.
Con esta práctica se pudo determinar de manera cuantitativa la concentración de azúcares reductores
por medio de la curva de calibración, obteniendo una tendencia lineal que se ajustó a los datos de la
muestra, tomando como base que el margen de error es mínimo teniendo un coeficiente de correlación
de 0,9955.
Los resultados hallados en el zumo de la fruta nos arrojaron que el contenido de azúcares reductores fue
de un 3,3113g, bajo contenido, pero al hacer un recuento de los posibles errores en el método hay que
considerar que el estado de madurez de la naranja no era el mismo con el que se comparó.

7. BIBLIOGRAFIA
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Alexis Fonseca

1) DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES DNS. (En línea).


http://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARES_REDUCTORES_METODO_
DNS
2) DIETA Y NUTRICIÓN. ((en línea). http://www.dietaynutricion.net/tema/informacion-nutricional/
3) DETERMINACCIÒN DE AZUCARES REDUCTOORES. (En línea).
http://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-espectrofotometra-
mtodo-dns