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absorción ultravioleta.
Gerson Hernandez (1644131) Isabel Cristina Santiago (1730777); Duvan Ibarguen (1731706.)
Departamento de Química, Universidad del Valle.
Fecha de Realización de la práctica: Junio 15 2019
Fecha de Entrega: Julio 24 de 2019
Resumen
En la práctica se llevó a cabo la cuantificación de acetaminofén a partir de una dosis comercial de 500 mg proveniente
del laboratorio GENFAR por medio de la espectrometría de absorción ultravioleta, empleando el método de patrón
externo donde se obtuvo una concentración del principio activo de 507,679 ± 0,027 mg con un porcentaje de error de
1,54% y el método de adición estándar dando como resultado 425,124 mg de acetaminofén con un porcentaje de error
de 14,98%.
Datos y Cálculos.
Se realizó la cuantificación de acetaminofén en una pastilla marca Genfar que contiene según la etiqueta 500 mg de
acetaminofén. Se utilizaron 2 métodos patrón externo y adición estándar los cálculos se muestran a continuación.
1. PATRÓN EXTERNO.
Se preparó una solución patrón de acetaminofén grado analítico a partir de 20,7 mg pesados en la balanza analítica
se disolvió en 5mL de metanol y se llevó a un volumen de 100 mL en un balón aforado con agua destilada. La
concentración del patrón en ppm fue de 207 ppm como lo muestra la Ecu 1.
A partir del patrón anterior se preparó una curva de calibración de 5 puntos a concentraciones de 4.00, 8.00, 12.00,
16.00 y 24.00 ppm realizando una dilución del patrón concentrado teniendo en cuenta la ecuación 2 se determinó el
volumen que se requería del patrón para llegar a la concentración requerida.
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2 Ecu 2
4.00𝑝𝑝𝑚 ∗ 0.05𝐿
𝑉1 = = 1,966 𝑚𝐿
207𝑝𝑝𝑚
1
Se realizó el mismo cálculo para las concentraciones restantes y los resultados se presentan en la tabla 1.
Debido a que los volúmenes calculados teóricamente son imposibles de tomar experimentalmente, se realizó una
aproximación la cual se presenta en la tabla 1 y se recalculo las concentraciones nuevamente así:
1𝐿 207 𝑚𝑔 1
1 𝑚𝐿 ∗ ∗ ∗ = 4,14 𝑝𝑝𝑚
1000 𝑚𝐿 𝐿 𝑠𝑙𝑛 0,05𝐿
Se realizó exactamente el mismo cálculo para los volúmenes tomados 2.00, 3.00, 4.00 y 5.00 de la solución patrón y
se corrigieron las concentraciones (ver tabla 1).
Para la preparación de la muestra se maceraron 2 tabletas de acetaminofén que pesaron 1112.0 mg y se calculó la
cantidad de macerado de pastilla necesario que fuese equivalente a 20 mg de acetaminofén teniendo en cuenta que
cada pastilla contiene la 500 mg de este principio activo el cálculo que se realizo es:
1112.0 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑠𝑡𝑖𝑙𝑙𝑎
20 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛 ∗ = 22,24 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑠𝑡𝑖𝑙𝑙𝑎
1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
Experimentalmente se pesaron 22.5 mg de pastillas macerada lo que conlleva a tener 20,2 mg de acetaminofén
como se puede apreciar.
1000 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
22.5 𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑠𝑡𝑖𝑙𝑙𝑎 ∗ = 20,2 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
1112.0 𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑠𝑡𝑖𝑙𝑙𝑎
2
Posteriormente se disolvieron en 5mL de metanol y se llevó a ultrasonidos por 15 min para completa disolución, se
aforo esta solución en un balón de 100 mL con agua destilada y se tomó una alícuota de 3 mL de esta solución la cual
se diluyo a un volumen de 50 mL.
Posteriormente se procedió a medir la absorbancia de las 5 soluciones estándar preparadas y la de la muestra diluida
en un espectrofotómetro de ultravioleta visible obteniendo los siguientes resultados.
Se seleccionó la longitud de máxima absorbancia de la molécula de acetaminofén realizando un barrido de 800 a 200
nm donde se obtuvo como resultado que la longitud de onda máxima de absorbancia del compuesto es a 243 nm tal
y como lo muestra la fig. 1 y la tabla 2.
3
Teniendo ya la longitud de onda máxima de absorbancia se procedió a configurar el equipo a esta longitud de onda y
a realizar la curva de calibración midiendo la absorbancia de los 5 patrones preparados y de la muestra diluida. A
partir de los datos de la tabla 3 se obtiene la curva de calibración de la fig 2.
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15 20 25
ppm
Fig 2. Curva de calibración para la determinación de acetaminofén por el método patrón externo.
Con la ayuda del programa Excel se procedió a realizar la estadística de la Ecu 3 de regresión lineal que se
encuentran en la tabla 4.
4
Tabla 3. Estadística de la regresión por patrón externo.
ESTADISTÍCA DE LA REGRESIÓN
PENDIENTE (b) 0,0771
INTERCEPTO (a) -0,1137
ERROR DE LA PENDIENTE 0,007043192
ERROR DEL INTERCEPTO 0,096708843
ERRORES ALEATORIOS EN DIRECCIÓN 0,286159684
Y (Sy/x)
DESVIACIÓN ESTANDAR DE LA 0,004209181
PENDIENTE (Sa)
DESVIACIÓN ESTANDAR DEL 0,057795534
INTERCEPTO (Sb)
R2 0,9756
LD 0,059686602 ppm
LC 0,46425534 ppm
A partir de la Ecu 3 y teniendo en cuenta que el analito dio unas señales de 0.8351, 0.8351 y 0.8356 ya que se hizo
por triplicado se realizó el siguiente cálculo para las tres mediciones.
0,8351 + 0,1137
𝑥= = 12,305 𝑝𝑝𝑚
0,0771
Teniendo en cuenta que la solución de la muestra se diluyo en 100 mL y de ahí se tomó una alícuota de 3 mL Lo cual
se diluyo nuevamente en 50 mL la cantidad de acetaminofén en la solución es:
Se realizó exactamente el mismo cálculo para la señal de 0.8356 obteniendo una concentración de 12,313 ppm y:
La desviación estándar de las medidas (507.673,507.673 y 507.962)mg de acetaminofén por tableta se encuentra
con la ecuación 5 teniendo en cuenta que el promedio de las 3 mediciones de mg de acetaminofén por tableta es
507,679
Ecu 5
5
Se realizó el cálculo anterior con el programa de Excel y se encontró que la desviación estándar del resultado es
0,0110
Ecu 5
Donde:
n= número de datos=3
4,303−1 ∗0,0110
507,679 ± = 507,679±0,027 mg de acetaminofén por tableta
√3
Lo cual indica que el valor verdadero de la concentración del analito en estudio estará entre 507.652 y 507.706 mg
de acetaminofén por tableta para una distribución normal con un 95% de confianza y suponiendo que no existe la
presencia de errores sistemáticos.
2. ADICIÓN ESTANDAR.
Para el método de adiciones estándar se prepararon 5 puntos para la curva los cuales contenía 0,5 mL de la muestra
diluida descrita en el numeral 1. El estándar 1 era el blanco mientras que los estándares 2,3,4 y 5 se le adicionaron
0.5,1.0,2.0,3.0 del patrón preparado de acetaminofén grado analito a concentración de 207 ppm finalmente se
diluyeron con agua a un volumen de 25 mL cada uno.
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15 20 25 30
ppm
Fig 3. Curva de calibración para la cuantificación de acetaminofén por el método de adición estándar.
7
Tabla 5. Estadística de la regresión por el método de adición estándar.
Estadística de la regresión
PENDIENTE (b) 0,0621
INTERCEPTO (a) 0,0128
ERROR DE LA PENDIENTE 0,001020065
ERROR DEL INTERCEPTO 0,014258723
ERRORES ALEATORIOS EN 0,020352799
DIRECCIÓN Y (Sy/x)
DESVIACIÓN ESTANDAR 0,001020657
DE LA PENDIENTE (Sa)
DESVIACIÓN ESTANDAR 0,014266997
DEL INTERCEPTO (Sb)
R2 0,9992
LD 0,055600991 ppm
LC 0,155469971 ppm
−0,0128
= |−0,2061| = 0,2061𝑝𝑝𝑚
0,0621
La desviación estándar Sxe se encuentra a partir de la Ecu 7 con ayuda del programa Excel.
Ecu 7
Para el método usado no se pudo encontrar el intervalo de confianza debido a que no se hizo triplicado de las
mediciones de los patrones.
Con el fin de determinar si hay evidencia de efecto matriz se realizó una prueba F aplicando la Ecu X:
8
𝑆𝑏𝐶𝐸 2 0,0042091812
𝐹= = = 17,007
𝑆𝑏𝐴𝐸 2 0,0010206572
Los grados de libertad para el numerador y denominador son 4 y 3 respectivamente el valor de Ftab es 6,591 como
Fcal>Ftab se rechaza la hipótesis nula y se acepta la hipótesis alterna por tanto las pendientes son estadísticamente
diferentes y hay efecto matriz.
9
Fig 5. Estructura química del Paracetamol
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estándar) es normal que su % de error sea menor y analítica frente a la concentración de la especie a
por lo tanto sea más conveniente usarlo en determinar) y causando interferencia para la
espectrofotometría de absorción5. determinación del analito (acetaminofén). En la
maceración de la muestra de 2 tabletas de
Entre los dos métodos utilizados hubo una acetaminofén que pesaron 1112.0 mg y que en
diferencia entre las pendientes de calibrado lo cual teoría solamente contenían 1000 mg de
se traduce en un efecto de matriz. Este efecto acetaminofén dejando así 112 mg restantes que
tiene lugar por componentes de la muestra actuaron como posibles contaminantes e
diferentes al analito y especies que la rodean, interferentes a la hora de la determinación de
afectando la sensibilidad (variación de la señal acetaminofén.
11
espectral de los analitos no han cambiado en ese Referencias.
tiempo. (1) facultad de ciencias quimicas. Univ. Auton.
Chihuaha 1998.
R// ¿Para qué sirve este tipo de curva? (2) Espectroscopia UV-Visible.
(3) Grupos cromóforos y auxocromos
Este tipo de curva sirve para observar el https://www.quimicaorganica.org/espect
comportamiento del fármaco a lo largo del tiempo roscopia-visible-ultraviolata/735-grupos-
(si se degrada o no) lo que llevaría a una variación cromoforos-y-auxocromos.html (accessed
Jul 23, 2019).
de las absorbancias y como consecuencia que el
(4) Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J.;
análisis varié y los resultados no sean del todo Berenguer Navarro, V. Fundamentos de
confiables. química analítica; Reverté , 1997.
(5) Davis, J. E. Manual de laboratorio : para
Conclusiones. química: experimentos y teorías; Reverté ,
1975.
La espectrofotometría uv-visible se basa en
la medición de absorción de radiación UV o
visible por determinadas moléculas, la
radiación correspondiente a estas regiones
del espectro electromagnético causa
transiciones electrónicas a longitudes de
onda característica de la estructura
molecular de un compuesto.
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