Determinación Cuantitativa de Proteínas.

Yáñez K. Julieth y Barinas J. Karen

(1) Universidad del Cauca, Facultad de Ingeniería Civil, Programa de Ingeniería Ambiental,
Popayán, Cauca, Colombia.
(e-mail: juliethya@unicauca.edu.co; karbarinas@unicauca.edu.co)
Grupo: 9
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1. Resumen.
La espectrofotometría es una técnica analítica que permite determinar la concentración de
un compuesto en solución, en este caso de la proteína albumina bovina en diferentes
muestras problema. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro.

La Transmitancia (T) es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector
una vez que ha atravesado la muestra y la cantidad de luz que incidió sobre ella, y se
representa normalmente en %.

La absorbancia(A) indica la cantidad de luz absorbida por la misma.

2. Cálculos y Resultados
En el desarrollo de la práctica 4, Debido a que los valores determinados
Determinación Cuantitativa de Proteínas, están expresados en Transmitancia es
se obtuvieron los siguientes resultados: necesario dejarlos en términos de
Absorbancia de la siguiente manera:
Tabla 1. Registro del valor de
Transmitancia

Muestra Transmitancia 100

A=log
Blanco 0 0 0 T
1 42.6 42.7 42.7
2 29.1 29.1 29.1 Ecuación 1.
3 25.6 25.7 25.6 Una vez obtenemos la absorbancia
4 14.3 14.3 14.3 procedemos a sacar el promedio de cada
5 12.4 12.3 12.3
muestra debido a que se realizaron 3
6 8.9 8.8 8.7
ensayos por cada una obteniendo:
7 4.5 4.5 4.4
8 3.7 3.6 3.6
MP1 71.9 72.0 71.9
MP2 62.5 62.5 62.6
MP3 49.5 49.1 49.1
Tabla 2. Registro del valor de Transmitancia y absorbancia para las muestras de trabajo.

Muestra Agua Albumina Transmitancia Absorbancia Concentración

(mL) (mL) (nm) (nm) (ppm)
Blanco 2.0 0.0 0 0,00 0,00
2 1.75 0.25 42.66 0,3700 125,00
3 1.50 0.50 29.1 0,5361 250,00
4 1.25 0.75 25.63 0,5913 375,00
5 1.00 1.00 14.3 0,8447 500,00
6 0.75 1.25 12.3 0,9101 625,00
7 0.50 1.50 8.8 1,0555 750,00
8 0.25 1.75 4.46 1,3507 875,00
9 0.00 2.00 3.63 1,4401 1000,00

Hallamos la concentración de la proteína (albumina) en partes por millón de la solución

patrón:
0.05 g
∗1000 mL
50 mL
∗1000 mg
1L
=1000 ppm
1g
Ecuación 2. Ecuación de conversión
A continuación, se halla la concentración de albumina en la disolución con agua de cada
tubo de ensayo, para ello se emplea la ecuación de la dilución (la concentración que se va a
calcular es la concentración 2):
C 1∗V 1=C 2∗V 2
Ecuación 3. Ecuación de Dilución
Una vez despejada la fórmula 3, se utiliza el valor hallado con la ecuación 2 para hallar la
segunda concentración, por ejemplo:
1∗V 1
C 2=C
V2

1000 ppm∗( 0.25 mL ) PATRON

C 2= =125 ppm
(1.75 mL+0.25 mL) ALICUOTA
 A continuación, se forma una gráfica de Concentración vs Absorbancia para ello se
aplica el método de mínimos cuadrados que consiste en aplicar la siguiente ecuación
para hallar la pendiente y el punto de intercepto:

Ecuación 4. Mínimos Cuadrados

Una vez hallados estos dos valores se procede a utilizar la ecuación de la recta para
hallar la nueva variable Y; es decir, conservamos la concentración y utilizamos la
nueva variable de absorbancia para obtener, por lo tanto:
6510,9094
81 =0,0012
m=
4
5250000

995920,20
53 =0,1896
b=
99
5250000

Y a su vez nuevas variables:

Concentración Absorbancia
(ppm) (nm)
125,00 0,3447
250,00 0,4997
375,00 0,6548
500,00 0,8098
625,00 0,9648
750,00 1,1198
875,00 1,2749
1000,00 1,4299

Tabla 3. Nuevas variables de gráfica linealizada

3. Preguntas Complementarias
3.1 Realice el grafico de la curva de calibración y determine su linealidad.

Gráfica 1. Concentración vs Absorbancia

Concentración (ppm) vs Ab-

sorbancia (nm)
1.6000
1.4000
f(x) = 0.00124017323447979 x + 0.189699086719311
R² = 0.980386600099962
1.2000
1.0000
0.8000
0.6000
0.4000
0.2000
0.0000
0.00 200.00 400.00 600.00 800.00 1000.00 1200.00

Gráfica 2. Linealización Concentración vs Absorbancia

Absorbancia (nm)
1.6000

1.4000
f(x) = 0.00124017323447979 x + 0.189699086719313
1.2000 R² = 1

1.0000

0.8000

0.6000

0.4000

0.2000

0.0000
0.00 200.00 400.00 600.00 800.00 1000.00 1200.00
 3.2 Determinar las concentraciones de las muestras problemas en función de la
curva de calibración.

Los datos de absorbancia tomados, y las MP1, MP2, MP3, se encuentran previamente
diluidos, sin embargo, se desconoce su concentración, y para hallarla se utiliza la ecuación
de la recta :
Y = mx + b
Ecuación 4. Ecuación de la recta
Se despeja para hallar la concentración de cada muestra problema de la siguiente manera:
Y = 0,0012x + 0,1897
Muestra problema 1
0.3700 = 0.0012x + 0.1897
(0.3700 – 0.1897) / 0.0012 = x
X = 150,25
Muestra Problema 2
0.3078 = 0.0012x + 0.1897
(0.3078 – 0.1897) / 0.0012= x
X = 98.41
Muestra problema 3
0.2032 = 0.0012x + 0.1897
(0.2032 – 0.1897) / 0.0012 = x
X = 11.25

3.3 ¿Qué información aporta el coeficiente de correlación (R2) de su curva? ¿es

confiable el valor obtenidos de su R2?

La correlación, también conocida como coeficiente de correlación lineal (de Pearson), es

una medida de regresión que pretende cuantificar el grado de variación conjunta entre dos
variables.

Por tanto, es una medida estadística que cuantifica la dependencia lineal entre dos
variables, es decir, si se representan en un diagrama de dispersión los valores que toman
dos variables, el coeficiente de correlación lineal señalará lo bien o lo mal que el conjunto
de puntos representados se aproxima a una recta. Fuente: (Álvarez, 2007)
Teniendo en cuenta el valor del coeficiente de correlación de 98,04 por ciento de
dependencia lineal entre las variables, se podría decir que tiene un valor de confianza
óptimo.

4. Análisis
Tabla 4. Datos y resultados de las muestras problema
Muestra Agua Albumina Transmitancia Absorbancia Concentración
(mL) (mL) (nm) (nm) (ppm)
MP1 5 1.0 49.23 0,3700 150.25
MP2 10 1.0 62.63 0,3078 98.41
MP3 25 1.0 71.93 0,2032 11,25

Debido a los porcentajes obtenidos en la correlación lineal, es necesario aclarar lo

confiables que son los datos, esto es un reflejo de la buena coordinación que tuvo el grupo a
la hora de realizar el laboratorio, además se puede decir que a pesar de la complejidad que
implica la cuantificación de proteínas, este método ha demostrado que cumple bien la
función de cuantificación para estos casos. Y por supuesto ratificar que el estudio de las
proteína ha sido muy importante para el avance en las industrias como en este caso lo es la
proteína Albúmina Sérica Bovina o BSA. (Bovine Serum Albumine).

Ya que es una proteína globular aislada del suero bovino que se utiliza en numerosas
aplicaciones bioquímicas debido a su estabilidad y falta de interferencia en las reacciones
biológicas; algunos de sus usos son: Reactivo de bancos de sangre, medio de cultivos
microbianos y celulares, inmunoensayos (western blot), suplemento proteico, serología,
amplificador de señal en ensayos bioquímicos, estabilizador de enzimas y proteínas
solubles, excipiente en la industria farmacéutica, proteína estándar en el método Bradford,
elaboración de productos veterinarios. Fuente: (Antonio del Viso 296, Córdoba,
Argentina)

5. Conclusiones
Los resultados obtenidos en la práctica fueron acertados debido a que la concentración de
las muestras problema uno, dos y tres (que fueron calculadas) se ajustan a los valores
esperados según su grado de dilución, de igual manera, y según los resultados del
espectrofotómetro, la concentración de la muestra en los tubos de ensayo 1 a 9 es
ascendente lo cual refleja la sincronización de resultados como se lo esperaba.

6. Bibliografía

Álvarez, 2007. Estadistica aplicada a las ciencias de la salud. Madrid España.

Antonio del Viso 296, Córdoba, Argentina. https://www.dsflab.com.ar/albumina-bovina