TÉCNICAS GENERALES DE LABORATORIO

PROBLEMAS DE ESPECTROFOTOMETRÍA

Transformar los siguientes valores de transmitancia en absorbancia:

a. 0,10
b. 0,235
c. 0,583

Transformar los siguientes valores, en tanto por ciento, de transmitancia en valores de

absorbancia:
d. 10,0 %
e. 58,3%
f. 0,10%

El permanganato potásico exhibe a 524 nm una absortividad de 25000 L/mol × cm. Una
solución de MnO4K presenta una transmitancia de 0,95 cuando dicho valor se determina en
cubetas de 1 cm de espesor.
g. ¿Cuál es la concentración molar de MnO4K en la solución?
h. ¿cuál es la concentración en mg/dl? Pm: 158 g/mol
i. Si el solvente es agua, ¿cuál es la concentración de la solución expresada en %
de peso en peso (p/p).

¿Cuál es la concentración (mM) de una solución de NADH (coeficiente de absorción molar a

340 nm igual a 6220 M-1 cm-1), 1 mL de la cual tiene una absorbancia de 0,16 en una cubeta
de 1 cm de paso óptico?

A = € × b × c ; 0,16 = 6220 × 1 × c ; C = 2,6 × 10 -5 M ; C = 0,026 mM

¿Cuántos µmoles de NADH hay en 10 mL de una solución que tiene una absorbancia de 0,31 a
340 nm?

A = € × b × c ; 0,31 = 6220 × 1 × c ; c= 4,9 × 10 -5 M ; c = 49,8 µM

49,8 µmoles ---------------------- 1000 mL

X µmoles --------------------------- 10 mL

X = 0,5 µmoles
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Una solución que se encuentra en una cubeta de 1 cm de espesor contiene 2 g/L de una
sustancia que transmite sólo el 75 % de la luz incidente a una determinada longitud de onda.
Calcular la absorbancia de una solución que contenga 4 g/L. Si el peso molecular del
compuesto es 250, calcule el coeficiente de absorción molar.

A = 2 – log T(%) ; A= 2 – log 75 ; A = 0,125

A (0,125) --------------------- C (2 g/L)

A (¿) --------------------------- C (4 g/L ) A= 0,25.

El % de transmitancia de una solución medida a cierta longitud de onda en una celda de 1,00
cm es de 63,5% . Calcule el % de transmitancia de esta solución en celdas de trayectoria optica
de A) 2,0 mm ; b) 2 ,0 cm y c) 5,00 cm .

R: a) 91,3 %T ; b) 39,8 %T ; c) 10,3 %T

Solución b)

Dado que ε y c son mantienen el mismo valor:

A1 / b1 = A2 / b2;

A1 = 2 – logT ; A1 = 2 – log 63,5 ; A1 = 0,197

0,197 / 1 cm = A2 / 2 cm ; A2 = 0,394

0,394 = 2 – logT ; -1,6 = - log T ; T = 39,8%

El compuesto orgánico 3-ciano-5- metilpirrolina ( C7H6N2 , PM :118,14 g/mol) presenta una

banda de absorción UV en 272 nm en solución de etanol. Una solución que contiene 0,274 mg
de este compuesto en 10 ml de etanol dio una absorbancia de 0,700 en una celda de 1,00 cm.
Calcule: a) la absortibilidad , b) la absortibilidad molar del compuesto

R: a) a = 25,9 L/g cm b) ε = 3043,5 L/mol cm

a/ A = a b c

0,274 mg/ 10 ml ----------→ 2,7× 10-2 g/L

0,700 = a ×1 cm× 2,7 ×10-2 g/L ; a = 25,9 L/g cm

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b/ A = ε ×b×c

2,7× 10-2 g/L / 118,14 g/mol = 2,3 ×10-4 moles/L

0,700 = ε×1 cm × 2,3 ×10-4 moles/L ; ε= 3043,4 L/mol cm

La adenina es una de las cinco bases nitrogenadas que forman parte de los ácidos
nucleicos (ADN y ARN) y tiene una absortividad molar de 13.100 L/cm*mol, a una
longitud de onda de 263 nm. Calcule la concentración molar de una solución de
adenina, que presenta un porcentaje de transmitancia del 75% cuando 2 mL de la
solución, son colocados en una celda de 1 cm. R: 9,54 x10-6 M.

A=ɛbc

A = 2 – log T A = 2 -log 75 A = 0,1249

A = 13100 × 1 × C

C = 9,54 x10-6 M.

Una disolución 15 mM de un colorante azul tiene una absorbancia de 0.600. ¿Cuál es la

concentración de una muestra del mismo colorante cuya absorbancia es 0.400? Dato:
el trayecto óptico es de 1 cm.

Este problema puede resolverse de dos formas diferentes:

Método 1

Puesto que A = ɛ b c, y que ɛ y b son constantes:

A1 / c1 = A2 / c2

0,600 / 15 mM = 0,400 / c2 c2 = 10 mM.

Método 2: calculando la absortividad molar

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A=ɛbc

0,600 = ɛ × 1cm × 15 mM ɛ = 0,04 mM-1 cm-1

Aplicándolo a la disolución problema:

A=ɛbc 0,400 = 0,04 mM-1 cm-1 × 1cm × c

c = 10 mM.

Una solución 1,28 x 10-4 M de permanganato de potasio tiene una transmitancia de 0,5
a una longitud de onda de 525 nm usando una celda de 1cm. a) Determina la
absorbancia de la solución. b) Si la concentración es el doble, ¿cuál será la absorbancia
y la transmitancia.

a/ A = - logT ; A = -log 0,5 ; A = 0,301

b/ Puesto que A = ɛ b c, y que ɛ y b son constantes:

A1 / C1 = A2 / C2

0,301 / 1,28 x 10-4 = A2 / 2,56 x 10-4 A2 = 0,602

A = - logT 0,602 = -log T T = 0,25 ( en la calculadora: -0,602 inversa log)

PROBLEMAS CON RECTA DE CALIBRADO

Construir la curva de calibración para una técnica de determinación de glucosa en suero con los
siguientes datos:

Concentración de glucosa (mg/dl) Absorbancia

50 0,050

100 0,100
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150 0,150

250 0,250

500 0,500

A partir de ella:

a. Calcular la concentración de glucosa en un suero que da una lectura de 0,125

b. Conociendo que el límite de linealidad de este método es de 500 mg/dL ¿Qué se haría con un suero
que diera una lectura de 0,700?

Recta calibración glucosa

0.6

0.5
y = 0.001x + 1E-16
0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 100 200 300 400 500 600

y = 0,001 X

0,125 = 0,001 X

X = 125 mg/dL

Al caer el valor de 0,700 fuera del límite de linealidad, debería realizarse una dilución que
permitiera hacer la lectura en la zona lineal de la curva de calibrado.
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Posteriormente, el valor obtenido habría que multipliarlo por el factor de dilución de la

dilución que se hubiera realizado.

Considerando los siguientes datos:

Concentración de ácido úrico (mg/dl) Absorbancia

1,00 0,261
0,75 0,176
0,50 0,114
Blanco 0,000
Dilución 1:10 de una muestra de suero 0,134
Libre de proteínas

¿Cuál es la concentración de ácido úrico en la muestra de suero?. Asumir que en cada solución se utilizó
una cubeta de 1,20 cm. de espesor.

Recta de calibración del Acido úrico

0.3

0.25
y = 0.2561x - 0.0063
0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
-0.05

Ecuación de la recta : y = 0,2561 X – 0,0063

0, 134 = 0,2561 X – 0,0063

X = 0,54 mg/dL
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Se le aplica la dilución realizada en la muestra: factor de dilución es 10

Concentración muestra = 0,54 × 10 = 5,4 mg/dL