LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL – UNIVERSIDAD DEL VALLE

DETERMINACION DE ACETOAMINOFEN EN UN FARMACO POR

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA
Jhonatan David Cuellar (1428710), Dilson Clevel (1538317)
Jhonatan.cuellar@correounivalle.edu.co, dilson.clevel@correounivalle.edu.co
Fecha de realización: 03/11/2017
Fecha de entrega: 01/12/2017
Presentado a: Harold Díaz.
Palabras clave: acetaminofén, espectrofotómetro uv-vis, cuantificación.

Resumen. Se cuantifico el contenido de acetaminofén, usando como instrumento un espectrofotómetro de absorción

ultravioleta, para lo cual se realizaron dos curvas de calibración una por el método de patrón externo y la otra por el
de adición de estándar con soluciones estándar de acetaminofén, se determinó la longitud de onda de máxima
absorción para una máxima sensibilidad y con estas curvas se hayo la concentración de la muestra la cual fue de
94.7 ± 2.36 %p/p para la curva por patrón externo y 70.4 ± 97.572 %p/p para la curva de adición de estándar. Dando
un porcentaje de error de 5.178% y 21.837% respectivamente.

Datos, cálculos y resultados. Se selecciona en el instrumento la longitud de onda

de máxima absorción (243.0 nm) y se pasa a medir
 Curva de calibración por patrón externo: la absorbancia de las soluciones patrón, ajustando
se pesaron 20.0 mg de acetaminofén analítico y se el cero del instrumento con el blanco.
disolvieron en 5.0 mL de metanol grado
Tabla 1. datos obtenidos en el espectrofotómetro.
espectroscópico y se enrazó a 100.0 mL en un
matraz con agua Milli-Q, a partir de esta solución Concentración Absorbancia
(ppm)
(200.0 ppm) se prepararon soluciones estándar de
4.0 0.2588
4.00, 8.00, 12.00, 16.00 y 24.00 ppm.
8.0 0.6305
Con la solución de concentración intermedia (12.00 12.0 0.8002
ppm), preparada para la curva de calibración, se 16.0 1.0641
tomó el espectro ultravioleta en el rango entre 200.0
24.0 1.5725
y 300.0 nm, con un espectrofotómetro UV- 1700
SHIMADZU. Obteniendo un máximo de
Con los datos anteriores se construye la siguiente
absorbancia a 243.0 nm.
curva de calibración:

Grafica 1. Curva de calibración.

Figura 1. Espectro de máxima absorción del acetaminofén.
Con la curva anterior y aplicando mínimos
cuadrados se obtiene la Ecuación 1 y el resumen de
la regresión:
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𝑦 = 0.06337𝑥 + 0.0503 Ec.1 Con los datos anteriores se construye la siguiente
curva de calibración:
Tabla 2. Resumen de la regresión.
a 0.050335135
Sa 0.0469237
b 0.063667568
Sb 0.003228831
r 0.99773435
r2 0,992343365
SR 0.049686241

Se calculan los intervalos de confianza de la

pendiente y el intercepto con un 95% de confianza
(f=3, tcrit. =3.18):
𝑏 ± 𝑡𝑆𝑏 = 0.063667568 ± 0.010267 Ec. 2 Grafica 2. Curva de calibración.

𝑎 ± 𝑡𝑆𝑎 = 0.050335135 ± 0.149217 Con la curva anterior y aplicando mínimos

cuadrados se obtiene la Ecuación 1 y el resumen de
Se calculará ahora los límites de detección y la regresión:
cuantificación para la determinación de
acetaminofén: 𝑦 = 0.0667𝑥 + 0.0124 Ec.4

(𝑎+3𝑆𝑅 )−𝑎 Tabla 4. Resumen de la regresión.

𝐿𝐷 = Ec.3 a 0.0124
𝑏
𝜇𝑔 Sa 0.034829286
𝐿𝐷 = 2.3412033 b 0.0667
𝑚𝐿
Sb 0.002578886
(𝑎 + 10𝑆𝑅 ) − 𝑎
𝐿𝐶 = r 0.999464735
𝑏
r2 0,998929756
𝜇𝑔
𝐿𝐶 = 7.804011 SR 0.02427
𝑚𝐿
 Curva de calibración por el método de
Se calculan los intervalos de confianza de la
adición de estándar:
pendiente y el intercepto con un 95% de confianza
Se transfirieron 0.50 mL de la solución obtenida del
(f=3, tcrit. =3.18):
tratamiento de la muestra a cinco matraces
volumétricos de 25.0 mL y a cuatro de estos se le 𝑏 ± 𝑡𝑆𝑏 = 0.0667 ± 0.0082008 Ec. 2
adicionaron 0.5, 1.0, 2.0, y 3.0 mL de la solución
patrón de acetaminofén (200.0 ppm), se enrazó 𝑎 ± 𝑡𝑆𝑎 = 0.0124 ± 0.110757
cada matraz con agua Milli-Q. Y se midió la Se calculará ahora los límites de detección y
absorbancia de cada una de las soluciones, a la cuantificación para la determinación de
longitud de onda encontrada anteriormente. acetaminofén:
Tabla 3. datos obtenidos en el espectrofotómetro por el método (𝑎+3𝑆𝑅 )−𝑎
de adición de estándar.
𝐿𝐷 = Ec.3
𝑏
Concentración de Absorbancia 𝜇𝑔
estándar 𝐿𝐷 = 1.0916
𝑚𝐿
añadido(ppm)
0 0.0125 (𝑎 + 10𝑆𝑅 ) − 𝑎
𝐿𝐶 =
4 0.2894 𝑏
8 0.5499 𝜇𝑔
𝐿𝐶 = 3.63868
16 1.0437 𝑚𝐿
24 1.6322
 Preparación de la muestra y el blanco:
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Se pesaron 22.0 mg de muestra (90.09 %p/p Calculamos el porcentaje de error de los resultados
acetaminofén) y se disolvieron en 5.0 mL de obtenidos:
metanol grado espectroscópico y se enrazó en un | 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙−𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙|
matraz de 100.0 mL, de esta solución se tomó una % 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙
∗ 100 Ec. 6
alícuota de 3.0 mL y se llevó a un volumen de 50
|90.09% − 94.7553%|
mL con agua Milli-Q. A esta solución se le mide la %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = 5.178 %
absorbancia por duplicado en la longitud de onda 90.09%
seleccionada anteriormente. Se calcula la incertidumbre de la concentración Sc,
haciendo uso de la siguiente ecuación:
Tabla 5. resultados obtenidos en el instrumento.
Muestras Absorbancia 𝑆𝑐 𝑆 2 𝑆 2 𝑆 2
= √( 𝑋 ) + ( 𝑌 ) + ( 𝑍 ) Ec. 7
1 0.7955 𝐶 𝑋 𝑌 𝑍

2 0.7961 Cada termino hace referencia a las incertidumbres

de los volúmenes de las alícuotas y de las
soluciones que fueron usados para el cálculo de la
 Calculo de la concentración de la muestra
concentración en cuestión.
con la curva de calibración por patrón
externo: 𝑆𝑐 = 0.024954702 ∗ 94.7553%𝑝/𝑝
A partir de la Ecuación 1, y tomando el promedio de 𝑆𝑐= 2.364590281
las absorbancias se calcula la concentración de la
muestra: Por lo tanto, la concentración de acetaminofén en la
tableta es de 94.7 ± 2.36 %p/p
𝑦 = 0.06337𝑥 + 0.0503
Se realiza una prueba estadística (prueba t) para
𝑦
𝑥= − 0.0503 determinar si la diferencia entre el resultado y el
0.06337 valor real es estadísticamente significativa, es decir
0.7958 si hay evidencia de error sistemático:
𝑥= − 0.0503
0.06337 Hipótesis “nula” (H0): el resultado no es inexacto.
𝑥 = 12.5077 𝜇𝑔/𝑚𝐿
Hipótesis alterna (H1): el resultado es inexacto.
A la concentración obtenida con la ecuación 1, se le
Prueba estadística:
calculara su respectiva incertidumbre con la
siguiente ecuación: |𝑥−𝜇|√𝑛
𝑡𝑐𝑎𝑙 = 𝑠
Ec. 8
𝑆𝑅 1 1 𝑦−𝑦̅ 1
𝑆𝑥 = 𝑏
√𝑚 +𝑛+( 𝑏
)𝑆 Ec. 5 |90.09 − 94.7553|√2
𝑥𝑥
𝑡𝑐𝑎𝑙 = = 2.79
𝜇𝑔 2.364590281
𝑆𝑥 = 0.303430947
𝑚𝐿 Valores críticos:
Los límites de confianza para la concentración 𝑡𝑐𝑟𝑖𝑡 = 12.71 (𝑃 = 95%, 𝑓 = 1)
calculada a un 95% de confianza son los siguientes
(f=3, tcrit. =3.18): Como tcal<tcrit no rechazamos la hipótesis nula, por
tal motivo se ha sido incapaz de demostrar que el
𝜇𝑔 resulta es inexacto.
𝑥 ± 𝑡𝑆𝑥 = 12.5077 ± 0.9649
𝑚𝐿
 Calculo de la concentración de la muestra
Ahora calcularemos la concentración de con la curva de calibración por adicción
acetaminofén en la tableta: estándar:
𝜇𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓𝑒𝑛 ± 0.3033 50.0 ± 0.06 𝑚𝐿
12.5077 ∗ A partir de la Ecuación 9, y tomando el promedio de
𝑚𝐿 3.00 ± 0.01𝑚𝐿
las absorbancias se calcula la concentración de la
100 ± 0.10 𝑚𝐿 1.0 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 muestra:
∗ ∗ ∗ 100%
22.0 ± 0.1 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 1000 𝜇𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 𝑎
𝑋𝐸 = 𝑏 Ec. 9

0.0124
= 94.7553 % 𝑝/𝑝 𝑋𝐸 =
0.0667
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𝑋𝐸 = 0.1859 𝜇𝑔/𝑚𝐿 Hipótesis alterna (H1): el resultado es inexacto.
A la concentración obtenida con la ecuación 9, se le Prueba estadística:
calculara su respectiva incertidumbre con la
|𝑥−𝜇|√𝑛
siguiente ecuación: 𝑡𝑐𝑎𝑙 = 𝑠
Ec. 8

𝑆𝑅 1 𝑦̅ 2 |90.0 − 70.41666|√2
𝑆𝑋𝐸 = √ + 2 𝑡𝑐𝑎𝑙 = = 0.2838
𝑏 𝑛 𝑏 𝑆𝑥𝑥 97.572
Valores críticos:
𝑆𝑋𝐸 = 0.2576
𝑡𝑐𝑟𝑖𝑡 = 12.71 (𝑃 = 95%, 𝑓 = 1)
Los límites de confianza para la concentración
calculada a un 95% de confianza son los siguientes Como tcal<tcrit no rechazamos la hipótesis nula, por
(f=3, tcrit. =3.18): tal motivo se ha sido incapaz de demostrar que el
resulta es inexacto.
𝜇𝑔
𝑥 ± 𝑡𝑆𝑋𝐸 = 0.1859 ± 0.819168
𝑚𝐿  Calibración por patrón externo vs adición
estándar:
Ahora calcularemos la concentración de
acetaminofén en la tableta: Se desea verificar si hay alguna diferencia
𝜇𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓𝑒𝑛 ± 0.2576 25.0 ± 0.04 𝑚𝐿 estadísticamente comprobable entre ambos
0.1859 ∗ ∗ métodos, para ello se realiza la siguiente prueba
𝑚𝐿 0.5 ± 0.005𝑚𝐿
de significancia:
50.0 ± 0.06 𝑚𝐿 100.0 ± 0.10 𝑚𝐿
∗ ∗ Hipótesis “nula” (H0): las pendientes de las dos
3.00 ± 0.01 𝑚𝐿 22.0 ± 0.1 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
curvas no son diferentes.
1.0 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
100% = 70.41666 % 𝑝/𝑝
1000 𝜇𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 Hipótesis alterna (H1): las pendientes de las dos
líneas son diferentes.
Calculamos el porcentaje de error de los resultados
obtenidos: Prueba estadística:
| 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙−𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙| |𝑏1 −𝑏2 |
% 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 Ec. 6 𝑡𝑐𝑎𝑙 = Ec. 10
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙 1 1
𝑆𝑅 √ +
𝑆𝑥𝑥1 𝑆𝑥𝑥2
|90.09% − 70.4166%|
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ∗ 100 = 21.837 % |0.063667568 − 0.0667|
90.09% 𝑡𝑐𝑎𝑙 = = 0.93249
0.003251946058
Se calcula la incertidumbre de la concentración Sc,
haciendo uso de la siguiente ecuación: Valores críticos:

𝑆𝑐 𝑆 2 𝑆 2 𝑆 2
𝑡𝑐𝑟𝑖𝑡 = 2.45 (𝑃 = 95%, 𝑓 = 6)
= √( 𝑋 ) + ( 𝑌 ) + ( 𝑍 ) Ec. 7
𝐶 𝑋 𝑌 𝑍
Como tcal<tcrit no rechazamos la hipótesis nula, por
Cada termino hace referencia a las incertidumbres tal motivo se ha sido incapaz de demostrar que las
de los volúmenes de las alícuotas y de las pendientes son diferentes, esto conlleva a afirmar la
soluciones que fueron usados para el cálculo de la ausencia de efectos de matriz ya que las pendientes
concentración en cuestión. estadísticamente son iguales por ambos métodos.

𝑆𝑐 = 1.3856 ∗ 70.4166%𝑝/𝑝 Discusión.

𝑆𝑐= 97.572 La espectrofotometría de absorción molecular

Por lo tanto, la concentración de acetaminofén en la
tableta es de 70.4 ± 97.572 %p/p
Se realiza una prueba estadística (prueba t) para
determinar si la diferencia entre el resultado y el
valor real es estadísticamente significativa, es decir
si hay evidencia de error sistemático:
Hipótesis “nula” (H0): el resultado no es inexacto.
ultravioleta-visible (UV) es una técnica, en la que,
se estudia la cantidad de radiación que absorbe una
muestra, luego de ser irradiada con luz a una
determinada longitud de onda. Para que la molécula
del analito pueda ser analizada por medio de esta
técnica, la radiación incidente tiene que tener la
suficiente energía para causar que los electrones de
valencia, pasen a un estado excitado de mayor
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energía, este proceso se ve sintetizado en la
ecuación 9.
Ec. 11
𝑀 + ℎ𝑣 → 𝑀∗
Así mismo, los electrones tienen que poder volver a
su estado fundamental al experimentar procesos de
relación, uno de los más comunes implica la
conversión de la radiación absorbida en calor. Sin
embargo, si la luz tiene demasiada energía puede
causar que los enlaces en la molécula se rompan al
llevar al electrón a un estado en el que, sea posible
romper el enlace intramolecular, causando que la
especie sufra descomposición fotoquímica.
En el presente análisis se trabajó en la región
perteneciente al ultravioleta, 100 a 380 nm, para
determinar el contenido de acetaminofén en dos
tabletas del medicamento, y así poder contrastarlo
con el reportado en la etiqueta de este, 500 mg de
acetaminofén. Para realizar esta cuantificación, en
primera instancia se tomó el espectro de absorción
del analito, encontrando una longitud de onda de
máxima absorción igual a 243.0 nm. A esta longitud
de onda se tomaron las medidas de absorbancia
realizando una curva de calibración, y una curva por
adicción estándar, para realizar la cuantificación, y
así mismo, resaltar la presencia de posibles efectos
de matriz asociados a la determinación.
Por medio de la realización de una prueba t, para
comparar las pendientes obtenidas por ambos
métodos. Estadísticamente se logró comprobar una
influencia muy insignificante de los efectos de
matriz en la cuantificación. Dichos efectos están
asociados a los excipientes empleados en la
fabricación del medicamento, que pueden ser
distintos según el laboratorio, o variar en su
composición, de acuerdo a la presentación en que
venga el acetaminofén comercial, tabletas o jarabe.
En general, para las tabletas los más utilizados son;
Almidón de maíz, celulosa micro cristalina (E-460),
estearato de magnesio o (E-470b),
carboximetilalmidón sódico (tipo A), aceite de ricino
hidrogenado, povidona (E-1201), macrogol 6000,
hipromelosa e hipromelosa 615 (E-464). [1]
Por otro lado, la interacción de la molécula con la
luz es posible dado que los compuestos orgánicos
son capaces de absorber radiación debido que
contienen electrones de enlace que pueden ser
excitados a niveles superiores de mayor energía.
Sin embargo, dependiendo de la clase de grupos
funcionales enlazados a la estructura molecular, la
energía asociada a la radiación de excitación, será
diferente para cada especie. En la mayoría de
compuestos saturados, las transiciones
electrónicas asociadas al proceso de excitación
involucran el paso del electrón del estado sigma
hacia orbital sigma antienlazante. Sin embargo,
debe considerarse que en un tratamiento completo
de cualquier molécula hay varios enlaces sigma, y
la energía requerida para esta excitación es
relativamente grande, ya que el enlace sigma es el
más fuerte. En esta clase de compuestos este tipo
de transición electrónica presenta bandas de
absorción aparecen en la región con longitud de
onda menor a 200 nm. [2]
Figura 1. Transiciones electrónicas entre los orbitales
moleculares.
En la figura 5 se muestra el espectro de absorción
para el acetaminofén, el cual presenta una longitud
de onda de máxima absorción de 243.0 nm. Las
principales características de una banda de
absorción son su posición e intensidad. La posición
de la absorción corresponde a la longitud de onda
de la radiación cuya energía es igual a la requerida
para la transición electrónica. La intensidad de la
absorción depende principalmente de dos factores:
la probabilidad de interacción entre la energía de
radiación y el sistema electrónico para pasar de un
estado fundamental a un estado excitado, así como
de la polaridad del estado excitado. La probabilidad
de transición es proporcional al cuadrado del
momento de transición. El momento de transición o
momento dipolo de transición, es proporcional al
cambio de la distribución de carga electrónica que
ocurre durante la transición. La absorción intensa se
presenta cuando la transición va acompañada de un
gran cambio en el momento de transición. La
absorción con ɛ mayor que 104 es una absorción de
alta intensidad, transición permitida, la absorción de
baja intensidad corresponde a valores de ɛ máximo
menor que 103, las transiciones de baja
probabilidad son transiciones “prohibidas”. [3]
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Figura 2. Espectro de absorción para acetaminofén,
absorbancia frente a longitud de onda en nm.
Consiguientemente, al observar la estructura
molecular del acetaminofén se detalla un anillo
bencénico doblemente sustituido, unido en posición
uno a un grupo hidroxi, y en la posición cuatro a un
grupo NH, unido a su vez a grupo R con un
carbonilo en su estructura.
De esta manera, a causa de la conjugación
presentada por el anillo aromático con los
heteroátomos es de esperar que la molécula sufra
transiciones electrónicas π,π* y n,π*, pudiendo
también llegar a experimentar transiciones del tipo
n-sigma antienlazante. Pero, debido a que este tipo
de transiciones no están permitidas por las reglas
de selección de la mecánica cuántica tienen poca
probabilidad de originarse. Igualmente, la
intensidad de la absorción debida a la transición del
tipo π,π* siempre es de 10 a 100 veces más intensa
que las absorciones n- π*, a razón, de que estas
últimas también están prohibidas, según lo
reportado en la literatura, por motivos de simetría. [4]
Figura 3. Estructura molecular del Acetaminofén.
El acetaminofén o N-(-4-hidroxifenil) acetamida se
puede cuantificar con este técnica, ya que esta
molécula posee el grupo funcional amida, el cual es
un cromóforo cuya longitud de onda de máxima
absorción es de 214.0 nm, igual que el grupo fenil
que presenta un pico de absorción a 211 nm, por lo
que se espera que las transiciones n→ 𝜋 ∗ , ocurran
en esta región de la molécula. Otra ventaja de esta
técnica es que no hay interferencias por los
solventes ya que la longitud de trabajo (243.0 nm)
está muy por encima del límite inferior de longitud
de onda del agua (180.0 nm) y del metanol (167.0
nm), es decir que, si se trabaja a una longitud menor
que estas, no podríamos usar estos solventes
debido a la absorción de estos. Los grupos
presentes en la molécula, responsables de la
absorción son denominados cromóforos, en este
caso el anillo bencénico, los enlaces del carbono los
grupos hidroxi y NH, así como también el grupo
carbonilo. La banda de mayor intensidad (π,π*) se
ve desplazada hacia regiones de mayor longitudes
de onda, por la conjugación de los distintos tipos de
cromóforos presentes en la estructura molecular.
Este fenómeno recibe el nombre de desplazamiento
batocrómico, y de forma similar se ve incrementado
por el solvente polar empleado, una mezcla de agua
y metanol. Por el contrario, con la banda n,π*, se
observa el efecto opuesto, a causa del solvente se
produce un desplazamiento hacia menores
longitudes de onda, denominado como
hipsocrómico. Estos desplazamientos son debidos
a la estabilización, o disminución de la estabilidad
por el disolvente de los estados fundamentales y
excitados, resultando, por lo tanto, un cambio en la
barrera de energía entre los niveles involucrados en
la transición. [5]
Esta característica mencionada anteriormente
permite que esta técnica posea una gran
aplicabilidad tanto para sistemas orgánicos como
inorgánicos, bajos límites de detección, selectividad
moderadamente alta, buena exactitud y además es
una técnica rápida y de bajo costo.
Para finalizar, fue posible realizar el análisis por
medio de la utilización de un espectrofotómetro UV
fabricado por SHIDMAZU modelo UV-1700
Spectrophotometer, con una resolución igual o
menor a uno en el intervalo de longitudes de onda
comprendido entre 190 a 900 nm. [6]
Este instrumento emplea un diseño de doble haz,
en el que, se divide el haz de radiación proveniente
de la fuente en dos de igual intensidad, uno es
dirigido directamente hacia el detector y otro se
hace pasar a través de la muestra, donde su
intensidad se ve disminuida, yaqué la muestra
absorbe parte de esta. La radiación no absorbida
llega al detector, la diferencia entre la intensidad del
primer haz y la del haz que paso por la muestra, da
la medida de la radiación que absorbió la muestra.
Como fuente se empleó una lámpara de deuterio,
un monocromador como seleccionador de longitud
de onda, celdas de cuarzo de un 1.00 cm de
longitud, para contener la muestra, y un tubo
fotomultiplicador como detector.
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PREGUNTAS.
a) Existe interferencia de matriz en el método
analítico para cuantificar acetaminofén en
tabletas, usadas en esta práctica. Muestre los
cálculos que lo llevan a la conclusión.
Si, estadísticamente se logró comprobar esta
asunción. Los cálculos están consignados en la
sección de cálculos, datos y resultados.
b) En el artículo reportado en la bibliografía
(Tarinc, D. y Golcu, A.) se presenta un método
espectroscópico simple y directo para la
determinación de algunos antibióticos del
grupo de las cefalosporinas. ¿Qué ventajas
presenta este método comparado con otras
técnicas como la cromatografía y la
electroquímica? ¿Cómo determinan la ausencia
de interferencia por parte de los excipientes?
¿Qué es un excipiente? ¿Qué información
relevante se obtiene de las figuras 4A y 4B?
¿Para qué sirve este tipo de curva?
Que es simple, preciso, exacto y económico, con un
mejor rango de estimación para las drogas del
grupo cephalosporins, estudiadas en el artículo.
También, es un método que no requiere extracción,
evaporización, el empleo de un agente complejante,
ni el manejo de químicos peligrosos, disminuyendo
así mismo tiempo y el error en cuantificación.
La ausencia de interferencias fue determinada por
medio de adición estándar, añadiendo cantidades
conocidas de los medicamentos puros.
Las figuras 4A y 4B, muestran el perfil de estabilidad
perteneciente a soluciones acuosas de los
medicamentos analizados. En la figura 4A se
compara longitud de onda contra tiempo en horas,
y en la 4B absorbancia contra tiempo, en horas. [7]
Se considera que un excipiente es una sustancia
inerte, es decir, aquella que no puede producir
ninguna acción biológica. Aunque no estén dotados
de acción farmacológica, los excipientes, mejoran la
apariencia, las propiedades organolépticas, la
estabilidad y la biodisponibilidad de las medicinales.
Los excipientes representan la mayor parte o
volumen de un preparado galénico.[8]
CONCLUSIONES.
 Debido a la importante contribución al error
por parte de los efectos de matriz, asociados
a los excipientes, tal vez para el análisis de
este fármaco en particular podría utilizarse
HPLC, en donde los efectos producidos por
los excipientes no serían tan pronunciados,
al responder esta técnica a la manera en
como la molécula del analito interaccionaría
directamente con la fase estacionaria y la
fase móvil. Dado que podría hacerse una
separación del analito de los excipientes,
basados en los tiempos de retención. El
efecto de estos últimos sobre el análisis
estaría minimizado.
REFERENCIAS.
[1] Ficha Técnica Paracetamol. Agencia Española
de Medicamentos y productos sanitarios.
Documento alojado en:
https://www.aemps.gob.es/cima/pdfs/es/ft/68066/6
8066_ft.pdf.
[2], [3], [4], [5] & [6] ZULUAGA, F., INSUASTY, O.
& YATES, B. Análisis Orgánico Clásico y Espectral.
Universidad del Valle, Facultad de Ciencias Exactas
y Naturales, Departamento de Química. Pág. 62-75.
[Fig. 4.] FERNANDEZ, G. Niveles y Transiciones
Electrónicas. Documento alojado en:
http://www.quimicaorganica.org/espectroscopia-
visible-ultraviolata/732-niveles-y-transiciones-
electronicas.html.
[Fig. 6] Crocin Tablets, Generic Paracetamol.
Medical Cheat Sheets.
[7] TARINC, D. & GOLCU, A., Journal of Analitical
Chemistry, 67, 2 (2012) 144-150.
[8] BAÑOS, J. & ALBALADEJO, M. Principios de
Farmacología, Bases Científicas de la Utilización de
Medicamentos. Barcelona: Masson, S.A. 2002.
Preguntas.
a) ¿Por qué la radiación de fluorescencia se
mide a 90° respecto a la radiación de excitación?
La fluorescencia se propaga en todas las
direcciones, pero la más conveniente es observar la
que la que forma un ángulo recto con el haz de
excitación. La geometría del ángulo recto reduce al
mínimo las contribuciones de la dispersión y de la
radiación intensa de la fuente. [1]
b) Explique claramente la diferencia
instrumental entre un fluorímetro y un
espectrofluorímetro, indique las ventajas y
desventajas de cada uno.
Los fluorímetros solo utilizan filtros para seleccionar
la longitud de onda de excitación y emisión,
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mientras que los espectrofluorímetros están
equipados con dos monocromadores para aislar la
longitud de onda de excitación y emisión.
Los fluorímetros son más baratos. Sin embargo, los
espectrofluorímetros facilitan la producción de
espectros de excitación de la fluorescencia o un
espectro de emisión de la fluorescencia, también
proporcionan mayor selectividad que es muy
importante en las investigaciones relacionadas con
las características electrónicas y estructurales de
las moléculas y valiosas en los trabajos analíticos
cualitativos y cuantitativos. Por otro lado, los
fluorímetros son diseñados específicamente para
resolver los problemas de medición propios de los
métodos fluorescentes, y son a menudo tan
específicos y selectivos como los espefotómetros
de absorción modificados. [1]
c) Dibuje la estructura de la riboflavina y
explique porqué es una molécula altamente
fluorescente.
En la figura 4 del análisis de resultados se hace
alusión a dicha estructura.
La riboflavina es una molécula que contiene grupos
funcionales aromáticos con transiciones π π*, y
por lo general la fluorescencia se relaciona más con
el estado π, π* porque tales estados manifiestan
tiempo de vida relativamente cortos, siendo menos
probable que tengan lugar los procesos de
desactivación que compiten con la fluorescencia.
La condensación de anillos bencénicos para dar
núcleos heterocíclicos, da como resultado un
aumento en la absortividad molar de banda de
absorción. En estas estructures el tiempo de vida
del estado excitado es más corto, a causa de
transiciones de baja energía que ocasionan que el
compuesto presente fluorescencia. [1]
d) ¿Cuál es la diferencia entre la fluorescencia y
la fosforescencia? ¿Existe alguna diferencia en
la instrumentación? Explique. ¿Es posible
obtener medidas de fosforescencia en un
fluorímetro? Si es afirmativo, ¿bajo qué
condiciones?
Las transiciones energéticas electrónicas que
causan la fluorescencia no cambian el espín del
electrón. Por esta razón, los estados excitados en
los que hay fluorescencia presentan vida corta (<
10-5). En cambio, las emisiones de fosforescencia
están acompañadas por un cambio en el espín del
electrón, y los tiempos de vida de los estados
excitados son mucho más largos, con frecuencia del
orden de segundos o hasta de minutos. [1]
En cuanto a la instrumentación no existe alguna
diferencia realmente importante, dado que los
fenómenos que producen fluorescencia pueden
inducir fosforescencia. Sin embargo, esta clase de
instrumentos para poder discriminar entre
fluorescencia y fosforescencia incorporan choppers
que funcionan fuera de fase permitiendo un retraso
entre el tiempo en el que la muestra se excita y
emite radiación.
Debido a que la fosforescencia es un proceso muy
lento, se debe prevenir la conversión externa en el
estado excitado, que puede ocurrir muy fácilmente.
Por esta razón la muestra se disuelve en solvente
orgánico apropiado y se trabaja a temperaturas bajo
cero, en específico a la temperatura del nitrógeno
líquido, para formar un sólido ópticamente
despejado. Así mismo, la muestra también puede
inmovilizada en un sustrato sólido, haciendo posible
realizar medidas a temperatura ambiente. Una de
las maneras de realizar esto es colocando una gota
de solución con el analito en un disco pequeño de
papel filtro, luego secar y ubicarlo en un
espectrofluorímetro para el análisis. [5]
Conclusiones.
 La espectroscopia de fluorescencia es una
técnica que, al permitir trabajar con
soluciones muy diluidas, sin presentar
deviaciones de la ley de Lambert-Beer,
además posee límites de detección y
cuantificación muy bajos.
 El empleo de la fluorescencia como método
de cuantificación, como se demostró en el
análisis, es una herramienta que resulta
muy eficaz por suministrar resultados
rápidos y confiables. Sin embargo, una
manera de contribuir a mejorar la exactitud
de los resultados seria reduciendo las
colisiones entre las moléculas en la muestra,
al disminuir la temperatura, con lo cual, se
minimizarían los procesos de conversión
externa ocasionando que la intensidad de la
fluorescencia sea mayor.
 Puesto que los estados excitados son muy
susceptibles a las colisiones u otros
procesos, muchas moléculas no manifiestan
fluorescencia, lo cual es una desventaja
porque la aplicabilidad de la técnica es muy
limitada.
 Los métodos luminiscentes sufren graves
interferencias, por esta razón, son
combinados con técnicas de separación
como la cromatografía y la electroforesis.
 LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL – UNIVERSIDAD DEL VALLE
 La estructura molecular del analito es
importante conocerla para poder determinar
si se puede o no, aplicar el método. Realizar
un análisis de sus grupos funcionales en
busca de fluorofóros, resulta ser
indispensable si se piensa usar este
método.
Referencias.
[1] SKOOG, D.A.; HOLLER, F.J. & CROUCH, S.R.
Principios de Análisis Instrumental. 6ed. México:
McGraw-Hill, 2008. 400-409
[2] FP-8500 Fluorescence Spectrometer JASCO,
Especificaciones. Tomado de:
http://www.jasco.de/Spectroscopy/Fluoreszenz/FP-
8000Serie/FP-8500.
[3] P. MARTHA. Guías de presentación del curso
Análisis instrumental II. Espectrometría de
Luminiscencia Molecular, Fluorescencia y
Fosforescencia. Universidad del Valle, Facultad de
Ciencias Exactas y Naturales, Departamento de
Química.
[4] Bueno-Solano, Carolina, Campas-Baypoli, Olga
Nydia, Díaz-García, Alan Sergio, Izaguirre-Flores,
Elda Inés, Verdugo-Zamorano, Wilfrido, Estrada-
Alvarado, María Isabel, Sánchez-Machado, Dalia
Isabel, & López-Cervantes, Jaime. (2009).
cuantificación de riboflavina (vitamina b2) en
productos lácteos por hplc. Revista chilena de
nutrición, 36(2), 136-142.
[5] Harvey, D. Modern Analytical Chemistry.
McGraw-Hill Companies. 2008.