UNIVERSIDAD DE LA GUAJIRA FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y

APLICADAS PROGRAMA DE BIOLOGÍA

ASIGNATURA: BIOLOGÍA CELULAR

Programación General de Biología Celular

Guía de Laboratorio

NORELVIS VARGAS CAMPO

Docente

Riohacha- II-2023
GUIA DE LABORATORIO [ BIOLOGÍA CELULAR]

PRACTICA 3
OBSERVACIÓN DE CELULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

I.INTRODUCCION
La célula es la unidad básica funcional y estructural más pequeña de los
organismos vivos. Se compone de partes características, cuyo trabajo está
coordinado de tal manera que cada tipo de célula lleva a cabo una función
estructural bioquímica única. Las células comparten muchas características
estructurales, pero hay una clara diferencia entre la organización de las células
procariotas y las eucariotas.

En particular, las células de los procariontes son pequeñas y simples. Tienen una
membrana citoplásmica, generalmente delimitada por una pared celular rígida; un
nucleoide que consta de una sola molécula de ADN circular y que representa
todos los genes del organismo (genoma); y un citoplasma que contiene ribosomas
y una gran variedad de moléculas que median el metabolismo, pero carecen de
membranas internas permanentes. Al carecer de estas membranas sus células no
poseen un núcleo ni organelos celulares.

En contraste, las células eucariotas son más grandes y están caracterizadas por
muchos compartimientos membranosos. La característica primaria de las células
eucarióticas es el núcleo con sus cromosomas. El citoplasma que rodea al núcleo,
limitado a su vez por la membrana, incluye una variedad de organelos, teniendo
cada clase su propia organización estructural y función o funciones particulares en
la célula.

Aunque las células se pueden observar directamente en fresco al microscopio

óptico, la mayoría de las veces es necesario teñirlos para que, por medio del uso
de colorantes, sea mucho más fácil su identificación; además, la presencia de
ciertas
estructuras, así como su reacción a determinadas técnicas, nos revelan su forma y
tamaño y la presencia de estructuras internas y externas.
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II. MARCO TEORICO

Célula Procariota
Bacterias: Gram positivas y Gram Negativa
Las bacterias son organismos de una sola célula que pueden vivir en diferentes
medios. Algunas bacterias pueden sobrevivir en un ambiente ácido, otras en
medios alcalinos como lo son las bacterias del intestino humano y otras pueden
sobrevivir en un medio salino, como las bacterias que viven en el fondo del
océano.
Las bacterias están protegidas por paredes celulares rígidas que forman
envolturas y rodean a las células. Las paredes celulares de las bacterias están
hechas de peptidoglucano, que es una cadena de polisacárido (Castro, 2014).
Pared celular en las bacterias Gram positivas. Las bacterias Gram positivas
cuentan con una pared celular grande (± 25 nm), compuesta por una gruesa capa
de peptidoglucanos en la que se pueden encontrar, intercalados en esta,
componentes únicos de bacterias Gram positivas como son ácido teicoico
(polímeros de glicerol o ribitol unidos a grupos fosfato) y ácido lipoteicoico (ácido
teicoico unido a lípidos desde la membrana celular). Estas estructuras de carga
negativa le confieren parte de la carga negativa superficial de la bacteria, además
estimulan la respuesta inmune y sirven de adhesinas para algunas bacterias
(Castro, 2014).
Pared celular en las bacterias Gram negativas. En contraste, la pared celular de
las Gram negativas es muy pequeña (±3 nm). Esta capa delgada de
peptidoglucano permite la presencia de un espacio periplásmico, el cual es
importante debido a que, hacia el exterior, las bacterias Gram negativas cuentan
con una distintiva membrana externa (Castro, 2014).

Tinción de Gram
Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; Los
principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared
celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida
por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que
las bacterias Gram positivas poseen una pared Lipoporisacárido, pared celular
membrana celular celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan
con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido de
peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram
positivas explica y determina las características tintoriales.
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Figura 1. Esquema de las diferencias estructurales entre bacterias Gram negativas y Gram
positivas

Nota: Tomado de Curiosoando.com.

Figura 2: Tinción Gram

Nota: Tomado de Las tenciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque

gráfico (Gonzalo, et. al., 2020)
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Células Eucariota
Células sanguíneas
La sangre es un tejido líquido de color rojo, viscoso de sabor salado y olor
especial; compuesto por agua y sustancias orgánicas e inorgánicas (sales
minerales) disueltas, que forman el plasma sanguíneo y tres tipos de elementos
formes o células sanguíneas: glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas. Una
gota de sangre contiene aproximadamente unos 5 millones de glóbulos rojos, de
5.000 a
10.0 glóbulos blancos y alrededor de 250.000 plaquetas (Ganong,2004).
Tinción hematoxilina y la eosina:
Método de tinción de rutina en histología y citología. Es una tinción basada en dos
etapas, la primera una tinción nuclear por un colorante básico (hematoxilina) y la
segunda, una tinción citoplasmática por un colorante xantenico ácido (eosina). La
hematoxilina en combinación con sales de aluminio, hierro o cromo, forma un
colorante activo, la hemateina, formada por oxidación de la hematoxilina. Este se
usa como colorante nuclear, tiñendo los núcleos de color azul/negro y aportando
un buen detalle de los mismos. Por este motivo, se suele usar junto con un
colorante citoplasmático generalmente la eosina, que aporta una gradación entre
el rosa, y el rojo a las estructuras y matrices celulares de carácter catiónico (a las
que la hematoxilina no tiñe o lo hace muy débilmente).
Espermatozoides
Espermatozoide es la célula reproductora sexual masculina o gameto masculino
encargada de fecundar al óvulo, aportando la información genética
complementaria a la de la célula femenina. Su tamaño es unas 10.000 veces más
pequeño que el óvulo. Son microscópicas y una de las más pequeñas del cuerpo.
Está formado por una cabeza, cuello, pieza intermedia y cola o flagelo, recubierto
por una membrana plasmática espermática (López, et al. 2012)
 En la cabeza se encuentra el núcleo haploide, cubierto por una envoltura
nuclear y la teca o matriz perinuclear
 El cuello es la unión entre la cabeza y el flagelo
 La cola, también llamada flagelo, es una estructura larga filiforme, cuya
principal función es proporcionarle movilidad al espermatozoide,
impulsarlo hacia el ovocito y ayudarlo a atravesar la cubierta ovocitaria.
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III. OBJETIVOS
Reconocer mediante tinciones y observaciones microscópicas, las características
diferenciales de las células Procariotas Y Eucariotas a partir de una muestra.
Conocer la clasificación de las de las bacterias (células procariotas) basados en la
coloración de Gram.

IV. IEQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS DE LABORATORIO

 Láminas porta objeto

 Coloración de Gram: Cristal violeta, Lugol, Alcohol Acetona, Safranina
 Mechero
 Microscopio,
 Aceite de inmersión
 Guantes,
 Baja lenguas
 Copitos
 Alcohol para mechero
 Hematoxilina
 Alcohol absoluto
 Eosina
 Lancetas
Material Biológico
 Semen
 Sangre
Lo subrayado debe traerlo el estudiante

PROCEDIMIENTO
Tinción Gram
1. Por cada grupo de laboratorio se tomará una muestra de las bacterias
presentes en la garganta
2. El estudiante abrirá la boca y su lengua será sujetada con un baja lenguas,
dirá la letra “A” y con el copito se frotará suavemente sus amígdalas.
3. El contenido del frotamiento se extenderá en el portaobjeto sin tocar los
extremos de la lámina.
4. Se debe dejar secar y fijar con calor, flameando la lámina con un mechero
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5. Se colorea con la tinción de Gram se deja secar Tabla 1.

6. Se observa en el microscopio en objetivo de inmersión.
7. Reconozca las diferentes bacterias y clasifíquelas según lo observado.

Tabla 1: Pasos para la tinción Gram

GRAM
PASOS METODO GRAM NEGATIVA
POSITIVA
Violeta de genciana (luego de Se tiñe devioleta Se tiñe de
Colorante básico 30 s. Se lava con agua elexceso de violeta
colorante)
Mordiente o Lugol (pasado 1 min. se lavacon Permanece Permanece
fijadorquímico agua el exceso de lugol) violeta violeta

Decoloración Alcohol de 95% o Alcohol acetona Permanece Se decolora

(durante aprox.30 s. y luego lavar violeta
con agua para eliminar el resto
de disolvente)
Contraste Fucsina o Safranina (luego de Permanece Se tiñe derosa
30 s. Se lava con agua elexceso de violeta
colorante)
Observar al COLOCAR SOBRE EL FROTIS UNA Violeta Rosa
microscopio GOTADE ACEITE DE INMERSIÓN

Nota: Elaboración propia

Tinción con hematoxilina y la eosina

 Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar.
 Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos.
 Colocar otro portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la
superficie del portaobjetos de manera que se pueda obtener una fina
película de sangre. El portaobjetos absorbe la gota y la arrastra, pero sin
pasar nunca por encima de ella para no dañar los hematíes.
 Secar el frotis con calor
 Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de
alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación.
 Secar el frotis con calor
 Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos.
Evitar la desecación del colorante agregando más líquido.
 Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1
minuto.
 Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
 Secar el frotis con calor muy lento de la llama del mechero.
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 Observar al microscopio y tomar fotografías

Figura 3: Pasos para realizar un frotis de sangre periférica

Nota: Tomado de https://theory.labster.com/blood-smear-es/

Montaje de espermatozoides
Montaje en fresco
Con la ayuda del gotero tome una muestra de líquido seminal, proceda a colocar
una gota sobre una lámina portaobjeto y cúbralos con una laminilla cubreobjetos.
Observe la preparación al microscopio, comenzando por el de menor aumento
hasta obtener el de mayor aumento. Con la presente muestra debe realizar las
siguientes observaciones: Tamaño y forma
Figura 4: Montaje de muestra seminal

Nota: Tomado de https://www.reproduccionasistida.org/diagnostico-

teratozoospermia/tincion-azul-de-metileno/
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REFERENCIAS
 Castro AM. Bacteriología médica basada en problemas. 2a ed. México:
Manual Moderno; 2014.
 Curiosoando.com. “¿Qué es una bacteria Gram positiva?” [Internet]. 2018
[consultado 20 agosto 2023]. Disponible en: htps://curiosoando.com/que-es-
una-bacteria-gram-positva
 Ganong, W.F. 2004. Manual de fisiología médica. El Manual Moderno.
México.
 González, R., Elizalde, B., Cortés, M., & Orduña, M. (2020). Las tinciones
básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfico. Zaragoza:
Universidad Nacional Autónoma de México, 83-103.
 López García, Urbano Felices, Cárdenas Povedano, (2012). Manual de
laboratorio para el análisis del semen. 1ra ed. pp. 8 - 10.
 Proteínas, L. Y. Guía De Laboratorio Lcb Y Física Laboratorio De Biología
Celular.
VII. ANEXOS
CUESTIONARIO
 ¿Por qué se debe calentar la preparación?
 ¿Qué dificultades se tendrían si no se adiciona la safranina al final de la
tinción?
 ¿Por qué las bacterias gram negativas son generalmente más resistentes a
los antibióticos que las gram positivas?
 ¿Cuál es el propósito de usar técnicas de tinción al observar células
sanguíneas en un microscopio?
 ¿Cuál es la función de la hematoxilina y la eosina?
 ¿Cómo varia el tamaño en cada una de las células observadas?