LABORATORIO #5

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ALGUNOS COMPONENTES DEL

PROTOPLASMA CÉLULAR

María Arreola, Iván Brid, Jesús Caro, Yissed Giraldo, Andrés Franco, Leonardo Mata.
Estudiantes de la facultad de Ciencias Farmacéuticas
Junio 2019

RESUMEN necessary to use reagents that allow us to

Para la identificación de los componentes
del protoplasma celular, de manera
cualitativa es necesaria la utilización de
reactivos que nos permiten determinar la
presencia y/o cantidad del componente
protoplasmático en estudio. Ciertos
conceptos de solución fueron
imprescindibles al momento de desarrollar
la práctica, ejemplo de esto fue en la
determinación de carbohidratos atreves del
reactivo de Benedict, los lípidos a partir
del Sudan III como compuesto liposoluble,
las proteínas a través de unas mezclas de
soluciones que permitían precipitado y
solubilización de este y finalmente la
reacción de Lieberman permitió establecer
cualitativamente pruebas al colesterol.
Palabras clave: Carbohidratos, Proteínas,
Colesterol, Reactivos, Lípidos.
ABSTRACT
For the identification of cellular
protoplasm components, qualitatively it is
determine the presence and / or quantity of
the protoplasmatic component under
study. Certain concepts of solution were
essential at the time of developing the
practice, example of this was in the
determination of carbohydrates through
Benedict's reagent, lipids from Sudan III
as a fat-soluble compound, proteins
through mixtures of solutions that allowed
precipitate and solubilization of this and
finally the Lieberman reaction allowed to
qualitatively establish cholesterol tests.
Key words: Carbohydrates, Proteins,
Cholesterol, Reagents, Lipids.
INTRODUCCION
Las biomoléculas son compuestos de
carbono con una variedad de grupos
funcionales y se encuentran
jerárquicamente organizados en las
células. La versatilidad de los átomos de
carbono para formar enlaces covalentes
sencillos y dobles principalmente, es de
gran significancia biológica porque a
partir de ellos se establecen unidades
monoméricas como los monosacáridos, OBJETIVOS ESPECIFICOS.
aminoácidos y nucleótidos. La
Determinar mediante métodos cualitativos
polimerización de estas unidades
la presencia de carbohidratos, lípidos,
monoméricas primarias permite la
proteínas, enzimas y ácidos nucleicos en
aparición de un segundo nivel de
muestras de materia viva.
complejidad al que pertenecen
macromoléculas como los polisacáridos Reconocer la composición química de los
(almidón y glucógeno), proteínas reactivos que se utilizan en la
(albúmina e histonas) y ácidos nucleicos identificación de los compuestos
(DNA y RNA). Las interacciones de protoplasmáticos.
macromoléculas a través de diferentes
tipos de fuerzas intermoleculares y Investigar las reacciones que se producen
mecanismos complejos de en la identificación de los compuestos
protoplasmáticos.
empaquetamiento, permiten la
conformación de las diferentes organelas
(membranas plasmáticas) y estructuras
supramoleculares, como los cromosomas. MATERIALES
Finalmente, la interacción conjunta de las
biomoléculas en sus diferentes niveles de
organización permite la conservación de la Tubos de ensayos
estructura y funcionamiento de las 32 Pipetas
células. En esta práctica se estudiarán los
dos primeros niveles de complejidad Goteros
estructural de algunas biomoléculas, para Gradillas para tubos de ensayos
lo cual el estudiante deberá consultar
acerca de sus características y propiedades Mechero de alcohol
fisicoquímicas, de forma tal que pueda
Pinzas
comprender los resultados de los ensayos
que aquí se realicen. Reactivo de Benedict
Solución de glucosa al 3%
OBJETIVOS Fruta madura
Levadura activa
OBJETIVO GENERAL. Almidón
Identificar en forma cualitativa la Macerado de pan
presencia de algunos componentes que se
Lugol
encuentran en el protoplasma celular.
Solución de clara de huevo
Solución de gelatina sin sabor
Suero fisiológico
Hidróxido de sodio al 10% Proteínas
Sulfato de cobre al 0.5% Las proteínas o prótidos son
macromoléculas formadas por cadenas
Aceite vegetal
lineales de aminoácidos.
Grasa animal
Sudan III o IV
Colesterol
Baño de maría
es un esterol (lípido) que se encuentra en
Agua destilada la membrana plasmática y los tejidos
corporales de todos los animales y en el
Solución sanguínea plasma sanguíneo de los vertebrados.
Suspensión de levadura activa
Reactivo de difenilamina Reactivos
Papel filtro es una sustancia o compuesto añadido a un
Anhídrido acético sistema para provocar una reacción
química, o añadido a probar si se produce
Cloroformo una reacción.
Ácido Sulfúrico concentrado
Solución reactiva de almidón al 1% Lípidos.
son un conjunto de moléculas orgánicas (la
MARCO TEORICO mayoría biomoléculas), que están
constituidas principalmente por carbono e
hidrógeno y en menor medida por
Carbohidratos oxígeno. También pueden contener
fósforo, azufre y nitrógeno.
Los glúcidos, carbohidratos, hidratos de
carbono o sacáridos son biomoléculas
compuestas de carbono, hidrógeno y
oxígeno, cuyas principales funciones en
los seres vivos son el brindar energía RESULTADOS
inmediata y estructural. También se
definen como grupos funcionales mixtos,
formados por hidroxilos (-OH) y grupos 1. Determinación de carbohidratos
carbonilos provenientes de los alcoholes y A. monosacáridos
las cetonas o los aldehídos,
respectivamente. En un tubo de ensayo vertimos 5ml del
reactivo de Benedict (Figura 1), y lo
calentamos hasta la ebullición (Figura 2).
luego añadimos al mismo tubo de ensayo
1ml de una solución de glucosa y lo
calentamos hasta la ebullición (Figura 3).
Luego, maceramos un pedacito de fruta
madura y la adicionamos a un tubo de
ensayo que contiene 5 ml de reactivo de
Benedict (Figura 4). Calentamos hasta la
ebullición (Figura 5).

Figura 2. Reactivo de benedict Hasta la

ebullición.

Figura 1. Reactivo de benedict.

Figura 3. Reactivo de benedict con

glucosa hasta la ebullición.
 B. Polisacáridos
Hicimos una suspensión acuosa de
almidón y vertimos en un tubo de ensayo
2 ml de ella. Agréganos a la anterior
solución dos gotas de solución de Lugol
(Figura 6). Calentamos hasta la ebullición
esta solución por dos minutos (Figura 7),
Dejamos el tubo de ensayo en reposo hasta
que se enfrío (Figura 8). Depositamos dos
gotas de Lugol en una solución acuosa de
un macerado de pan (Figura 9).

Figura 4. Reactivo de benedict con

macerado de fruta.

Figura 6. Suspensión acuosa de almidón

con Lugol.

Figura 5. Reactivo de benedict con

macerado de fruta hasta la ebullición.
Figura 7. Suspensión acuosa de almidón Figura 9. Resultado final.
con Lugol calentado.

C. Proteínas
En un vaso Precipitado diluimos gelatina
sin sabor con suero fisiológico (Figura 10),
luego en un tubo de ensayo, colocamos
2ml de solución de gelatina sin sabor, se
añaden dos gotas de sulfato de cobre al
0.5% y 1ml de hidróxido de sodio al 10%.
Agregamos dos gotas de sulfato de cobre
y 1ml de hidróxido de sodio y agitamos
(Figura 11).

Figura 8. Solución en reposo.

 D. Lípidos
Colocamos en un tubo de ensayo 3ml de
agua (Figura 12). Agregamos una pizca
del reactivo Sudan III (Figura 13) y
agitamos (Figura 14). Luego en el mismo
tubo de ensayo adicionamos 1ml de aceite
vegetal, agitamos nuevamente y dejamos
en reposo por unos minutos (Figura 15).
Luego en otro tubo de ensayo colocamos
2ml de grasa animal y agregamos una
pizca de Sudan III (Figura 16).

Figura 10. Gelatina sin sabor con suero

fisiológico.

Figura 12. Agua destilada.

Figura 11. Resultado final de la gelatina

sin sabor.
Figura 13. Reactivo de sudan. Figura 15. Agua con reactivo de sudan
III y aceite vegetal.

Figura 14. Agua con reactivo de sudan Figura 16. Grasa animal y Reactivo de
III. sudan III.
2. Reacción de Lieberman Burchard
para colesterol:
Diluimos una parte de la yema de huevo en
10 ml de cloroformo. Tomamos 1 ml de la
solución clorofórmica y lo colamos en un
tubo de ensayo limpio y seco.
Adicionamos 1 ml de anhídrido acético.
Adicionamos 3 a 4 gotas de ácido sulfúrico
concentrado. Agitamos suavemente
(Figura 17).
Figura 18. Enzimas

DISCUSIÓN.

Durante la práctica fueron observados

Figura 17. Reacción de Lieberman
Burchard para colesterol.
3. Enzimas
En un tubo de ensayo limpio y seco
colocamos un embudo pequeño con papel
filtro. Enjuagamos la boca con suero
fisiológico y descarte. Colocamos, en una
serie de 4 tubos de ensayo, dos gotas de
Lugol en cada uno. En otro tubo
colocamos 10mL de suspensión acuosa de
almidón y añadimos 1ml de saliva y
agitamos. Cada 20 segundos pasamos 1mL
de la mezcla almidón más saliva a cada
uno de los tubos de la serie, hasta que no
se produzca coloración (Figura 18).
algunos componentes del protoplasma
celular, con la finalidad de distinguirlos
y de aprender la forma en que estos
pueden ser identificados. La forma en
cómo se realizó cada procedimiento
fue de manera distinta con los diferentes
materiales utilizados, dependiendo de
cual fuera el componente a identificar,
pero todos con la misma finalidad.
Debido a que cada grupo hacia un ítem de
la práctica no se pudieron tomar muchas
mas fotos y debido a eso no se pudo
elaborar un ítem de la práctica.
CONCLUSIONES
- En la identificación de los
monosacáridos, el resultado que se obtuvo
en la solución con la sola presencia del
reactivo de Benedict calentado hasta
ebullición, fue que no hubo ningún tipo de
cambio en la coloración natural de esta
solución. Al agregarle glucosa y calentarla
hasta ebullición se notó un cambio en la
coloración de un tono rojo ladrillo, lo que
indico la concentración de glucosa (Figura
3).
Después con el macerado de fruta, donde
el azúcar manejado es la fructosa y al
calentarse y llegar a su punto de ebullición
se observó una coloración amarilla (Figura
5).
que el reactivo se disolvió con el aceite,
tornándose una coloración rojiza en la
parte superior de la solución y el agua
quedo separada de estos ubicándose en la
parte inferior de la solución. En otro tubo
de ensayo al agregar Sudan III con grasa
animal, al instante la solución tomó una
coloración rojiza en la que la grasa y el
reactivo se disolvieron por completo.

- En la determinación del colesterol, se

- En la observación de polisacáridos los
observaron cambios de coloración, como
resultados obtenidos con la presencia de
en la yema de huevo que se tornó de color
una suspensión acuosa de almidón de 2 ml
café oscuro. Esta coloración determinó la
y 2 gotas de Lugol en la solución, se
presencia del colesterol (Figura 17).
presentó una coloración oscura, que luego
al calentarse hasta ebullición, tomo una
coloración naranja y al dejarse enfriar, la
Para finalizar, Mediante esta práctica se
solución volvió a coloración oscura
lograron identificar de manera cualitativa
(Figura 8). En otra solución al depositarse
la presencia de algunos componentes que
dos gotas de Lugol en macerado de pan, se
se encuentran en el protoplasma celular.
tornó una coloración blanca, que, al
Entre los cuales se encuentran los
calentarse hasta ebullición, tomó un color
carbohidratos, proteínas, lípidos y
blanco violáceo (Figura 9).
colesterol, los cuales fueron identificados
durante el desarrollo de la práctica. Esto se
logró por la presencia de reactivos que
- En la identificación de proteínas, al
permitieron la identificación de estos
colocar 2ml de gelatina con dos gotas de
compuestos celulares, como por ejemplo
sulfato de cobre y 1ml de hidróxido de
el de Benedict que nos sirvió para la
sodio, se logró observar una coloración
identificación de monosacáridos y
violeta (Figura 11).
polisacáridos; utilizamos unos compuestos
químicos que permitieron una disolución
la cual permite identificar las proteínas,
- En la observación de lípidos, al agregar otro reactivo utilizado fue el Sudan III,
en 3 ml de agua Sudan III, la mezcla no se gracias a este identificamos los lípidos,
disolvió, es decir, que se presentó una debido a su gran afinidad con estos.
mezcla heterogénea en la que el Sudan III
cambió a un color rojizo y se ubicó en la
parte superior de la solución y el agua se
mantuvo en la parte inferior de la solución.
En el mismo tubo, al adicionar aceite
vegetal se logró observar una mezcla en la
 CUESTIONARIO
1. ¿Qué es un azúcar reductor?
R/ son aquellos azúcares que poseen su
grupo carbonilo intacto, y que a través del
mismo pueden reaccionar como
reductores con otras moléculas. Los
azúcares reductores provocan la
alteración de las proteínas mediante la
reacción de glucosilación no enzimática
también denominada reacción de
Maillard o glicación. Esta reacción se
produce en varias etapas: las iniciales son
reversibles y se completan en tiempos
relativamente cortos, mientras que las
posteriores transcurren más lentamente y
son irreversibles.
2. Cite ejemplos de azucares reductores y
no reductores
R/ Azucares reductores: La glucosa es el
azúcar reductor más abundante en el
organismo.
Azucares no reductores: cuando 2
monosacáridos iguales o diferentes se
unen forman un disacárido, los disacáridos
por condensación liberan una molécula de
agua y son azúcares no reductores.
3. ¿Cuáles son los componentes del
reactivo de Benedict?
R/ El reactivo de Benedict está compuesto
por:
Sulfato cúprico.
Citrato de sodio.
Carbonato anhidro de sodio.
4. ¿Qué reacción se produce cuando se
calienta el tubo de ensayo que contiene el
reactivo de Benedict y glucosa?
R/ La solución de Benedict es de color azul
claro porque contiene sulfato de cobre.
Cuando se mezcla y se calienta con un
azúcar, como la glucosa, la cual tiene
electrones disponibles para donar, el cobre
acepta estos electrones y se reduce, con lo
cual se vuelve marrón anaranjado. Durante
este proceso, el ion cobre azul (II) se
reduce a ion cobre rojo (I). Mientras que el
cobre se reduce, la glucosa dona un
electrón y se oxida.
5. ¿Cuál es la naturaleza del precipitado de
color rojo ladrillo que se forma en la
anterior reacción?
R/ La naturaleza del cambio de color del
reactivo por una azúcar se debe a su
clasificación de azucares reductores, como
se menciono anteriormente las azucares
reductores son aquellas que tienen su
grupo hidróxido del C anomérico, en un
medio alcalino, el ión cúprico (otorgado
por el sulfato cúprico) es capaz de
reducirse por efecto del grupo aldehído del
azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este
nuevo ion se observa como un precipitado
rojo ladrillo correspondiente al óxido
cuproso (Cu2O), que precipita de la
solución alcalina con un color rojo-
naranja, a este precipitado se lo considera
como la evidencia de que existe un azúcar
reductor.
6. ¿Cuál es la composición química del
Lugol?
R/ El Lugol es una disolución de yodo
molecular I2 y yoduro potásico KI en agua
destilada.
Para una preparación más exacta se puede
considerar lo siguiente:
Iodo 5 gramos
Ioduro de potasio 10 gramos.
agua destilada 85 gramos.
7. ¿A qué se debe la desaparición del color
azul violáceo de la solución de almidón
cuando se calienta hasta ebullición?
R/ El calentamiento de esta solución
(almidón con Lugol), al calentarse con el
mechero ira cambiando el color debido a
que el calor desnaturaliza la estructura
helicoidal y desaparece el efecto óptico.
EL COLOR SE DEBE POR LA
RUPTURA DE LA ESTRUCTURA
HELICOIDAL DEL AZUCAR CON EL
YODO.
8. ¿Por qué aparece nuevamente el color
cuando la anterior solución se enfría?
R/ Si enfriamos el tubo introduciéndolo en
un Erlenmeyer grande con agua fría,
volverá a aparecer el color azul-violáceo
con menos intensidad porque, al calentar
el líquido, parte del I habrá pasado a la
atmósfera.
9. ¿En qué consiste la reacción del biuret?
R/ La reacción o prueba de Biuret es un
método que detecta la presencia de
compuestos con dos o más enlaces
peptídicos y, por tanto, sirve para todas las
proteínas y péptidos cortos. El reactivo del
biuret (sulfato de cobre en una base fuerte)
reacciona con los enlaces del péptido y
cambia el color cuando entra en contacto
con otra sustancia. El reactivo de Biuret
consiste en una solución acuosa de sulfato
cúprico (CuSO4) en medio alcalino
(NaOH). Este reactivo da un ensayo
positivo con los enlaces peptídicos entre
aminoácidos, cuando la solución queda de
color violeta. Esto se debe a que el cobre
tiene la propiedad de formar iones
complejos, especialmente entre los enlaces
peptídicos.
10. ¿En qué consiste la reacción
xantoproteica?
R/ La reacción xantoproteica es un método
que se puede utilizar para determinar la
presencia de proteínas solubles en una
solución, empleando ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado
positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos
aromáticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un álcali, se torna color
amarillo oscuro. La reacción xantoproteica
se puede considerar como una sustitución
electrofílica aromática de los residuos de
tirosina de las proteínas por el ácido nítrico
dando un compuesto coloreado amarillo a
pH ácido. Según las guías químicas es una
reacción cualitativa, mas no cuantitativa.
por ende, determina la presencia o no de
proteínas. para cuantificar se usa otra
reacción, como la de biuret, se hace un
análisis espectro fotométrico.
11. ¿Que es el Sudan III? Un-Metodo-Que-Detecta-La-Presencia-
de-Compuestos-Con-Dos-o-Mas-Enlaces-
R/ es un tinte diazo del tipo lisocromo
Peptidicos-
(tinte soluble en grasa) usado para marcar
y?fbclid=IwAR2_CwgWHRQhNukY09X
triglicéridos en secciones congeladas,
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algunos lípidos y lipoproteínas
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encuadernados de la proteína en secciones
de la parafina. Tiene el aspecto de cristales https://sites.google.com/site/trabajosbioqu
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