BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS:

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CARBOHIDRATOS, LÍPIDOS Y PROTEÍNAS

ESTRATEGIAS DE ENSEÑANZA-APRENDIZAJE PARA DESARROLLAR LA PRÁCTICA

Fase de apertura. Tiempo: 15 min

1. Toma la asistencia en aula virtual.

2. El docente declara las capacidades a desarrollar:
a. Determina en forma cualitativa la presencia de compuestos de carbono en materiales biológicos,
identificar de qué clase/tipo de molécula se trata, a través de reacciones químicas.
b. Relacionar las estructuras de las biomoléculas orgánicas con las funciones que estas desempeñan en
las células.
c. Determina la actividad enzimática de la catalasa.
d. Adquirir destreza en el manejo y cuidado del material de laboratorio.
3. Explicación de la práctica por parte del docente.

Fase de Desarrollo. Tiempo: 60 min

Realización de la práctica.

I. Introducción.
Las cuatro clases principales de moléculas biológicas orgánicas son los carbohidratos, los lípidos, las
proteínas y los ácidos nucleicos, y están compuestas por bloques de armado denominados monómeros,
a excepción de los lípidos que son un grupo muy heterogéneo. Los monómeros de los carbohidratos son
los azúcares simples, de las proteínas son los aminoácidos, y de los ácidos nucleicos los nucleótidos.
Algunos lípidos están compuestos por una molécula pequeña, el glicerol, unida covalentemente a ácidos
grasos. Muchas de estas biomoléculas pueden alcanzar gran tamaño a escala molecular, por los que se
las denomina macromoléculas.
Los carbohidratos son compuestos de gran importancia para los seres vivos, los cuales son muy
abundantes en la naturaleza. Las unidades básicas de los carbohidratos son los monosacáridos, los
cuales no hidrolizables en unidades más pequeñas. El principal monosacárido es la glucosa, una
aldohexosa, que es el combustible principal para la mayoría de los organismos. Los oligosacáridos
contienen de dos a diez unidades de monosacáridos unidas covalentemente. Por su parte, los
polisacáridos están constituidos por gran número de unidades de monosacáridos unidos
covalentemente, los cuales pueden alcanzar grandes pesos moleculares. Los polisacáridos desempeñan
dos funciones biológicas principales: almacenar energía metabólica y aportar elementos estructurales a
la célula. La glucosa actúa en el organismo como combustible energético de uso inmediato, mientras
polisacáridos y grasas son biomoléculas de reserva que deben ser catabolizadas antes de su
aprovechamiento como fuentes de energía. Los carbohidratos están ampliamente en organismos
vegetales y animales con funciones metabólicas y estructurales.
Los lípidos son grupos heterogéneos de compuestos que poseen una consistencia grasosa o
aceitosa, siendo más o menos insolubles en agua y saludables en disolventes orgánicos (como por
ejemplo: éter, cloroformo, benceno, etc.). Entre los lípidos de importancia biológicas se encuentran los
triacilgliceroles, fosfolípidos, esteroides, etc. Estas moléculas son combustibles biológicos importantes,
sirven de componentes estructurales de las membranas celulares y algunas son importantes.

1 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.

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Los lípidos más abundantes en los seres vivos son los triacilgliceroles (grasas neutras). Ellos
producen más del doble de energía por gramo, que los carbohidratos por lo que son una forma
económica de almacenar reservas alimenticias
Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras células. Los aminoácidos
son los ladrillos de construcción de las proteínas. Los aminoácidos se agrupan de acuerdo con su
comportamiento químico. La síntesis de las proteínas ocurren mediante la unión entre si de las cadenas
de aminoácidos. Los distintos aminoácidos imparten diferentes comportamientos químicos en la
estructura de las proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas
las proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando productos coloreados.
Entre las funciones dinámicas de las proteínas se encuentran el transporte de sustancias, el control
metabólico, la contracción, la comunicación y la catálisis de transformaciones químicas. En cuanto a sus
funciones estructurales, las proteínas proporcionan la matriz para los tejidos óseo y conjuntivo que dan
igualmente forma al organismo

II. Material.

Biológico Laboratorio Reactivos y soluciones

1 Huevo * (sol. albúmina) Pipetas de 1 y 5 ml Soluc. de glucosa al 1%
1 Aceite 125mL * Tubos de ensayos de 10 ml Soluc. de sacarosa al 1%
1 Papa * Vaso de precipitado de 500 ml Suspens. de almidón al 1%
Perita (propipeta) Reactivo de Fehling
Mechero Solución de lugol
Pinzas Hidróxido de sodio al 10%
Varilla de vidrio Solución de Sudan III
Gradillas Sulfato de Cobre
Con (*) material a traer por el estudiante el día del TP. Acetato de plomo

II. Instrucciones.
Es posible detectar por medio de pruebas bioquímicas colorimétricas, la presencia de estos
compuestos, ya sea en muestras obtenidas de tejidos animales o vegetales.
Reconocimiento de carbohidratos
Los carbohidratos comprenden azúcares simples (monosacáridos), sus polímeros (oligo y polisacáridos)
y pueden formar parte de otras moléculas orgánicas (ARN, ADN, entre otros.).
Distribuidos ampliamente en la naturaleza, los carbohidratos representan, en términos de masa, la clase
más abundante de biomoléculas orgánicas sobre la Tierra. Desempeñan varios papeles cruciales en los
organismos vivos. Cuando un organismo ingiere y metaboliza estos compuestos, los átomos se
reacomodan formando compuestos sencillos reutilizables.
a. Test para la detección de azúcares simples (monosacáridos)
Una de las propiedades más destacadas de los monosacáridos en general (glucosa, fructosa, etc.) y
de algunos disacáridos (sacarosa, lactosa, etc.) es el poder reductor que les confiere el grupo
funcional aldehído o cetona de sus moléculas. Esta propiedad de los azúcares se pone de
manifiesto frente a sales de cobre II (Cu++). El reactivo de Fehling es utilizado para detectar la
presencia de azúcares con capacidad reductora, tiene dos soluciones separadas (A y B), que se
mezclan en partes iguales en el momento de utilizarlo. La mezcla de las soluciones A y B de Fehling
es de color azul intenso (se les brindará el reactivo. de Fehling ya preparado). El resultado positivo
de la presencia de un azúcar reductor es la formación de un precipitado rojo ladrillo de óxido de
cobre (Cu2O). La reacción que ocurre es de tipo óxido-reducción, en la cual el grupo funcional
aldehído o cetona del azúcar reductor se oxida a ácido y el Cu++ se reduce a Cu+.

2 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.

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b. Test para la detección de polisacárido-almidón

El almidón es un polisacárido de reserva característico de los vegetales. Los polisacáridos son las
biomoléculas más abundantes de reserva de energía en la Tierra. En las células vegetales el almidón
se encuentra como una mezcla de amilopectina (80-90 %) y amilosa (10-20%). Esta última se
colorea de azul violeta en presencia de una solución de iodo llamado reactivo de lugol, debido a
una reacción física (no química) de adsorción. La molécula de iodo (I 2), se introduce en la estructura
helicoidal de la molécula de almidón dando como resultado el color violáceo.

Reconocimiento de lípidos
A diferencia de los carbohidratos y proteínas, los lípidos tienen diversas estructuras y funciones, pero
sus características de solubilidad son semejantes entre ellos. Se definen operacionalmente como
compuestos orgánicos insolubles en agua o ligeramente solubles, que se encuentran en los sistemas
biológicos. Los lípidos son hidrofóbicos (no polares) y/o anfipáticos (que tienen componentes polares y
no polares).
Test para la detección de lípidos
Sudán III es un colorante soluble en grasa que permite identificar la presencia de lípidos. Pertenece al
grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por estructuras ácidas o
básicas. El colorante (rojo) es insoluble en el agua y tiñe del mismo color aquellas sustancias que tienen
un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante.

Reconocimiento de proteínas
Existen reacciones de coloración que son específicas para los aminoácidos de las proteínas; así como
reacciones generales que sirven para caracterizar grupos comunes a todas las proteínas, como grupos
amino o uniones peptídicas (ninhidrina y biuret)
a. Test para la detección de proteínas
La reacción de Biuret indica la presencia de enlaces peptídicos, por lo cual no sirve para identificar
aminoácidos. Todas las proteínas reaccionan en medio alcalino cuando se agrega sulfato cúprico
(CuSO4) y da colores que varían del violeta al rosado. El color depende del grado de hidrólisis
alcanzado. Los péptidos más pequeños y los aminoácidos libres no dan color. Por lo tanto, se utiliza
para seguir la hidrólisis de una proteína.
b. Desnaturalización de Proteínas: Precipitación por formación de sales
Las sales de metales pesados precipitan las proteínas porque el ion del metal pesado muy
probablemente se combina con la forma aniónica de la proteína. La proteína en el lado alcalino de
su punto isoeléctrico existe como ión negativo y así al combinarse con el ión del metal o catión,
formará proteinatos de por ejemplo proteinato de mercurio, proteinato de plomo, proteinato de
plata, etc. En cambio los reactivos alcaloidales precipitan las proteínas al combinarse el radical
acídico del reactivo alcaloidal con la forma catiónica de la proteína que predomina en él lado ácido
del punto isoeléctrico. Se forma entonces precipitados que podríamos llamar por ejemplo tanato
de proteína, fosfomolibdato de proteína, etc.

Actividad enzimática de la catalasa

La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales y
vegetales. Actúa sobre el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada: H 2O2), degradándolo en agua y
oxígeno, y liberando energía en forma de calor. El H2O2, es un producto secundario del gran número de
reacciones metabólicas que ocurren en casi todos los seres vivos y si no se destruye puede ser tóxica
para la célula. Si se pone un tejido en contacto con el agua oxigenada se observa la aparición de
efervescencia (producción de oxígeno).

3 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.

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Protocolo para la determinación de las biomoléculas orgánicas.

Carbohidratos Lípidos Proteínas Enzimas

Materiales 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol. de glucosa (mL) 3 - - - - - - - -
Sol. de sacarosa (mL) - 3 - - - - - -
Sol. de almidón (mL) - - 3 - - - - -
Aceite - - - 3 3 - - - -
Albúmina (clara de huevo) - - - - - 5 5 - -
Papa cruda (trocitos) - - - - - - - x -
Papa cocida (trocitos) - - - - - - - - x
Rx. de Fehling (mL) 5 5 - - - - - - -
Sol. de Lugol (gotas) - -- 5 - - - - -
Sudán III (gotas) - - - 10 - - - - -
Bencina (mL) - - - - 3 - - - -
Hidróxido de sodio (mL) - - - - - 3 - -
Sulfato de cobre (mL) - - - - - 3 - -
Nitrato de plata (mL) - - - - - - 3 - -
Agua Oxigenada - - - - - - - 5 5
Calentar a ebullición x x - - - - - - -
Qué ocurrió?, registren lo observado
(+/-)

V. Resultados.

4 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.

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Fase de cierre. Tiempo: 25 min

 Se concluye la práctica con una retroalimentación docente-alumno y el docente refuerza cualquier duda
de los estudiantes.
 El docente evalúa la práctica desarrollada mediante una prueba escrita.
 El docente señala que la siguiente clase se desarrollará el tema de microscopía, menciona los materiales
que deben traer para dicha práctica; así como recomienda a los estudiantes descargar de aula virtual,
con anticipación, el protocolo de la práctica.
 El docente da a conocer la tarea a desarrollar, que será presentada en la siguiente sesión práctica.

Evidencia. Instrumento de evaluación.

- Informe de la práctica, resumen o mapa - Asistencia
- Sustentación del tema desarrollado - Rúbricas para evaluar el informe.

Fuentes de Consulta

Páginas WEB de apoyo.

- Archivos en pdf sobre biomoléculas orgánicxas
 Detección de biomoléculas en los alimentos
http://oxfordinicia.es/pdf/Libro-DUAL-
impreso/Ciencias_Aplicadas_a_la_Actividad_Profesional_4_ESO.pdf
 Arias X. et. al. Apuntes de Biomoléculas. Azúcares
https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/10/apuntes-azucares-kine-2013.pdf
 Arias X. et. al. Apuntes de Biomoléculas. Lípidos
https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/10/apuntes-lipidos-bioq-enf-2013.pdf
 Arias X. et. al. Apuntes de Biomoléculas. Proteínas
https://profesoramaribelarnes.files.wordpress.com/2009/10/apuntes-proteinas-org2010.pdf
 Audesirk et. Al. Biología. La vida en la tierra. Cáp. 3 Biomoléculas
https://biologiaccadinarte11mogrado.files.wordpress.com/2017/01/biologc3ada_la_vida_en_la_tierr
a_con_fisiologc3ada_9c2ba_edicic3b3n_.pdf
 Feduchi. E. Bioquímica. 2015. Edit. Médica Panamericana. Cap. 3. Lípidos.
http://www.herrerobooks.com/pdf/pan/9788498358759.pdf
 Mc Kee. Bioquímica. Capítulo 5 Aminoácidos péptidos y proteínas
http://biblio3.url.edu.gt/Publi/Libros/2013/Bioquimica/08-O.pdf
 Murray R. et al. Harper. Bioquímica Ilustrada 29ª ed. Editorial McGraw-Hill.
https://bibliotecavirtualaserena.files.wordpress.com/2018/02/harper_bioquimica_ilustrada_29c2aa_
ed_booksmedicos-org.pdf
 Roca P. et al. Bioquímica técnicas y Métodos
http://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/bqtym.pdf
 Tymockzo J. L. et al. Bioquímica
http://www.herrerobooks.com/pdf/REVE/9788429176032.pdf
- Videos sobre determinación de biomoléculas
https://www.youtube.com/watch?v=vi2UAr2RrNE
https://www.youtube.com/watch?v=48p9QdKgr8M
https://www.youtube.com/watch?v=xPIYaV_OJUQ
https://www.youtube.com/watch?v=ufec89A47uM
https://www.youtube.com/watch?v=J7glsbXAmdU

5 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.

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TAREAS

Resuelve las siguientes preguntas

1. El 64% de los peruanos no tolera la lactosa, esto ocasiona náuseas, vómitos y dolor abdominal cuando se
consume leche. ¿Por qué se produce la intolerancia a la lactosa? ¿Por qué es bueno o no consumir leche?
2. Porque si el almidón y la celulosa están
hechas de glucosa son dos polisacáridos
diferentes?. Si ingerimos almidón aumenta
el nivel de glucosa en sangre, en cambio al
ingerir celulosa esto no sucede?. Porque.
3. El gráfico que figura a continuación,
muestra el consumo de azúcar y la cantidad
de caries en diversos países. Cada país está
representado un punto en el gráfico.
Intreprete los resultados

4. Analiza el siguiente gráfico.

a) Qué puede interpretar a
partir de los resultados
del gráfico?
b) Averigua qué es la
aterosclerosis.
c) Qué relación existe entre
la aterosclerosis y los
niveles sanguíneos de
colesterol?

5. Interpreta y analiza la información que

entrega cada gráfico. Trata de explicar el
concepto de pH óptimo. ¿Son los mismos
para las dos enzimas?

6 Práctica 2: Identificación de biomoléculas orgánicas P.C.