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MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
REALIZADO POR:
AREQUIPA – PERÚ
2021
PREGUNTA 1.
Fig1. Representación gráfica del colorante azul de lactofenol, frotis teñido con azul de
lactofenol, preparación montada en el microscopio.
● Ácido láctico.
● Azul de anilina o azul de metilo
● Glicerina
● Fenol.
● Agua desionizada o destilada.
La concentración de sus componentes hace que sea ideal para teñir a las estructuras fúngicas,
debido a que el fenol elimina al microbiota bacteriano acompañante, mientras que el ácido
láctico genera una película protectora alrededor de la estructura fúngica. Finalmente, el azul de
anilina tiene afinidad para adherirse a las estructuras del hongo. Con el azul de lactofenol se
realiza una coloración simple de las estructuras fúngicas de un determinado cultivo micológico.
Se llama simple porque utiliza un solo colorante, también actúa como clarificante de la muestra,
gracias a la acción conjunta del ácido láctico y el fenol, además el fenol se comporta como un
mordiente y a la vez evita la lisis del microorganismo al inhibir las enzimas hidrolíticas que
puedan estar presentes. Mientras que el ácido láctico preserva la morfología de las estructuras
del hongo. Por otra parte, el azul de anilina tiene la propiedad de adherirse o fijarse a las
estructuras que contienen quitina. Las estructuras se tiñen de color azul claro. Cabe destacar
que la pared celular de los microorganismos fúngicos, especialmente los mohos, contienen
quitina, siendo por ello que este colorante es ideal para teñir a estos microorganismos.
● Se toma un cultivo puro del hongo al cual se le quieren observar sus estructuras.
● Se trabaja preferiblemente en una campana de flujo laminar, o bajo el mechero,
utilizando tapaboca y guantes, ya que es necesario cumplir con normas de
bioseguridad, porque la mayoría de los mohos son fáciles para diseminarse en
el ambiente y por tanto representan un peligro para el operador.
● En un portaobjeto se coloca una gota de azul de lactofenol.
● Se corta un cuadrito de cinta adhesiva de buena calidad y con mucho cuidado
se adhiere en el extremo del asa de platino ya esterilizada y fría.
● Se acerca el asa de platino a la parte más superficial de la colonia fúngica y con
mucho cuidado se toca el cultivo, exactamente donde se encuentra la pega de la
cinta adhesiva.
● Luego se lleva al portaobjeto y se coloca justo sobre la gota de azul de
lactofenol, cuidando que la cinta quede perfectamente extendida y lubricada con
el colorante. Con mucha delicadeza se retira el asa de platino.
● Se coloca otra gota de azul de lactofenol sobre la cinta y encima un cubreobjeto.
No se debe ejercer demasiada presión para no destruir las estructuras del hongo,
ya que estas son extremadamente frágiles. Se debe dejar actuar el colorante por
3 a 4 minutos aproximadamente.
● Luego de este tiempo, ya la preparación está lista para ser observada al
microscopio en aumento de 10X o 40X. Si se requiere la observación a 100X se
debe utilizar aceite de inmersión.
● Las estructuras del hongo, por lo general, se observan teñidas de color azul, a
excepción de los hongos dematiáceos que conservarán su coloración café
característica de este tipo de hongos.
Figura 3. Aspergillus
PREGUNTA 2.
2.1 Safranina:
Son técnicas que utilizan dos o más colorantes y/o principios activos.
● Tinción de Gram.
● Tinción de Schiff.
● Tinción Ziehl-Neelsen:
En el caso de los hongos producen dos tipos de esporas: las esporangiosporas y las
conidias que se encargan de la dispersión y supervivencia de este organismo, además
forman clamidosporas y esclerocios que están constituidas por el micelio, muy
importantes para preservar la especie por ser estructuras de apoyo y resistencia. Las
esporangiosporas se dividen en zoosporas que se desarrollan dentro de un esporangio y
madura en la pared de este, ya que carecen de una pared celular real, pero cuentan con
uno o dos flagelos móviles y se desplazan rápidamente al usar reservas endógenas.
PREGUNTA 4.
Algunas diferencias principales que podemos destacar entre los hongos y levaduras, es
que esta última es un organismo unicelular, además posee una forma redondeada, en
cuanto a su reproducción se da a través de la brotación, ahora bien, con respecto a su
uso se emplean en la industria panadera y en la producción de etanol. Por otro lado, en
el caso de los hongos son organismos multicelulares, estos presentan hifas filamentosas,
así mismo en cuanto a su reproducción se da a través de esporas sexuales o asexuales y
sus principales usos se presentan en la producción de queso y antibióticos.
PREGUNTA 5.
Teniendo en cuenta que agar de papa y dextrosa (APD) o en inglés Potato Dextrose
Agar (PDA), es un caldo de papa y dextrosa; estos son medios comunes de cultivo
microbiológico, sobre todo para el crecimiento de hongos y levaduras.
Para realizar el Agar PDA, utilizamos: papa huayro pelada y trozada; agua; gelatina sin
sabor; colador y envases estériles.
1. Iniciamos pelando y cortando la papa huayro, para después poder hervirla y obtener
el “caldo de papa”.
6. Dejamos el agar PDA, abierto por una hora en una zona cualquiera; en este caso se
eligió encima del refrigerador; y en el Agar PDA-H agregamos el hongo encontrado.
7. Lo único que se logró conseguir para poder realizar este procedimiento fue una
manzana que tenía pequeñas apariciones de vellocidades blancas en una parte
superior, fue justo esa parte la cual se introdujo en nuestro Agar PDA.
Figura 13. Manzana hongueada.
8. Finalizando este proceso se coloca en una zona oscura, en este caso fue en la parte
inferior de donde se lavan los platos.
9. Seguido después de la hora debida del Agar PDA al aire libre, también se coloca
en este sitio.
AGAR PDA – H: En estos dos días no se pudo observar mucho salvo unos pequeños
puntos blancos y un pequeño punto negro.
AGAR PDA: No se notó mucho cambio en este medio, salvo un poco de una
apariencia de “sudoración”, y unos pequeños puntos porosos en la parte superior.
AGAR PDA – H: Este día se notó como una pequeña bolsa de aire en el centro del
cultivo, acompañado de pequeños rasgos blancos alrededor, y un poco suelta en la
textura.
AGAR PDA: En este día se pudo observar pequeños puntos blancos, y un pequeño
crecimiento verde en un lado del envase.
AGAR PDA – H: Se aprecia que la muestra no presenta muchos cambios, salvo que la
textura del medio se hizo líquida en la parte superior, y se noto un poco de rasgos de
sudoración; por otra parte se siguieron notando algunos puntos oscuros dentro de la
muestra.
AGAR PDA: Se pudo observar un pequeño crecimiento del punto verde que se observó
el día anterior, también se apreció otro punto oscuro al otro extremo del envase; así como
más puntos blancos en la parte interna del medio.
AGAR PDA – H: El Agar PDA donde se colocó hongos, no tuvo mucha diferencia más
que se volvió líquida toda la parte superior, y aún hay algunos rasgos de puntos verdes en
el fondo del medio.
AGAR PDA: El pequeño crecimiento que se estaba dando en el medio fue influenciado
por el medio líquido que se convirtió la parte superior y no tiene un punto fijo; por otra
parte, se aprecia todavía un pequeño punto verde del anterior día un poco más grande.
AGAR PDA: A la semana este fue el único medio, el cual se pudo apreciar una pequeña
proliferación de los hongos. A pesar de ello en estos días se pudo apreciar que la muestra
mostraba cierta textura líquida, la cual a las finales se hizo más grande interrumpiendo la
proliferación de los hongos.
BIBLIOGRAFÍA
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