UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTIN – Tarapoto

FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

DEPARTAMENTO ACADEMICO PROFESIONAL DE

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

TEMA : OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA

DE: BACTERIAS, MOHOS Y LEVADURAS

INTEGRANTES : NEIVER GUEVARA CORONEL

DOCENTE : INGº M. SC. ROXANA TRUJILLO VALDERRAMA

CICLO : IV

TARAPOTO-PERU

2021
 I. INTRODUCCION.
El cuerpo humano es una gran superficie cutánea y mucosa por la que entra en
contacto con el medio ambiente. En la superficie existen diversos sectores, donde
residen microorganismos con diferentes características de humedad, temperatura, pH
y disponibilidad de nutrientes.

La flora humana normal, es el conjunto de gérmenes que conviven con el huésped en

estado normal, sin causarle enfermedad. Su composición es característica para la
especie humana, tanto en los gérmenes que la componen en su número y distribución
en el organismo. La flora normal coloniza las superficies cutáneomucosas normales;
por otro lado, en el organismo existen sectores que son estériles en condiciones
normales, por ejemplo, la pleura, meninges, cavidad peritoneal, pericardio, etc.

La flora basal es la característica de cada sector del organismo y está constituida por
gérmenes que siempre están presentes en ese sector. Por ejemplo, Staphylococcus
epidermis en la piel, la Escherichia coli, en el intestino. En cambio, la flora transitoria
es variable de un ser humano a otro y está compuesta por gérmenes que colonizan
en forma intermitente un determinado sector; esta flora puede incluir bacterias
potencialmente patógenas para el propio individuo u otras personas que entran en
contacto con él.

La morfología de las bacterias es importante porque permiten distinguir las diversas

formas, bacilar, cocos, espirilos, espiroquetas, sarcinas, diplococos, etc. Se debe
tener mucho cuidado al preparar la muestra de alimento, la fijación por aplicación de
calor a la lámina porta objeto luego la coloración, teniendo en cuenta elementos
estructurales básicos que son necesarios para su identificación, como, por ejemplo:
pared celular, cápsula, espora, flagelos, Gram, etc. y así poder lograr una buena
observación de la morfología bacteriana.

Los hongos, un grupo heterogéneo, de organismos eucariotas, heterótrofos no

fotosintéticos, con pared celular. Basándose en la apariencia macroscópica de la
colonia se puede diferenciar dos tipos de hongos: si producen colonias opacas,
cremosas o pastosas se denominan LEVADURAS; si producen crecimientos aéreos,
algodonosos o filamentosos, se denominan MOHOS.

El conjunto de elementos que constituyen un hongo se denomina talo, el talo puede

ser unicelular (en levaduras): en los mohos el talo incluye una parte vegetativa, el
micelio, compuesta por hifas y una parte reproductora. Las hifas son tubos que
contienen núcleo y citoplasma. El micelio puede ser tabicado y no tabicado.

El crecimiento saprofítico de los hongos puede ser dañino y causar cuantiosas

pérdidas si ocurre en materias primas industriales, además producen micotoxinas
altamente toxigénicos y en algunos casos carcinógenos; son importantes en las
fermentaciones industriales para la producción de cerveza, vino, pan, antibióticos,
vitaminas y ácidos orgánicos.
 II. OBJETIVOS.
- Adiestrar al estudiante en el cultivo de microorganismos (bacterias y hongos).
- Conocer la diversidad de microorganismos que están presentes en el medio
ambiente.

- Observar el crecimiento de las colonias de microorganismos en diferentes medios

de cultivo a partir de diferentes muestras de alimentos.
- Observar la morfología macroscópica microbiana y aprender a diferenciar los
distintos tipos.
- Observar la morfología microbiana en nuestras teñidas a diferenciar los distintos
tipos.
- Utilizar correctamente el microscopio.

III. MATERIALES Y MÉTODOS.

Materiales.
Equipo: Microscopio
Material de vidrio: Placas Petri, laminas portaobjeto, laminas cubreobjetos.
Colorante para tinción: solución de cristal violeta 1%, solución de safranina, solución
de azul de metileno al 1 %.
Otros: medios de cultivo, mechero de alcohol, asa bacteriológica, aceite de inmersión,
pinzas de madera, fosforo y detergente
Muestras de alimentos: yogurt, vinagre, frutas y verduras.

Procedimiento.
La observación macroscópica de los microrganismos, se realizarán observando la
morfología de las colonias que crecen en los medios de cultivo; y la observación
microscópica, se realizaran en muestras fijadas y teñidas.

1. MICROOSGANISMOS DEL AMBIENTE DE TRABAJO.

Con medios de cultivo paqueteados (Agar Nutritivo, Oxitetraciclina Glucosa Agar y
Agar Mac Conkey).

Abrir las placas con el medio de cultivo y recorra el ambiente del laboratorio, cierre
las placas e incubar en la estufa o lo que indique el profesor. Observar el
crecimiento de los microorganismos sobre el medio de cultivo con la ayuda de una
lupa o a simple vista.

Esquematizar los resultados y realizar coloraciones (simples o Gram).

2. MICROORGANISMO DE LOS ALIMENTOS.

- Poner diferentes muestras de alimentos, sobre filtros de papel húmedo.
- Introducir en bolsa plásticas (como si fueran cámaras húmedas).
- Dejar las muestras en un lugar tibio por unos días.
- Observar y esquematizar los resultados.

3. BACTERIAS DEL YOGUR.

Este es un producto lácteo producido por la fermentación de la leche, añadiendo
una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco
productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, buen
productor de ácido láctico, manteniendo a temperaturas que oscilan entre 40–45ºc.
 - Disolver una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua
- Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
- Teñir con un colorante cualquiera de los ya mencionados durante 1-2 minutos
- Observar al microscopio.

En el experimento se podrá observar dos morfologías distintas de bacterias (cocos

y bacilos).

4. BACTERIAS DEL VINAGRE.

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la
fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La
acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético,
principalmente Acetobacter aceti, y también por especies del género
Gluconobacter.

- Disolver una pequeña cantidad de muestra con una gota de agua en una lámina
porta objeto y entender
- Dejar secar y fijar con calor.
- Teñir con un colorante cualquiera de los mencionados durante 1-2 minutos.
- Observar al microscopio.

En el experimento se observará la presencia de bacilos rectos con flagelos polares.

5. LEVADURAS DEL VINO.

El vino de uva es elaborado a partir de zumo o jugo de uva por acción de levaduras
(Saccharomyces ellipsoideus), que transforman la glucosa y fructosa del zumo a
alcohol etílico y anhídrido carbónico, en ausencia de oxígeno.

- Disolver una pequeña cantidad de muestra con una gota de agua en una lámina
porta-objeto y extender.
- Dejar secar y fijar con calor.
- Teñir con un colorante de los mencionados 1-2 minutos
- Observar al microscopio.

En este experimento se observará levaduras esféricas ovoides y alimonadas

IV. Resultados
En el video nos muestra que para poder observar las bacteria del yogurt
debemos hacer tinción simple usamos el microscopio para observar
empleamos azul de metileno usamos un mechero y asa de siembra
hacemos un pequeña muestra de yogurt. Fijamos la bacteria con color y
pasamos el porta objetos por encima del mechero y luego añadimos el
azul de metileno para que tiña a todas bacterias lavamos solamente con
agua pero no por mucho añadimos alcohol para adelgazará la muestra
finalmente lavamos con agua y luego observamos en el microscopio
buscando con el objetivo de inmersión y finalmente las bacterias tienen
un color azulado por el azul de metileno.
V. Discusión
En la práctica en cómo se desarrolló vía online lo que se puede decir en
una discusión de acuerdo a los videos que observamos es que para
poder desarrollar bien una práctica debemos tener nuestros materiales
a nuestro alcance y todos en un buen lugar, con una buena limpieza.
 VI. Conclusiones
Las conclusiones es que cuando desarrollemos una practica presencial
debemos poner atención para poder trabajar bien con nuestro equipo
seleccionado en dicho laboratorio.
VII. Referencias Bibliográficas
Guia de laboratorio de microbiología agroindustrial.
VIII. Anexos.

a. CUESTIONARIO.

1. ¿Por qué es importante estudiar a los microrganismos?

El conocimiento de los microorganismos ha servido para evitar pérdidas
económicas en cosechas de productos agrícolas, al conocer
los microorganismos patógenos que infectan y dañan los cultivos y poder
saber cómo controlar o evitar que estos microorganismos ataquen los cultivos.
2. Porqué es necesario con algunas muestras, fijar y teñir para observar al
microscopio.
Es necesario porque estos aumentan el contraste, para adherirse y lograr una
mejor visibilidad, siempre y cuando deben usarse con precaución.
3. ¿Por qué es necesario añadir aceite de inmersión y observar con el
objetivo de inmersión cuando se trabaja con muestras fijas?
Se utiliza el aceite de inmersión para no dañar la lente del objetivo ya que en
ese aumento el portaobjeto choca con la lente y se puede rayar.
4. ¿Explicar sobre los métodos de tinción que se utilizan en la
microbiología?
- TINCIONES SIMPLES
USOS: Únicamente se usa un colorante, proporciona el contraste para
observar mejor un organismo completo.
TECNICA:
Se tiñe con color básico, durante unos 5 min. Aclarar brevemente con agua, se
tiñen casi toda la bacteria, la mayoría de los tejidos no se tiñen.
- TINCIONES DIFERENCIALES
USOS:
- TINCION DE GRAN: se usa dos o más colorantes distinguen entre bacteria
gran positivas y negativas

TECNICA:
Se cubre la preparación de bacterias fijadas con cristal violeta,
después con solución de yodo, todas las células quedan teñidas
de color violeta oscuro. Las células Gram positivas permanecen teñidas pero
las negativas pierden el colorante.
- TINCION DE AC. ALCOHOL RESIST: se usa colorante distinguen entre las
micro bacterias y el resto de bacterias.

TECNICA:
Se tiñen todas las células con fucsina básica y se calienta a emisión de vapores
durante 5 min. Todas las bacterias se tiñen de rojo. Se decolora con una mezcla de
alcohol- HCL las bacterias resistentes se tiñen de rojo, las demás se decoloran. Se
trata las bacterias aci- alcohol resistentes continúan rojo, las otras se tiñen azul.

- TINCIONES ESPECIFICAS

TINCION DE ESPORAS: Tiñe selectivamente las endosporas.

TECNICA:

Se cubre la separación con verde de malaquita y calienta a emisión de vapores

durante 60s. Se lava con agua 30s. y se tiñe con safranina las endosporas retienen el
color verde el resto se toma color rosa.

TINCION DE FLAGELOS; Permite observar los flagelos.

5. ¿Qué medios específicos se utilizan para el cultivo de bacterias y

hongos?
El medio más utilizado para el cultivo de los hongos es el de
SABOURAUD, que tiene un contenido alto de azúcar y un pH ligeramente
ácido. Los hongos patógenos a menudo son más exigentes para su cultivo y
requieren medios enriquecidos.
6. Porqué es necesario ajustar el pH de los medios de cultivo, ¿cuál es el
valor adecuado para bacterias y hongos?
Si se utiliza agua neutra y un medio deshidratado de buena calidad el pH del
medio usualmente quedará dentro de los límites adecuados, aun así, es
conveniente ajustar el pH lo que se puede hacer con un potenciómetro o en
su defecto con papel pH 4.0-7.0. Si el medio es sólido la medición y el
eventual ajuste se hace a 45°-50°C (aún está liquido) y en los medios líquidos
se hace a temperatura ambiente. La corrección del pH se efectúa con HCl o
NaOH 1N o 0.1 N tomando una muestra del medio de cultivo preparado y
estéril, se mide el pH y si fuera necesario se ajusta en la muestra calculando
después el volumen de ácido o base que sea requerido para el total de medio.
7. Qué morfología macroscópica y microscópica, ha observado en la
práctica, ¿teniendo en cuenta las muestras usadas?
ninguna por que solo se hizo clases online
8. Qué muestras recomendaría usar usted para esta práctica, que
determinaría, ¿explicar?
Aun no podría recomendarlo por el hecho que no se puede haces clases
presenciales