UNIVERSIDAD NACIONAL DE UCAYALI

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Escuela de Ingeniería Agroindustrial

INFORME N°01

 CURSO: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

 TEMA: LIMPIEZA Y ESTERILIZACION DE MATERIALES DE LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS.

 INTEGRANTES:

 Cindy Vargas Yumbato





 AÑO: 2

Pucallpa – Perú
 I. INTRODUCCION

Es importante saber que el laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y

estudiar microorganismos, por ende los experimentos de trabajo debe realizarse de acuerdo con
los estándares técnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiología.

Es importante recordar que la finalidad de nuestra primera práctica es realizar la limpieza y

esterilización de los materiales básicos, como los tubos de ensayo, la placa Petri, pipeta, matraz,
utilizando como desinfectante el agua destilada y el alcohol para eliminar toda sustancia que
pudiera ser dañina por otro agente químico.

La manipulación de los materiales se realizó con el debido cuidado por ser materiales rápidos de
romperse, siguiendo las instrucciones propias dada por la ingeniera Cristina, seguidamente a
través de un video mostrado en clases.

Los procedimientos de limpieza de superficies externas se utilizó; agua con detergente

seguidamente con algodón humedecido con solución desinfectante (alcohol 70% y agua destilada).
Se procedió a realizar la práctica sin ninguna dificultad siguiendo procedimiento por
procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiología con el fin de asegurar que
todo el grupo aprenda la realización de envoltura, esterilización y colocación adecuada de los
materiales.

El laboratorio quedo propiamente limpio y ordenado como nos entregó la persona a cargo.
II. OBJETIVOS

 Realizar adecuadamente la limpieza de los materiales y la correcta esterilización para

eliminar el riesgo de infectividad.

III. REVISION BIBLIOGRAFICA

3.1 MICROORGANISMO

Los microorganismos pueden ser eliminados, inhibidos o muertos por agentes físicos,
agentes químicos, o por procesos físicos y agentes quimio terapéuticos. Se dispone de
una gran variedad de técnicas y agentes que actúan de maneras diferentes y cada uno
tiene su aplicación y límite de uso. Un agente físico es una propiedad o condición que
causa un cambio, por ejemplo la temperatura, la presión, radiación y los filtros.

https://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo

Un agente químico es una sustancia que causa una reacción específica y que se
caracterizan por una estructura molecular típica, por ejemplo tenemos los
compuestos fenólicos, los alcoholes, alógenos (cloro y yodo), aldehídos, oxido de
etilo, fenoles. Un proceso físico es un procedimiento que causa un cambio, por
ejemplo la filtración la esterilización, incineración, higienización. Se utilizan varios
términos específicos para escribir a estos agentes y procesos.

Esterilización: El proceso que destruye todas las formas de vida se llama

esterilización. Un objeto estéril, en sentido microbiológico está libre de
microorganismo vivo. Un objeto ó una sustancia están estériles ó no está
estéril; no puede estar nunca semi estéril o casi estéril.
Desinfectante: Un agente, usualmente un producto químico que mata las
células vegetativas pero no necesariamente las formas es poruladas de los
microorganismos productores de enfermedades, se denomina un
desinfectante. El término se aplica comúnmente a sustancias usadas sobre
objetos inanimados. La desinfección es el proceso mediante el cual se
destruyen las células vegetativas pero no necesariamente las esporas de los
agentes infecciosos.
Antiséptico: Una sustancia que se opone a la infección (sepsis) o previene
crecimiento o acción de los microorganismos, bien sea destruyendo o bien
inhibiendo su crecimiento ó actividad, se denomina un antiséptico. El término
está usualmente asociado a sustancias aplicadas al cuerpo.
Higienización: Un agente que reduce la población microbiana hasta niveles
que se juzgan seguros para las exigencias de la salud pública se denomina un
higienizante, Usualmente es un agente químico que mata el 99.9% de las
 bacterias en crecimiento. Los higienizantes suelen aplicarse a objetos
inanimados y generalmente se emplean en el cuidado diario de equipos y
utensilios en las plantas lecheras y de preparación de alimentos, así como
para los vasos, platos y utensilios en los restaurantes. El proceso de
desinfección producirá higienización. Sin embargo en el sentido estricto,
higienización implica una condición sanitaria ó de limpieza cosa que la
infección no implica necesariamente.

3.2 FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIÓN DE LOS

MICROORGANISMOS
3.2.1 Temperatura:

Las temperaturas elevadas tienen efectos dañinos sobre los microorganismos

y se debe tener en cuenta que cuando, además de la temperatura, también se
utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos en la temperatura aceleran la
destrucción de los microorganismos. Por ejemplo, la muerte de una
suspensión bacteriana por fenol es mucho más rápida a 42ºC que a 30ºC.

3.2.2 Tipo de microorganismos:

Las especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los agentes

físicos y químicos. En las especies formadoras de esporas, las células
vegetativas son mucho más susceptibles que las formas esporuladas.

3.2.3 Estado fisiológico de las células:

El estado fisiológico de los microorganismos puede influenciar la

susceptibilidad a un agente antimicrobiano. Las células jóvenes,
metabólicamente activas, son más fácilmente destruidas que las células viejas
cuando el agente actúa interfiriendo con el metabolismo.

3.2.4 Ambiente.

Las propiedades físicas y químicas del medio o sustancia donde se encuentran

los microorganismos, también tienen una profunda influencia sobre la eficacia
de la destrucción microbiana, por ejemplo, el calor es mucho más eficaz en
materiales ácidos que en materiales alcalinos.

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/09-
factores%20de%20supervivencia.htm
3.3 AUTOCLAVE

Una autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con

un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una
reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su
construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en
su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas
superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor
produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas
las esenciales para la vida y la reproducción de éstos, hecho que lleva a su
destrucción.

https://es.wikipedia.org/wiki/Autoclave

3.3.1 Esterilización por calor húmedo

El calor húmedo como vapor saturado a presión es el método más

seguro y más utilizado. en la esterilización con calor húmedo la causa
dela muerte del microorganismo es distinta que la esterilización con
calor seco; en efecto con calor húmedo el microbio muere porque se
coagula la proteína celular, mientras que el calor seco destruye
principalmente por medio de un proceso de oxidación.

http://codeinep.org/wp-content/uploads/2017/02/ESTERILIZA-CALOR-
.pdf

3.3.2 Funcionamiento de un Autoclave

EL agua desmineralizada se encuentra inicialmente en un depósito (fig)

ligeramente elevado con el fin de que el agua baje por su propio peso hasta la
cámara. Supongamos un proceso automático.

Cuando iniciamos el ciclo el sistema electrónico da paso a través de la válvula

de llenado v1 a una cierta cantidad de agua al tiempo que se bloquea la
puerta. Secuencialmente se inicia el calentamiento del agua. En este instante
la válvula de purga, de funcionamiento térmico, permanece abierta
permitiendo al aire caliente fluir a su través hacia el exterior. De este modo se
llega a desalojar hasta un 25% del aire interior. Cuando a los 100 ºC el agua
comienza a hervir, empieza a formarse vapor saturado que va abandonando
paulatinamente la cámara a través de la citada válvula, condensándose en el
depósito recuperador. Como quiera que todo este proceso se realiza a 1 bar de
presión absoluta (0 bar manométrica), suponiendo que esa sea la presión
atmosférica en ese instante, a medida que aumenta el vapor formado parte
del aire también es expulsado. Una vez que toda el agua se ha evaporado
entonces comienza a incrementarse la temperatura. Cuando esta alcanza un
valor por encima de los 100 ºC la válvula de purga (también llamada
selectora) se cierra y la presión paulatinamente comienza a subir hasta
alcanzar 1 bar en el manómetro a la temperatura de 120 ºC. Aquí el calefactor
comienza a disminuir su emisión con el fin de mantener esta presión. En este
preciso instante arranca el temporizador de ciclo que según el fabricante va de
8 a 20 minutos. No es preciso decir que la comodidad ahorra tiempo pero el
riesgo lo pide. Es el propio doctor el que debe elegir según su criterio entre
unos u otros.

Una vez completado el ciclo se abre la válvula V2 permitiendo salir el vapor al

depósito de recuperación a través de un serpentín de condensación. Cuando la
presión se iguala a la atmosférica para algunos autoclaves comienza el proceso
de secado pero en todos es posible abrir la puerta y retirar utensilios. No es
recomendable precipitarse en la apertura de la cabina ya que los materiales
están todavía muy calientes y además favorecemos las condensaciones
indeseables. Siempre que un equipo disponga de fase de secado se debe
intentar cumplirla.

3.3.3 Parámetros de Autoclaves en general.

Los parámetros de control son la presión del vapor, el tiempo y la

temperatura a Presión del vapor.- Vapor saturado con un título de 0.95
(95% de vapor y 5% de condensado) y libre de impurezas, utilizando
agua blanda o tratada.

b. El tiempo y la temperatura.- Estarán en relación directa con el grosor

o el tipo de empaque definidos en los estándares establecidos por
organismos internacionales utilizaremos:
  121°C por 30 minutos

 134°C por 15minutos

Y en el caso de material de empaque denso o doble utilizaremos:

 121°C por 30 minutos

 134°C por 25 minutos.

 En las autoclaves de Pre-vacío, el material de superficie y empaque

denso y doble debe usarse: 134º C por 4 minutos.

3.4 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.4.1 MATERIALES
 Detergente
 03 tubos de ensayo
 04 placas Petri
 01 pipeta
 01 Matraz de 250 ml
 Algodón
 Agua destilada
 Alcohol
 Papel kraft
 Pabilo
 Autoclave a vapor
 Lapicero
 Libreta de notas
 Cámara fotográfica

3.4.2 PROCEDIMIENTO
 Limpiamos la mesa con detergente y agua para desinfectar el área,
seguidamente se utiliza el alcohol o agua destilada para librarnos de
cualquier agente químico que puede estar presente en la zona
 Lavar con detergente disuelto los 03 tubos de ensayo, las 04 placas
Petri, el matraz de 250ml, la pipeta, usando la escobilla para cada
material.
 Posteriormente se enjuaga con agua limpia todos los materiales ,
luego de ese procedimiento lavar con agua destilada a cada material
(placas Petri, tubos de ensayo, matraz)

 Seguidamente se procedió llevar todos los materiales a la estufa para

su respectivo secado a una temperatura de 180°C
 Siguiendo con el procedimiento, se pasó a realizar la envoltura de los
materiales con el papel kratf , en la placa Petri se usó 22x32 cm de
papel kraft, luego para su sellado el pabilo.
 seguidamente se Introduce una pequeña porción de algodón en el
cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente
apretada. Con tiras de papel de 4cm de ancho y 50cm de largo
envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia
arriba hasta el final de la pipeta.
 con los tubos de ensayo, se colocó 5cm de ancho y 7cm de largo de
algodón para sellar, seguidamente se procede envolver con papel
kraft y amarrarlo con pabilo.
 Para la envoltura del matraz se empleó la técnica de origami con
papel kraft de 20 cm de ancho y 14 cm de largo y de algodón 8cm de
ancho y 16cm de largo.
 Pasamos a preparar el autoclave, se llena el agua a altura de la rejilla.

 Colocar los materiales dentro del autoclave, arregle todos los paquetes,
en la recámara del autoclave de manera que el vapor se circule
libremente.
 Cerramos el autoclave la presión y temperatura debe llegar hasta
tiempo empiece a medir ( 121 °C por 30 minutos) del manómetro su
operación de esterilización es de 15 lbs, cuando haya llegado a ese
nivel se deberá controlar por los menos 20 minutos aproximadamente,
se apaga y esperar que se enfríe para poder abrirlo y sacar los
materiales

 Usando pinzas esterilizadas, saque del autoclave los paquetes, Para

impedir que se ocurra la condensación después de sacar los objetos
del autoclave, dejar que se enfríen antes de almacenarlos.
IV. CONCLUSION

 El material debe ser esterilizado para poder ser usado antes de cultivar microorganismos
porque de lo contrario podrían crecer otros organismos que no son requeridos.
 Aprendimos a envolver correctamente el material y el tiempo que es necesario para que
se logre la esterilización.
 El paquete debe preservar la esterilidad de su contenido hasta el momento de su
apertura, momento a partir del cual serán utilizados en área estéril.

V. RECOMENDACIONES

 Seguir cuidadosamente las instrucciones del profesor

 Usar adecuadamente los utensilios y materiales
 Ingresar al laboratorio sin fomentar desorden
 No hacer ruido en el laboratorio.
VI. BIBLIOGRAFIA

 https://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo
 http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/09-
factores%20de%20supervivencia.htm
 https://es.wikipedia.org/wiki/Autoclave
 http://codeinep.org/wp-content/uploads/2017/02/ESTERILIZA-CALOR-.pdf