UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

CURSO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

BIOPROCESOS

DR. RAÚL PAREDES MEDINA

TACNA - PERÚ
 Bioproceso
❖ Un bioproceso, es aquél que emplea células vivas o alguno
de sus componentes para el desarrollo de nuevos productos.

❖ Un bioproceso, es también todo proceso industrial que

involucra la manipulación de organismos vivos o sus
componentes celulares para proveer de bienes o servicios.

➢ Bienes: antibióticos, hormonas, fermentos, vacunas, ácidos

orgánicos, aminoácidos, biocombustibles, biomasa, etc.
➢ Servicios: biorremediación, biolixiviación, tratamiento de
efluentes.
DISEÑO DE BIOPROCESOS
Un bioproceso se caracteriza por:
• Uso de un biocatalizador biológico: Enzima, microorganismos,
células vegetales, células animales, células insecto, hongos
filamentosos, algas, plantas y animales.
• Uso de un biorreactor: la reacción ocurre en forma controlada.
Importancia de los bioprocesos
Los bioprocesos son importantes en:
• La salud
• La alimentación
• El medio ambiente
• En las tecnologías limpias: por su bajo consumo energético, uso
de materias primas renovables y la producción de residuos
biodegradables.
Bioproceso Microbiano
La mayoría de los bioprocesos productivos requieren
el cultivo de microorganismos o células eucariotas y por
lo tanto dependen del mantenimiento en el cultivo de la
especie única con la cual se inocula el biorreactor. La
contaminación con otros microorganismos y virus se
previene mediante la esterilización de la alimentación de
líquidos y gases que se van a adicionar al proceso,
ingeniería estéril de las plantas en las que se realizan los
bioprocesos y aplicación de técnicas estériles para los
bioprocesos.
Esterilización
Antes de entrar en detalles sobre los procesos de esterilización
es importante dejar definida la relación entre los conceptos de
asepsia y esterilidad. La esterilidad, o sea el ambiente estéril, se
logra cuando se han eliminado todos los organismos viables y
resulta imprescindible para los medios de cultivo, ya que no puede
haber nada ningún otro organismo que el que se va a inocular
posteriormente, de manera que no haya competencia. Con
posteridad a la inoculación hay que mantener la asepsia, o sea hay
que lograr que sólo se desarrolle el microorganismo deseado, es
decir que, se mantenga un cultivo axénico, lo que resulta
imprescindible para que se pueda desarrollar con éxito el proceso
productivo.
 Además, existen dos conceptos relacionados: desinfección y
pasterización. La desinfección es la remoción o destrucción por
cualquier vía de organismos vivos que puedan causar daño
particular o infección. No se requiere destruir todos los
microorganismos existentes, como en el caso de la esterilización,
sino solamente los que pueden producir un resultado no deseado.
En el caso de la pasterización, solamente se destruyen algunos de
los microorganismos presentes en materiales sensibles al calor
como la leche y la cerveza. El proceso consiste en calentar el fluido
en cuestión a ≈ 62 °C, mantenerlo a esa temperatura durante 30
minutos y después enfriarlo lo más rápido posible. Precisamente
este proceso se denomina pasterización en honor a Pasteur, ya que
fue a partir de sus trabajos que se conoció la existencia de los
distintos tipos de microorganismos y se establecieron nuevos
conceptos que resultaron decisivos para el desarrollo de la Industria
Biotecnológica.
Tipos de Esterilización
Los métodos de esterilización más importantes son la
esterilización por calor y la esterilización por filtración, aunque
existen otros métodos, como el empleo de la radiación ultravioleta.
El uso del calor se basa en que éste desnaturaliza las enzimas de los
microorganismos, aunque afecta también a las vitaminas del medio.
Es necesario mantener la temperatura de esterilización un tiempo
suficiente para asegurar la destrucción de todos los
microorganismos y en especial de las esporas bacterianas, que son
muy resistentes.
1. Esterilización por Calor

La Esterilización por Calor se puede hacer de manera continua

o discontinua:
1.1 Esterilización Discontinua
En la esterilización discontinua se utiliza el vapor como medio de
calentamiento para lograr la eliminación de los organismos vivos. En
ese proceso hay que considerar las etapas de calentamiento y
enfriamiento y las pérdidas de calor y es un proceso relativamente
lento. Se comienza por evacuar el aire que hay dentro del equipo, para
lo cual se emplean chorros de vapor a presión. El proceso se lleva a
cabo en recipientes enchaquetados a los que se le suministra vapor en
la chaqueta durante un periodo de tiempo determinado.
Las autoclaves se utilizan principalmente para esterilizar
utensilios y equipos que a ser utilizados en los bioprocesos,
incluyendo los biodigestores de pequeño tamaño y en menor medida
para la esterilización de los medios de cultivo ya que tienden a
sobrecalentar los medios. Además, estos equipos no cuentan con
sistemas de recuperación de energía y por lo tanto no resultan
económicos para su implementación a gran escala. Sin embargo, es de
uso común en las escalas de laboratorio y banco.
1.2 Esterilización Continua
Uno de los métodos utilizados para la esterilización continua es la
inyección directa de vapor vivo en el medio, con lo que se elimina el
intercambio de calor a través de la chaqueta. El medio se mantiene en
el circuito de esterilización por un tiempo determinado de manera de
asegurar el tiempo de retención necesario para asegurar la
esterilización. El proceso se completa con una cámara de vacío para la
expansión del vapor, lo que permite separar parte del agua que se le
añade al medio. Este método tiene el inconveniente de que se produce
una dilución del medio, pero tiene la ventaja de que tiene mejor
economía del calor, mediante la utilización de precalentadores o
economizadores de calor. Por ejemplo, en lugar de utilizar una
corriente fría de agua para enfriar el medio, el medio ya esterilizado
intercambia su calor con el que va a ser esterilizado, con lo que se
ahorra vapor y por lo tanto se reduce la dilución del medio.
2. Esterilización por Filtración
Para los medios líquidos que sean muy susceptibles al
calor se puede utilizar el proceso de Esterilización por
Filtración, siempre y cuando no tengan muchas
suciedades que puedan tupir los poros de los filtros. En
ese caso se utiliza dos etapas de filtrado, una etapa inicial
para eliminar impurezas, con filtros que tengan un
tamaño de poros de 0,45 µm y terminar con filtros que
tengan un tamaño de poros de 0,22 µm (en algunos casos
0,1 µm), con los cuales se asegura la esterilización del
medio. Este proceso se utiliza también para la
esterilización del aire en los procesos aerobios.
Otros procesos de Esterilización
Para muchos medios de cultivo de tejidos vegetales se utiliza el
Método de Esterilización en Hornos de Microondas, aunque
este método puede no resultar adecuado si el medio tiene
componentes complejos como la avena. Otro método utilizado es
la Esterilización por Haces de Electrones, ya que los haces de
electrones acelerados tienen un gran potencial como bactericida
Este método de esterilización es utilizado con éxito para para la
esterilización de aparatos médicos desechables y dispositivos con
una amplia gama de densidades. El haz de electrones inactiva a los
microorganismos que causan la destrucción de las biomoléculas y
produce la muerte de los microorganismos por una reacción
química indirecta. En general todas las radiaciones ionizantes
(rayos X, rayos ultravioletas, o rayos gamma) tienen un
mecanismo similar.
 También se utiliza la Esterilización Química, sobre todo para
pipetas y equipos de vidrio. Por ejemplo, la aplicación de un agente
oxidante como el Clorox al 10 % por 20 minutos o más, elimina
toda la contaminación de un sistema. Posteriormente el exceso de
agente químico debe ser eliminado, de manera que no impida el
crecimiento posterior del microorganismo que se inocule al sistema.
También se usa la lejía (hipoclorito de sodio) al 3 %, que se elimina
posteriormente con enjuagues con agua estéril o mediante
frotamiento con alcohol etílico (mezcla de 70 % de etanol en agua).
El alcohol también se utiliza comúnmente para la limpieza de
superficies. El uso de cloro, por su parte, debe ser evitado para
dispositivos de metal, ya que los corroe rápidamente. En esos casos
se utiliza el óxido de etileno en fase gaseosa. El óxido de etileno se
utiliza también eficazmente en biorreactores de columna.
 Aspectos generales de los bioprocesos
Cualquier operación a gran escala que involucre la transformación
en un producto, de cualquier materia prima, biológica o no
biológica, mediante la acción de microrganismos, cultivos de
células animales o vegetales o por materiales derivados de los
mismos como las enzimas y los organelos, se denominan Procesos
Biotecnológicos o de manera abreviada Bioprocesos. El producto
puede ser comercializable, como la insulina, penicilina, proteína
unicelular o enzimas, o puede tener poco valor comercial como en
los procesos de tratamientos de residuales. En todos los casos, en
los bioprocesos se parte de la materia prima para obtener producto
y se consideran tres etapas para el desarrollo del bioproceso.
La materia prima o alimento se debe convertir en formas que sean
susceptibles de ser sometidas al procesamiento, lo que se lleva a
cabo en la primera etapa, la Etapa de Tratamiento Previo. En esa
etapa (Figura 1) están involucradas una o más de las siguientes
operaciones: Selección, tamizado, reducción de tamaño, hidrólisis,
formulación de medios y esterilización. A continuación, se lleva a
cabo la segunda etapa, la Etapa de Biorreacción, que es el
corazón del bioproceso. En esa etapa la transformación puede
involucrar la transformación de sustrato en biomasa o en biomasa
y algún producto bioquímico o enzima. Alternativamente la
conversión puede utilizar células completas o enzimas
(inmovilizadas o en suspensión) como biocatalizadores.
Generalmente el material producido tiene que ser procesado en la
denominada Etapa de Tratamiento de los Productos
(Downstream), para ser convertida en formas útiles. Los
Procesos de Tratamiento consisten en operaciones
predominantemente físicas, mediante las cuales se obtiene la
concentración y purificación de los productos. Las operaciones de
tratamiento más comunes son: Filtración, centrifugación.
Sedimentación, floculación, ruptura celular, extracción,
ultrafiltración, precipitación, cristalización, cromatografía,
evaporación, secado y empaque. Los productos purificados
pueden tener diferentes formas físicas (líquidos, lodos, polvos,
cristales) para diferentes aplicaciones.
Preparación y propagación de inóculos
El punto de partida de cualquier biorreacción es un
recipiente limpio esterilizado, que se llena con el medio
estéril hasta un 50 – 75 % de su volumen total. Se inocula
el medio estéril con un cultivo axénico, en su fase de
crecimiento exponencial. El volumen del inóculo
generalmente es del orden del 1 al 10 % del volumen total
del medio, en dependencia del tipo de microorganismo. Si
es inferior a esta proporción puede existir un exceso
prolongado de período de latencia, lo que prolongará el
período de fermentación. Para evitar estos problemas, el
proceso de fermentación se lleva a cabo en varias etapas.
Crecimiento del inóculo
El cultivo preservado se reaviva inicialmente mediante
crecimiento en un cultivo líquido en agitación o en medio sólido si se
requiere la formación de esporas. Las condiciones utilizadas en el
cultivo inicial (composición del medio, temperatura de incubación,
etc.) dependerán del proceso específico. Sucesivamente se irá
incrementando el volumen del recipiente de cultivo, para conseguir la
velocidad de crecimiento adecuada. Es vital ir incrementando el
volumen para que a escala industrial se alcancen los resultados
óptimos (Figura). Si el número de células no está en el número
adecuado, la producción no será adecuada. Además, si crece en
condiciones diferentes a como crecerá después, existirá una fase de
latencia en el fermentador, reduciendo la rentabilidad.
 Etapas de desarrollo del inóculo

Dependiendo del proceso específico, para la obtención del volumen

necesario de inóculo se utilizan biorreactores de distinto tamaño y no
puede darse un esquema general para la inoculación de un fermentador
de producción. En la Figura 1 se muestra un ejemplo de incremento de
tamaño de los equipos de producción de inóculo, hasta obtener el
volumen necesario para inocular el fermentador de producción.
 Etapa de Tratamiento Previo (Pre tratamiento)
La materia prima disponible debe alcanzar las
condiciones requeridas para que se puedan realizar las
biorreacciones, para lo cual se utilizan diferentes
operaciones físicas de procesamiento de uso común en
la industria, como las operaciones de selección, tamizado
y reducción de tamaño. Cuando ya se dispone de la
materia prima con la pureza y el estado físico adecuado
para el bioproceso, se llevan a cabo entonces las etapas
de tratamiento previo específicas de los bioprocesos,
como esterilización, hidrólisis y formulación de
medios.
 Bioprocesamiento
Existen varias industrias como son, las alimenticias,
biotecnológicas, farmacéuticas, entre otras, que hacen uso de células
microbianas, animales o vegetales, así como también de productos
moleculares que se derivan de éstas, como son las enzimas y/o
proteínas para obtener una gran variedad de productos. Estos
productos son el resultado de una serie de modificaciones biológicas
generalmente acompañadas de un pretratamiento (upstream) y un
postratamiento (downstream), los cuales están gobernados por
cambios físicos y químicos, que permiten la preparación y
purificación del producto, respectivamente.
 PRETRATAMIENTO Y POSTRATAMIENTO
El Pretratamiento (Upstream = aguas arriba) corresponde a los
procesos previos a realizarse antes de que la materia prima ingrese al
biorreactor o fermentador, y son:
• Preparación del Inóculo
• Preparación del medio de cultivo
• Esterilización
El postratamiento (Dowstream = aguas abajo) corresponde a los
procesos a realizarse después de extraer los productos del biorreactor
o fermentador, y son:
• Recuperación del producto
• Purificación del producto
• Tratamiento de efluentes y residuos
• Operaciones finales
 Aplicaciones de los bioprocesos industriales
Los bioprocesos consumen menos recursos, son más rápidos y
menos costosos, debido a que utilizan sustratos alternativos y fuentes
de energía propias de microorganismos, siendo su principal objetivo,
satisfacer una necesidad para el bien común. Como ejemplo
encontramos el bioproceso para tratamiento de chatarra.
Una de las promesas más importantes de la aplicación de los
bioprocesos industriales es el reemplazo del petróleo y otros
combustibles fósiles mediante la utilización de sustratos alternativos
y otras fuentes de energía (de los propios microorganismos), los
bioprocesos industriales ya están aportando grandes innovaciones en
las siguientes industrias:

Industria de envasado Industria Química

Industria alimenticia Sector energético
Industria textil Sector Salud
Upstream (aguas arriba)

Downstream (aguas abajo)

 Tipos de operaciones empleadas en los bioprocesos
1. Operación por lotes: (la producción se realiza en un tiempo determinado
realizando una pausa para producir otro lote de productos tratando de
mantener los mismos estándares de calidad que los previamente elaborados).

2. Operación Continua: se dividen en:

Recipiente único
Recipientes múltiples

En la industria, el sistema más empleado es el de operación por lotes, el

cual consiste en un biorreactor alimentado al principio del proceso con nutrientes y
microorganismos de interés, permitiendo el crecimiento de estos por un tiempo
determinado hasta obtener el producto deseado, sin agregar o extraer material del
biorreactor.

La operación continua por otro lado, consiste en la alimentación periódica de un

biorreactor con nutrientes, tratando de controlar la fase de muerte celular,
removiéndose de forma simultánea y continua; la composición de la mezcla varía
con la posición del equipo.
 Etapas de los bioprocesos
Los procesos biotecnológicos basados en la acción de
microorganismos como agentes transformadores dentro de sistemas
productivos a nivel industrial abarcan tres etapas básicas.
• Pretratamiento o Upstream: comprende la preparación y
esterilización del medio de cultivo (materia prima) y el inóculo, los
componentes de los medios y su naturaleza química debe cumplir
con los requerimientos del crecimiento y de formación de productos
y suministrar energía para el mantenimiento celular.

• Biotransformación: Se da por acción de un catalizador biológico

que generalmente es un microorganismo o una enzima,
industrialmente este proceso ocurre en un Biorreactor.

• Postratamiento o Downstream: que comprende concentración y

purificación, operaciones que se denominan Bioseparación.
BIOPROCESO Y BIOTRANSFORMACIÓN
 BIOPROCESO
MATERIAS PRIMAS PRODUCTOS

AGENTES DE
BIOCONVERSIÓN
Un bioproceso se caracteriza por:
➢ Uso de un biocatalizador biológico: Enzima, microorganismos,
células vegetales, células animales, células insecto, hongos
filamentosos, algas, plantas y animales.
➢ Uso de un biorreactor: la reacción ocurre en forma controlada.

Importancia de los bioprocesos

Los bioprocesos son importantes en:

• La salud
• La alimentación
• El medio ambiente
• En las tecnologías limpias: por su bajo consumo energético, uso de
materias primas renovables y la producción de residuos
biodegradables.
El microorganismo productor
Hay varias alternativas:
• Partir del microorganismo productor wild type
• Microorganismos modificados genéticamente para tal fin
• Recurrir a sistemas de expresión heteróloga
 Microorganismos productores wild type
Ventajas:
• Generalmente suele ser el mejor productor (seleccionado por la
naturaleza)
• La manipulación genética es mínima, o nula esto nos ahorra
tiempo y dinero.
Posibles desventajas:
• Puede que no cumpla con las normas GRAS (Generally
recognized as safe)
• Su utilización puede presentar dificultades al momento del
escalado y etapas downstream. Ejemplo en hongos
filamentosos.
Algunos microorganismos productores Wild type
Algunos microorganismos productores Wild type
 Sistemas de expresión heteróloga
• Son utilizados para la producción de proteínas
recombinantes.
• Ventajas:
✓ Sistemas preparados para una finalidad determinada
✓ Amplia variedad de hospedadores
✓ Gran variedad de herramientas moleculares
disponibles (vectores, marcadores de selección, etc.)
• Desventajas
✓ No siempre el producto final posee las mismas
características que el deseado.
 Bioproceso Microbiano
1. Tecnología microbiana tradicional

❖ Fermentaciones alcohólicas
❖ Producción de productos farmacéuticos, aditivos alimentarios,
enzimas y sustancias químicas industriales.
❖ Biorremediación:
✓ La fuente de todas las cepas industriales es el ambiente natural
✓ Las cepas industriales se depositan en colecciones de cultivos
que sirven como almacén.

2. Tecnología microbiana con organismos alterados mediante

procesos de Ingeniería Genética

• Fabricación de hormonas
• Moduladores del sistema inmune
• Vacunas
 LA CÉLULA: Como agente de transformación
¿Qué hace atractivo su uso?: la gran disponibilidad de células en la
naturaleza y la gran diversidad de productos que se obtienen.

Tipos de células
• Microbianas: bacterias, levaduras, mohos, microalgas, arqueas.
• Animales: humanas, mamíferos e insectos.
• Vegetales

Cultivo de células: Medios de cultivo

Todos los microorganismos necesitan fuentes de energía (C, N, P, S) y
varios minerales, de modo que la composición precisa de un medio de
cultivo adecuado dependerá de la especie que se quiera cultivar.
Un medio de cultivo se utiliza frecuentemente para seleccionar y cultivar
microorganismos específicos, o para facilitar la identificación de una
especie en particular.
De acuerdo al estado físico, los medios de cultivo se clasifican en
sólidos y líquidos.
 Modalidades de cultivo
1. Lote:

• Discontinuo
• Nutriente limitante
• Sin control sobre la velocidad específica de crecimiento (µ)

2. Quimiostato:

• Continuo
• Nutriente limitante
• Control sobre la velocidad específica de crecimiento (µ)

3. Lote alimentado:
• Discontinuo
• Nutriente limitante
• Control sobre la velocidad específica de crecimiento (µ)
Modalidades de cultivo
Características de los medios de cultivo:
❖ Contener los elementos para la síntesis celular y para la
formación de producto
❖ Medio ambiente favorable para el crecimiento y/o formación del
producto.
❖ Económicamente rentable.
❖ Máxima producción.
❖ Adaptación constante al proceso de fermentación.

Componentes del medio de cultivo

• Fuente de energía
• Fuente de carbono
• Fuente de nitrógeno
• Fuente de micronutrientes: Mg, P, K, S
• Fuentes de elementos trazas: Ca, Na, Mn, Fe, Cu, Co, Zn, otros
• Nutrientes esenciales
 Rendimientos:
• Rendimiento teórico máximo de sustrato en producto

• Cálculo del rendimiento del nutriente limitante

• Cálculo de la concentración de nutriente limitante

 Microorganismos industriales
Los microorganismos para ser rentables deben manipularse a escala industrial, en
efecto, la producción con rendimiento económico sólo es posible si se realiza a
gran escala. A fin de hacer un producto económicamente competitivo por
fermentación microbiana, el medio de cultivo empleado debe ser barato y los
recipientes de cultivo extremadamente grandes.

Requisitos de un microorganismo industrial

• Producir las sustancias de interés
• Crecer rápidamente en un medio de cultivo barato
• Elaborar el producto en un período corto
• Desarrollarse en cultivo puro y en gran escala
• Ser estable genéticamente, pero susceptible de manipulación genética
• Cultivos que se mantengan durante períodos largos en laboratorio y en la planta
industrial
• Facilidad para inocular en grandes fermentadores
• No debe ser peligroso para el hombre o las plantas y animales de interés
económico
• Posibilidad de retirar fácilmente las células del cultivo
 Clases de productos industriales a obtenerse de los
microorganismos
1. Metabolitos microbianos para obtener:

➢ Alcohol > Vitaminas

➢ Ácido acético > Antibióticos
➢ Ácido láctico > Esteroides
➢ Aminoácidos > Alcaloides

2. Enzimas

• Para la digestión de almidones, lípidos y proteínas.

• Síntesis de antibióticos semisintéticos.

3. Células microbianas

• Proteína unicelular: levaduras, algas, bacterias y hongos.

• Células para la inoculación: bacterias fijadoras de nitrógeno, micorrizas,
inóculos para la fermentación de lácteos y embutidos.
Productos microbianos de interés industrial
Los productos microbianos con interés industrial son
de varios tipos principales. Estos son las células
propiamente dichas, por ejemplo, levaduras cultivadas
para alimentos, panadería o cerveza, y sustancias
producidas por las células, ejemplos son la glucosa
isomerasa, agentes farmacológicamente activos como
los antibióticos, esteroides y alcaloides,
particularmente productos químicos y aditivos
alimentarios como el aspartamo, edulcorante de
alimentos y bebidas; y productos químicos comunes
como el etanol. En la siguiente figura se muestra un
resumen de algunos de los productos industriales
importantes.
 Metabolitos primarios y secundarios
Hay dos tipos básicos de metabolitos microbianos:
primarios y secundarios. Un metabolito primario es el
que se forma durante la fase exponencial de crecimiento,
mientras que un metabolito secundario es el que se
forma casi al final de la fase exponencial de crecimiento,
con frecuencia muy cerca de o ya en la fase estacionaria
de crecimiento.
Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria
se denominan metabolitos secundarios y son algunos de
los metabolitos más comunes e importantes desde el
punto de vista industrial.
Características de los metabolitos secundarios:
❖ Los metabolitos secundarios no son esenciales para el
crecimiento y la reproducción.
❖ La formación de metabolitos secundarios depende
fundamentalmente de las condiciones de cultivo, sobre todo de
la composición del medio.
❖ A menudo los metabolitos secundarios se producen como un
grupo de estructuras muy relacionadas. Por ejemplo, se ha
encontrado que una única cepa de una especie de Streptomyces
produce alrededor de 30 antibióticos antraciclina diferentes
pero relacionados.
❖ Se puede incrementar enormemente la sobreproducción de los
metabolitos secundarios, mientras que los metabolitos
primarios, asociados al metabolismo primario, habitualmente no
pueden sobreproducirse en la misma medida.
¡Gracias por su Atención!

Que tengan un buen Día