DETERMINACION DE ACETAMINOFEN EN UN FARMACO POR

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABOSORCION UNTRAVIOLETA

Diego Fernando galindez

201766610
Juan Camilo Gonzales
201766524
Universidad del Valle, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Departamento de
Química, Sede Yumbo, Colombia

Resumen
En la práctica de laboratorio se cuantifico el contenido de acetaminofén en fármaco por dos curvas
de calibración, una por el método de patrón externo y la otra por adición de estándar con soluciones
estándar de acetaminofén, utilizando como instrumento el espectrofotómetro de absorción en el
ultravioleta, para lo cual se determinó la longitud de onda de máxima de máxima absorción para
una misma sensibilidad para poder hallar las concentraciones, por patrón externo 12.85±0.67
mg/ml, y por adición estándar 400.0±0.16 mg/ml, teniendo un porcentaje de error de 57.16% y
58.3% para cada uno de los métodos.

Datos, cálculos y Resultados

Se pesó (20.2±0.1) mg de acetaminofén Volumen Concentració Absorbanci
estándar en un vaso de precipitado para de patrón n a
disolverlos con (5.00±0.03) mL de metanol y (±0.01) (ppm) (±0.01)
luego fue transferido a un matraz de 0.50 4.04±0.08 0.389
(100.0±0.1) mL realizando lavados con agua 0.10 8.08±0.09 0.774
hasta completar su volumen. 1.50 12.1±0.1 1.202
2.00 16.2±0.1 1.524
Tabla 1. Concentración del acetaminofén en 3.00 24.2±0.1 2.358
patrón. Muestra 0.744
Peso en mg Concentración
(acetaminofén) (ppm) Medición espectrofotométrica
20.2±0.1 202.0±1.0
En la determinación espectrofotométrica se
utilizó la solución de 12 ppm para tomar el
A partir de la solución patrón de espectro ultravioleta en el rango entre 200 y
acetaminofén, se preparó en matraces de 300 nm, obteniendo una longitud de onda
(25.00±0.04) mL soluciones en un rango de máxima a 242 nm.
concentraciones entre 4.00 y 24.00 ppm,
enrasando con agua.
Ecuación 1.
C 1 ×V 1 =C2 ×V 2
Tabla 2. Datos arrojados por la curva de
calibración por patrón externo.
 b± t Sb 0.0971±0.0066
R 0.0905-0.1037
a± t Sa -0.0049±0.0097
R -0.0146-0.0048
x± t Sx 7.71±1.20
R 6.51-8.91

Test para evaluación de la pendiente

El valor del T critico debe ser menor qué el T

experimental indicando qué la pendiente sea
Gráfica 1. Espectro UV para la
igual a cero o es muy elevada, superior al
determinación de la longitud de onda de
95%.
máxima absorción
Tcrítico=3.18
(242 nm).
0.0971
T experimental= =46.32
El tratamiento de datos estadísticos se 0.0020
realizará por el método de mínimos T experimental >T critio
cuadrados.
Hipótesis nula T experimental < T critico: La
pendiente no es significativamente diferente
de cero y no existe regresión.
Se rechaza la hipótesis nula

Test para evaluación del intercepto

Tcrítico=3.18
−0.0049
T experimental= =0.16
0.0307
Gráfica 2. Curva de calibración por patrón T experimental <T critio
externo para determinación de acetaminofén
Hipótesis nula T experimental < T critico: El
Tabla 3. Datos de la regresión obtenidos para intercepto no es significativamente
la curva de calibración por patrón externo diferente de cero por lo cual Se acepta la
 12.92 hipótesis nula
 1.2494
SXY 23.38 Tabla 5. Límites de detección y
Sxx 240.94 cuantificación para la determinación de
SYY 2.273 acetaminofén patrón externo.
r 0.9993 Limite Concentración
a 0.0049 (mg/mL)
b 0.0971 Cuantificación 3.3491
r2 0.9986 Detección 1.0049
Sr 0.0325
Sr 0.0307 Ecuación 2. Determinación de la muestra por
Sb 0.0021 ecuación de la recta.
Sx 0.3157 y=(0.0971 ±0.0021) X−(0.005 ±0.030)
0.744 ± 0.001=(0.0971 ±0.0021) X−(0.005 ±0.030)
Tabla 4. Intervalos de confianza para X =7.71± 0.38 ppm
determinación por patrón externo.
Tabla 6. Determinación de la muestra por b 0.0964
calibración con patrón externo. r2 0.9999
Sr 0.0134
Cantidad (mg/ml) Sr 0.0094
12.85±0.67 Sb 0.0007
Sx 0.01
Tabla 7. Determinación de acetaminofén en 5
mL de jarabe. Tabla 10. Intervalos de confianza para
determinación por adición estándar.
Cantidad (mg) b± t Sb 0.0964±0.0022
64.25±3.37 R 0.0942-0.0986
%ERROR=57.16 a± t Sa 0.01476±0.0298
R -0.01513-0.04465
Tabla 8. Datos arrojados por la curva de x± t Sx 0.15±0.03
calibración por adición estándar. R 0.12-0.18

Volumen Concentració Absorbanci Test para evaluación de la pendiente

de patrón n a
(±0.01) (ppm) (±0.01) El valor del T critico debe ser menor qué el T
0.00 0.00±0.00 0.011 experimental indicando qué la pendiente sea
0.50 4.04±0.11 0.415 igual a cero o es muy elevada, superior al
1.00 8.08±0.18 0.795 95%.
2.00 16.2±0.3 1.559 Tcrítico=3.18
3.00 24.2±0.5 2.358 0.0964
T experimental= =137.7
0.0007
T experimental >T critio

Hipótesis nula T experimental < T critico: La

pendiente no es significativamente diferente
de cero y no existe regresión.
Se rechaza la hipótesis nula

Gráfica 3. Curva de calibración por adición

estándar para determinación de acetaminofén. Test para evaluación del intercepto

Tcrítico=3.18
El tratamiento de datos estadísticos se
0.01476
realizará por el método de mínimos T experimental= =1.57
cuadrados. 0.0094
T experimental <T critio
Tabla 9. Datos obtenidos para la curva de
calibración por adición estándar. Hipótesis nula T experimental < T critico: El
 10.54 intercepto no es significativamente
 1.027 diferente de cero y no existe regresión.
SXY 36.45 Se acepta la hipótesis nula
Sxx 378.2
SYY 3.515 Tabla 11. Límites de detección y
r 0.999 cuantificación para la determinación de
a 0.0147 acetaminofén por adición estándar.
 Limite Concentración
(mg/mL)
Cuantificación 1.39
Detección 0.4170
Ecuación 3. Determinación de la muestra por
ecuación de la recta.
y=(0.0964 ± 0.0022)X −(0.01476± 0.0298)
0=(0.0964 ±0.0022) X−(0.01476 ±0.0298)
X =0.15 ± 0.01 ppm
Tabla 6. Determinación de la muestra por
calibración con adición estándar.
Cantidad (mg/ml)
400.0±0.16
Tabla 7. Determinación de acetaminofén en 5
mL de jarabe.
Cantidad (mg)
62.50±4.35
%ERROR=58.3
Análisis de resultados
Para la determinación de acetaminofén se
utilizó el equipo UV-1700 SHIMADZU, el
cual es un espectrofotómetro de doble haz,
como se observa en la figura 1, este consta de
dos fuentes de radiación, una es la lámpara de
tungsteno y la otra es una lámpara de
deuterio, en este caso se utilizó la de deuterio
que emite radiación en el UV, posteriormente
el haz procedente de la fuente, pasa por un
monocromador de rejilla que separa la
longitud de onda correspondiente, este haz
seleccionado pasa por un disco de sector, que
es un espejo giratorio accionado por un
motor, con 3 sectores, un sector negro el cual
bloquea el paso de la radiación, un sector
incoloro que deja pasar la radiación hacia la
referencia midiendo la intensidad Io y un
sector gris que refleja la radiación hacia la
muestra midiendo I. Cabe mencionar que las
celdas del disolvente y muestra, están hechas
de cuarzo, generalmente rectangulares y con
un camino óptico de 1 cm. Después el
detector convierte las intensidades de
radiación en corriente y finalmente el
registrador amplifica la señal eléctrica,
convirtiendo corriente a intensidades de
radiación, en este caso I e Io para dar valores
de transmitancia (T= I / Io), o absorbancia (A
= log Io / I). [1]
La fuente utilizada es la lámpara de deuterio,
que es una fuente incandescente y consta de
un tubo cilíndrico sellado de cuarzo, con una
ventana de cuarzo por la cual sale la
radiación. En el interior se encuentran un
electrodo metálico en una atmosfera de
deuterio a baja presión que forma un arco con
un filamento metálico recubierto de óxido,
este filamento suministra electrones al
electrodo, generando choques entre las
moléculas de deuterio y causando que estas
emitan radiación continua entre 160 y 375nm.
El proceso por el cual se emite radiación es
porque se forma una molécula excitada de
deuterio, debido a la absorción de energía
eléctrica.
D2 + Ee → D¿2 → D´ + D´´ +hv (Reacción 1)
Como se observa en la reacción anterior, el
deuterio elemental, tras la absorción de
energía eléctrica, forma inicialmente una
molécula excitada de deuterio y luego esta se
disocia para obtener dos especies atómicas de
deuterio y un fotón UV. [2]
El monocromador consiste en una rejilla
holográfica de cristal, la cual tiene hendiduras
muy pequeñas y un recubrimiento de
aluminio que crea una superficie reflectante.
La radiación proveniente de la fuente pasa
por una rendija de entrada, para después
incidir sobre la rejilla que refleja la radiación
en diferentes direcciones y finalmente un
espejo enfoca la radiación dispersada,
creando así un plano focal, para que la
longitud de onda seleccionada pase por una
rendija de salida y posteriormente al disco de
sector, celdas y detector. [3]
El detector utilizado es un fotodiodo de
silicio, el cual conduce una cantidad de
corriente eléctrica proporcional a la cantidad
de luz que lo ilumina, este consiste en un
sustrato de silicio intrínseco conocida como
tipo pn, entre dos capas de silicio una tipo n y
otra tipo p en un circuito integrado, la capa
tipo p consiste en silicio dopado con oxígeno
para crear una capa de sílice, la cual tiene
deficiencia de electrones, por el contrario la
capa tipo n tiene un recubrimiento de oro y un
exceso de electrones como se observa en la
figura 2.
Figura 2. Fotodiodo de silicio
Figura 3. Fotodiodo de silicio bajo una
polarización inversa
Pero como se observa en la figura 3, al
aplicar polarización inversa a cada región, se
extraen de la unión p-n, electrones y huecos
creando una zona de despoblación, en donde
se reduce a casi cero la conductancia de la
unión. Sin embargo al permitir que la
radiación incida sobre el circuito se forman
en la zona de la despoblación, huecos y
electrones que al moverse a través del
dispositivo, dan lugar a una corriente que es
proporcional al potencial radiante. [4]
La región UV está conformada por dos zonas,
el UV próximo entre 200 a 400 nm y UV
lejano de 10 a 200 nm, en este último se
presenta el inconveniente de que el oxígeno
atmosférico absorbe en esta región, debido a
esto las determinaciones analíticas se realizan
en UV próximo. Teniendo en cuenta esto para
que un compuesto pueda ser analizado por
espectrofotometría UV, debe absorber luz, y
esta radiación resulta de la excitación de los
electrones de enlace; pero esta técnica está
restringida a un determinado número de
grupos funcionales conocidos como
cromóforos que contienen electrones de
valencia con energías de excitación bajas.
Cabe destacar que los electrones que aportan
a la absorción en una molécula orgánica son
de tipo enlazantes345, los cuales participan
directamente en la formación de enlaces y los
no enlazantes o que están ubicados alrededor
de átomos como oxígeno, halógenos, azufre y
nitrógeno. [5]
Figura 4. Estructura del Acetaminofén
El Acetaminofén puede ser determinado en el
UV gracias a la presencia de estos grupos
cromóforos como el C=C conjugado en el
anillo aromático y el grupo carbonilo como se
observa en la figura 4, los cuales presentan
transiciones electrónicas π-π* y son
responsables de la absorción de radiación.
Además cabe destacar que en el acetaminofén
se nota la presencia de un grupo auxócromos
como el OH, el cual es un grupo funcional
unido al cromóforo, que no absorbe en el UV
pero que si aumenta la longitud de onda de
absorción y esto gracias a que tiene un par de
electrones libres que interaccionan con los
electrones π del anillo aromático, como
consecuencia de esta interacción se estabiliza
el estado π*, disminuyendo de este modo su
nivel de energía y generando un
desplazamiento hacia longitudes de onda
mayores. Otro grupo auxócromo presente es
el -CH3, pero este no participa ya que
presenta una transición σ-σ*, característica a
una radiación inferior de 200 nm. Cabe
destacar que otros factores relacionados con
el entorno como el solvente, pH y
temperatura causan un cambio en la longitud
de onda de absorción, debido a esto se utilizó
un solvente, que en su mayoría es agua
destilada, la cual presenta absorción por
debajo de los 200 nm. [6]
Para descartar la presencia de otros grupos
que acompañan el Acetaminofén en el
medicamento, los cuales pueden tener grupos
cromóforos y de esta manera causar una señal
errada, se realiza la prueba de significación,
en donde se tiene como conclusión que no
hay presencia de significativos efectos de
matriz y que la mejor opción para cuantificar
es la CC. Finalmente se obtienen los límites
de detección y cuantificación para el método
respectivamente, en donde se demuestra que
la espectrofotometría UV es útil para la
cuantificación de analitos gracias a las
presencia de grupos cromóforos.
El paracetamol o acetaminofén es
ampliamente utilizado como analgésico y
antipirético, este se absorbe en el aparato
digestivo, sus efectos inician alrededor de
treinta minutos y son útiles hasta cinco horas
después, este se biotransforma en el hígado y
se elimina por medio del riñón en forma de
metabolitos en un tiempo de dos a 3 horas.
Pero si se toma demasiado acetaminofén
puede causar un daño hepático en el hígado.
Cabe señalar que la dosis de esta medicando
para un adulto es de 500mg y en un día no se
debe exceder los 4000mg. [7]
Además para comprobar si hay una influencia
significativa en los dos métodos de
cuantificación se realizó una prueba de t,
mediante las pendientes obtenidas, cual arrojo
que no hay influencia significativa en los
métodos realizados
Conclusiones
La espectrofotometría UV es solo aplicable
para la determinación de analitos que
contienen grupos cromóforos, que usualmente
son compuestos orgánicos.
No solo la absorción de radiación por parte
del grupo cromóforo determina la longitud de
onda de absorción, las conjugaciones y la
presencia de un grupo auxócromo genera que
se aumente esta longitud de onda, además el
disolvente, pH y temperatura son otros
factores a tener en cuenta.
Gracias a la prueba de significación se logró
determinar que no hay presencia significativa
de efectos de matriz y que la mejor opción
para realizar la cuantificación es la curva de
calibración simple.
PREGUNTAS
a)Existe interferencia de matriz en el método
analítico para cuantificar acetaminofén en
tabletas, usadas en esta práctica. Muestre los
cálculos que lo llevan a la conclusión.
Si, estadísticamente se logró comprobar que
no hay interferencia de matriz, como
podemos observar en los cálculos que se
encuentra en datos, cálculos y resultados
b) Con base en los conocimientos de la
estadística básica y aplicada al análisis, ¿Qué
recomienda para lograr mejores límites de
detección del método? Explique e indique los
cuidados que se deben tener para no afectar la
confiabilidad del método.
c) En el artículo (TARINC, D. y
GOLCU, A., Journal of Analytical
Chemistry, 67, 2 (2012) 144-150) se presenta
un método espectrofotométrico simple y
directo para la determinación de algunos
antibióticos del grupo de las cefaslosporinas.
¿Qué ventajas presenta este método
comparado con otras técnicas como la
cromatográfica y la electroquímica? ¿Cómo
determinan la ausencia de interferencia por
parte de los excipientes? ¿Qué es un
excipiente?
¿Qué información relevante se obtiene de las
figuras 4A y 4B? ¿Para qué sirve este tipo de
curva?
Que es simple, preciso, exacto y económico,
con un mejor rango de estimación para las
drogas del grupo cephalosporins, estudiadas
en el artículo.
También, es un método que no requiere
extracción, evaporización, el empleo de un
agente complejante, ni el manejo de químicos
peligrosos, disminuyendo así mismo tiempo y
el error en cuantificación.
La ausencia de interferencias fue determinada
por medio de adición estándar, añadiendo
cantidades conocidas de los medicamentos
puros.
Las figuras 4A y 4B, muestran el perfil de
estabilidad perteneciente a soluciones acuosas
de los medicamentos analizados.
Se considera que un excipiente es una
sustancia inerte, es decir, aquella que no
puede producir ninguna acción biológica.
Aunque no estén dotados de acción
farmacológica, los excipientes, mejoran la
apariencia, las propiedades organolépticas, la
estabilidad y la biodisponibilidad de las
medicinales. Los excipientes representan la
mayor parte o volumen de un preparado
galénico.
d) Qué métodos alternativos, al usado en
este taller, se reportan en la literatura para la
determinación de vitamina C? Haga una
breve descripción de ellos.
REFERENCIAS
[1] HARRIS, D.C. Análisis químico cuantitativo.
3a Edición, Ed. Reverte S.A. Barcelona, 2008.
Págs.461-465
[2] SKOOG, D.A; HOLLER, F.J; CROUCH, S.R.
Fundamentos de Química Analítica. 8a Edición,
Ed. Thomson. España, 2004. Pág 757
[3] RUBINSON, A.K; RUBINSON F.J. Análisis
Instrumental. 2a Edición, Ed. Pearson Educación,
S.A. Madrid, 2001. Págs. 291, 292, 333, 334
[4] VILLEGAS, W.A; ACERETO, P.O;
VARGAS, M.E. Análisis Ultravioleta-visible. 1a
Edición, Ed. Universidad Autónoma de Yucatán.
México, 2006. Págs. 16,17
[5] SKOOG, D.A; HOLLER, F.J; CROUCH, S.R.
Principios de Análisis Instrumental. 6 a Edición,
Ed. CENGAGE Learning. México, 2008. Págs.
367-372
[6] [En línea] Espectrofotometría de absorción
ultravioleta-visible: http://ocw.usal.es/ciencias-
experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Tema_3.pdf
[7] MENDOZA, P.N. Farmacología Médica. 1a
Edición, Ed. Médica Panamericana. México,
2008. Págs. 293-291