Cuantificación de Fe(II) por espectroscopia visible

1
Acosta, Santiago; 1Barreto, Yuliana.
1
Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Departamento de Ciencias Químicas.
Laboratorio de Análisis Instrumental.
Cali, Colombia, Septiembre del 2021.
santiagojavier2002@gmail.com
yulianabarretoa@hotmail.com

Resumen
En esta práctica se llevó a cabo la cuantificación de Fe(II) en una muestra de jarabe ferroso por medio
de la espectroscopia visible, haciendo uso de un espectrofotómetro modelo Genesys 20, que mide la
absorbancia de la luz, la cual es proporcional a la cantidad del analito que se va a analizar. Con ayuda
de un barrido espectral, se encontró que la longitud de onda de mayor absorbancia era de 510nm.En
base a la absorbancia obtenida de las 6 soluciones patrón, se construyó una curva de calibración
tradicional, utilizando una solución “blanco” para configurar el equipo y así detectar únicamente el
hierro en cada solución. A partir de esto, se obtuvo una concentración de hierro (II) de 3572ppm y
17784.8ppm de sulfato ferroso en muestra problema; al compararlo con el valor teórico registrado en la
etiqueta del producto se logró tener un porcentaje de error de 55.5% y 57% respectivamente.
Finalmente, se pudo llegar a la conclusión de que la espectrometría es un método efectivo, fácil y de
alta precisión para la determinación de contenido de hierro en la muestra.

Palabras clave: Curva de calibración, espectroscopia, analito, absorbancia.

Introducción

El estudio a nivel químico requiere el uso de

técnicas analíticas que permiten la
determinación cualitativa y cuantitativa del
analito a estudiar. Uno de los métodos más
usados es la espectroscopia visible, que consiste
en la medida de la absorción de las radiaciones
electromagnéticas comprendidas en un
intervalo espectral de 400 a 800 nm para la
región visible. El instrumento que se usa es el
espectrofotómetro, el cual mide la absorbancia
de la luz incidente que pasa a través de la
muestra. Consta de un sistema óptico capaz de
producir luz monocromática en la región de 200
a 800 nm, una celda para contener la muestra y
un detector apropiado para determinar la
absorbancia. Cuando se emplean
espectrofotómetros de doble haz, la celda que
contiene el “blanco” se coloca en el haz de
referencia. Las celdas empleadas para la
solución “muestra” y el “blanco” deben tener
las mismas características espectrales1.
Figura 1. Espectrofotómetro y su función2.
Por otra parte, la calibración es un
procedimiento analítico utilizado en análisis
cuantitativo, que implica la construcción de una
curva de calibración, la cual es una
representación gráfica de un método analítico,
generalmente a concentraciones conocidas de
analito3. El ajuste de la curva de calibración se
hace por el método de los mínimos cuadrados,
que consiste en buscar una recta, la cual haga
que la suma de los cuadrados de las distancias
verticales entre cada punto experimental y la
recta de calibrado sea mínima o tienda a cero4.
 espectrofotometría para determinar la
concentración del analito según las soluciones
patrón preparadas.
4𝐹𝑒 3+ + 2𝑁𝐻2 𝑂𝐻 → 4𝐹𝑒 2+ + 𝑁2 𝑂 + 6𝐻 + + 𝐻2 𝑂
Ecuación química 1. Reacción Fe(III) con
hidroxilamina

3𝐶12 𝐻8 𝑁2 + 𝐹𝑒 2+ → [(𝐶12 𝐻8 𝑁2 )𝐹𝑒]2+

Ecuación química 2. Formación del complejo
entre Fe(II) y o-fenantrolina

Metodología
Figura 2. Curva de calibración lineal5. ● Materiales
Mediante una curva de calibración se relaciona Tabla 1. Listado de materiales necesarios para
proporcionalmente la concentración de la el desarrollo de la práctica
muestra en función de la propiedad a estudiar,
que en este caso sería el nivel de absorbancia. DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD

La ley que rige esta técnica analítica es la ley de

Vidrio reloj pequeño 1
Bouguer-Lambert-Beer, la cual se puede decir
que se usa como un medio matemático utilizado
para expresar de qué forma la materia absorbe Espátula metálica pequeña 1
la luz. A medida que la luz atraviesa un medio
que la absorbe, la cantidad de luz absorbida en
cualquier volumen corresponde a la intensidad Espátula acanalada 1
de luz que incide, luego se multiplica por el
coeficiente de la absorción. Frecuentemente la
intensidad de un haz de luz incidente declina Pipeta graduada 1mL 1
significativamente a medida que pasa a través
del medio absorbente6. Pipeta volumétrica 1mL 1

Ecuación 1. Ley de Bouguer-Lambert-Beer

Pipeta volumétrica 2 mL 1
𝐼0
log10 ( ) = 𝜀𝑐𝑙
𝐼
Pipeta volumétrica 3 mL 1
Considerando en la explicación teórica, en esta
práctica de laboratorio se aplicó la técnica de Pipeta volumétrica 4mL 1
espectroscopia visible para la cuantificación de
hierro (II) y sulfato ferroso en una muestra de
jarabe de sulfato ferroso, para así llegar a la Pipeta volumétrica 5 mL 1
curva de calibración tradicional usando el
blanco como referencia.
Pipeta graduada 10mL 1
Dado que el objetivo de esta práctica es la
cuantificación de Fe(II), se redujo el Fe3+ a Fe2+ Pipeta volumétrica 10 mL 1
con ayuda del clorhidrato de hidroxilamina,
como se muestra en la ecuación química 1.
Micropipeta 100-1000µL 1
Seguido de esto, se dio la formación de un
complejo coloreado rojo-naranja al añadir O-
fenantrolina, como se observa en la ecuación Puntas para Micropipeta 1
química 2. Por último, se empleó la 100-1000µL
 Pera 1 Sulfato ferroso amoniacal 0,01g
hexahidratado

Frasco lavador 1 Ácido sulfúrico 1mL

Balón aforado 10mL 2 Ácido clorhídrico 5mL

Balón aforado 20mL 1 Clorhidrato de hidroxilamina 2,6g

Balón aforado 25mL 3 Acetato de sodio trihidratado 2,8g

Balón aforado 50mL 7 o-fenantrolina 0,05g

Estufa 1 Etanol 96% 5mL

Balón aforado 100mL 1 Jarabe de Sulfato Ferroso 1mL

Embudo de caña corta 1 ● EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el
desarrollo de la práctica
Beaker 10mL 1
DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD
Beaker 25mL 1
Balanza analítica 1
Beaker 50mL 2
Espectrofotómetro Genesys 20 1
Varilla de agitación 1
● PREPARACIÓN:
Gotero 2 Para realizar de manera adecuada el laboratorio,
se llevó a cabo preparación del complejo Fe2+
Celdas plásticas N/A (o-fenantrolina), se tomaron 6 balones aforados
de 50mL, marcados de forma ascendente del 1
al 6, en donde se le adicionaron los siguientes
Papel para pesar N/A
volúmenes 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL de solución
patrón de hierro (II) y a cada uno de ellos se
Papel Filtro N/A añadió orden: 2,5mL de la solución de
clorhidrato de hidroxilamina al 10%p/V, 1 mL
Papel Kimwipes N/A de la solución de acetato de sodio 2M, 0,5 mL
del HCl 1M y por último 10mL de la solución
de o-fenantrolina al 0,1%p/V (estas soluciones
● REACTIVOS
ya estaban hechas previamente). Después, se
Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para
el desarrollo de la práctica dejó reposar durante 30 minutos para la
generación de un color estable, cuando ya
DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD estaba en temperatura ambiente la solución, se
diluyó con agua destilada hasta completar el
aforo. Antes de realizar la lectura en el
espectrofotómetro, se debe agitar muy bien
cada solución. Se encendió
espectrofotómetro 20 minutos antes de usarlo,
se hizo el barrido espectral con el fin de
determinar la longitud de onda de máxima
absorbancia para el complejo de Fe(II) o-
fenantrolina. Asimismo, se seleccionó la
longitud de onda máxima de absorción en el
espectrofotómetro, para ello se tomó la solución
a la que le adicionó 3 mL de solución patrón de
hierro (II), luego se efectuó un barrido entre 400
el y 600 nm, con intervalo de 10 nm. Se utilizaron
dos celdas para el espectrofotómetro, una para
el blanco y otra para las muestras.
Anteriormente, se purgó las celdas tres veces
con la solución blanco hasta que mostró la
lectura indicada. A partir de esto, se realizó la
lectura para cada una de las soluciones.

Cálculos y resultados
Para realizar la curva de calibración tradicional, se necesita conocer la concentración de hierro en cada
una de las soluciones estándar en forma de partes por millón (ppm). Para esto, se calculó la
concentración de hierro en la solución patrón como se muestra en la ecuación 2.

Ecuación 2. Concentración de Fe(II) en sln estándar

1 𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑜ℎ𝑟 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+ 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+
0.0089𝑔 𝑠𝑎𝑙 𝑀𝑜ℎ𝑟 ( )( )( ) = 9.08𝑥10−4
392.13𝑔 𝑠𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑜ℎ𝑟 1 𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑜ℎ𝑟 0.025𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝐿 𝑠𝑙𝑛

A continuación, se calculó la concentración de hierro en las demás soluciones por medio de la ecuación
3.

Ecuación 3. Concentración Fe(II) demás soluciones

𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+ 𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 𝑎ñ𝑎𝑑𝑖𝑑𝑜𝑠 55845𝑚𝑔 𝐹𝑒 2+
9.08𝑥10−4 ( )( ) = 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 2+
𝐿 𝑠𝑙𝑛 0.05𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑗𝑜𝑚é𝑡𝑟𝑖𝑐𝑎 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+

𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+ 0.001𝐿 55845𝑚𝑔 𝐹𝑒 2+

9.08𝑥10−4 ( )( ) = 1.014 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 2+
𝐿 𝑠𝑙𝑛 0.05𝐿 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+
Los resultados obtenidos para la concentración se registraron en la tabla 4; los cálculos estadísticos se
realizaron por medio de Excel y se registraron en la tabla 5. Cabe resaltar que la longitud de onda de
máxima absorbancia fue detectada en 510 nm en la práctica con el grupo anterior, por lo tanto, se ajustó
el espectrofotómetro a este valor de longitud de onda para tomar las mediciones

Tabla 4. Datos obtenidos concentración y absorbancia

Absorbancia 510nm
Solución estándar Volumen Fe(II) (mL) Concentración (ppm) Aborbancia 1 Aborbancia 2 Aborbancia 3 Absorbancia promedio
Blanco 0 0 0 0 0 0
1 1 1,014 0,205 0,209 0,199 0,204
2 2 2,028 0,398 0,409 0,378 0,395
3 3 3,042 0,609 0,625 0,577 0,604
4 4 4,057 0,740 0,838 0,771 0,783
5 5 5,071 1,005 1,042 0,953 1,000
 Tabla 5. Cálculos estadísticos

Solución Desv. Estándar Varianza %Coe. Variación

1 0,005033223 2,5333E-05 2,463241251
2 0,015716234 0,000247 3,978793328
3 0,024440404 0,00059733 4,048658814
4 0,050089919 0,002509 6,397179967
5 0,044710178 0,001999 4,471017781

Curva de calibración tradicional

1,2

y = 0,1956x + 0,0017
Absorción promedio (nm)

1
R² = 0,9996
0,8

0,6

0,4

0,2

0
0 1 2 3 4 5 6
Concentración Fe(II) (ppm)

Gráfica 1. Curva de calibración tradicional, concentración de Fe(II) vs Absorbancia

Ahora, se calculó la concentración de Fe (II) en una muestra problema (Jarabe de sulfato ferroso) con
los datos obtenidos en la tabla 6. Los cálculos estadísticos se presentan en la tabla 7.

Tabla 6. Datos de absorbancia muestra problema

Solución Absorbancia 1 Absorbancia 2 Absorbancia 3 Absorbancia promedio

Muestra problema 0,354 0,446 0,253 0,351

Tabla 7. Cálculos estadísticos muestra problema

Solución Desv. Estándar Varianza %Coe. Variación

Muestra problema 0,096534968 0,009319 27,50283982

El cálculo de la concentración se realiza al despejar x de la ecuación de la recta obtenida en la curva de

calibración tradicional (gráfica 1), como se muestra en la ecuación 4.

Ecuación 4. Despeje de x de la ecuación de la recta

𝑦−𝑏
𝑥=
𝑚

0.351 − 0.0017
𝑥= = 1.786 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 2+
0.1956
Posteriormente, se aplica dos factores de dilución al resultado obtenido: 1/100 y 1/20, como se muestra
a continuación en la ecuación 5.

Ecuación 5. Corrección por factor de dilución

1.786 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 2+ × 100 × 20 = 3572𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒 2+

Teniendo en cuenta que la concentración de hierro teórico del jarabe es 8033.3 (según los 803.33mg
reportados en la etiqueta del producto – ilustración 1) se realizó el calculo del porcentaje de error con
la ecuación 6.

Ilustración 1. Datos teóricos jarabe sulfato ferroso

Ecuación 6. Porcentaje de error

|𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 − 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙|
%𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = × 100
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜

|8033.3 − 3572|
%𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = × 100 = 55.5%
8033.3

Ahora se calculó la concentración de sulfato ferroso heptahidratado (FeSO4.7H2O) en la muestra

problema teniendo en cuenta la concentración de hierro calculada anteriormente, como se muestra en
la ecuación 7.
Ecuación 7. Concentración sulfato ferroso heptahidratado
𝑚𝑔 𝐹𝑒 2+ 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 2+ 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒𝑆𝑂4 ∙ 7𝐻2 𝑂 278050𝑚𝑔 𝐹𝑒𝑆𝑂4 ∙ 7𝐻2 𝑂 𝑚𝑔 𝐹𝑒𝑆𝑂4 ∙ 7𝐻2 𝑂
3572 ( 2+
)( 2+
)( ) = 17784.8
𝐿 55845𝑚𝑔 𝐹𝑒 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 1 𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒𝑆𝑂4 ∙ 7𝐻2 𝑂 𝐿

Por último, teniendo en cuenta que la concentración teórica de sulfato ferroso heptahidratado es de
40000ppm (según los 4 gramos reportados en la etiqueta del producto – ilustración 1) se realizó el
calculo de porcentaje de error según la ecuación 6.

|40000 − 17784.8|
%𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = × 100 = 57%
40000

Análisis de resultados
Se buscó cuantificar la concentración de hierro (II) en una muestra de jarabe de sulfato ferroso
(ilustración 2) por medio de la técnica de espectrofotometría, con el uso del espectrofotómetro visible
Genesys 20 de haz monocromático, perteneciente a la compañía Thermo Fisher Scientific7. Esta técnica
es muy utilizada para caracterizar átomos o moléculas debido a que permite medir el espectro de
absorción en amplios rangos de longitudes de onda. De este modo, podemos calcular la concentración
de analito en una muestra debido a que la absorbancia es proporcional a la cantidad de analito a analizar
en la muestra problema, lo que se conoce como “densidad óptica”. Dado que se empleó luz visible para
el desarrollo del experimento, las celdas utilizadas en el equipo estaban compuestas de plástico, debido
a que este material no absorbe la radiación en la región de interés, es decir, son totalmente transparentes
a la luz en longitudes de onda entre 380 y 780 nm del espectro visible 8, 9. Este espectrofotómetro esta
compuesto por una fuente de luz proveniente de una lampara de tungsteno que permite el completo
espectro visible, un monocromador y un sistema de detección10.

Ilustración 2. Jarabe de sulfato ferroso

Para llevar a cabo el análisis, se empleó una técnica de colorimetría, que se basa en obtener una muestra
coloreada que absorbe la radiación en el espectro visible por parte del espectrofotómetro11. Para lograr
esto, se redujo el Fe3+ a Fe2+ por medio de un exceso de hidroxilamina, por el motivo de que el Fe3+ no
presenta absorción en la longitud de onda seleccionada. Seguido de esto, se reacciona el Fe 2+ con O-
fenantrolina para formar un complejo coloreado rojo-anaranjado absorbible en la longitud de onda
elegida, la cual es, por medio de un barrido espectral, de 510 nm. Es importante tener en cuenta que la
formación de este complejo se da a un pH bajo o ácido, por lo que se añade HCl para asegurarse que el
complejo se mantenga estable. Adicional a esto, se agrega una solución de acetato de sodio que juega
el papel de buffer, con el objetivo de mantener el equilibrio químico y neutralizar el ácido que se forma
en la reducción del hierro (ecuación química 1). Este proceso evita que se formen interferencias
químicas.

A pesar de lo anterior, antes de calcular la concentración de hierro en la muestra problema se prepararon

seis soluciones patrón con una concentración conocida de hierro. Con base a estas soluciones, se
construyó una curva de calibración tradicional (Gráfica 1) a partir de la cantidad de sal de Mohr añadida
a cada solución, la cual aumentaba según cada patrón. El espectrofotómetro utilizado permite relacionar
la intensidad del color en la muestra con la cantidad de analito en estas, por lo que a medida que se
añadía más solución a cada muestra, el color se tornaba mas intenso, dando resultado a mediciones más
altas de absorbancia, al haber mayor número de moléculas en solución, generando una mayor
interacción entre ellas y la luz del equipo. Para estas mediciones se empleó un “blanco” con el propósito
de corregir la absorbancia de cada solución patrón con hierro, es decir, la solución “blanco” resta la
absorbancia de los demás componentes en las soluciones para realizar únicamente la medición del
hierro.

Las mediciones realizadas se basan en la Ley de Bouguer-Lambert-Beer, donde se establece que la

absorbancia es directamente proporcional al camino óptico y la concentración de la muestra 6. Según
esto, se espera que la curva de calibración sea lineal, sin embargo, múltiples desviaciones pueden
presentarse por algún efecto matriz que influya en la respuesta del instrumento, errores durante el
experimento o un mal uso del propio equipo o las celdas. Algunos errores pudieron suceder en el
momento de la preparación de soluciones, pues una mala medición de las cantidades a utilizar podría
desviar los resultados, además de haber realizado un aforo no muy preciso con agua en los balones con
las soluciones, lo que afectaría su concentración. Otra causa de error se pudo presentar en la preparación
de las soluciones patrón y el blanco, pues se debía agregar en un orden especifico y con volúmenes
precisos las diferentes soluciones, lo cual pudo variar volumétricamente al usar varias pipetas al tiempo.
También pudo suceder que las celdas portamuestras tuvieran rayones en sus caras transparentes o
estuvieran sucias, lo que impediría el paso completo del haz de luz y afectaría las soluciones. Todos
estos errores son muy importantes, pues según la ecuación 6, se obtuvieron porcentajes de error del
55.5% y 57%, lo que da a entender que se cometieron varios errores durante el procedimiento y se
obtuvo aproximadamente la mitad de la cantidad de hierro y sulfato ferroso, respectivamente a los
porcentajes. Cabe resaltar que los cálculos y la gráfica se realizaron con los valores promedio de otros
dos grupos, al igual que los parámetros estadísticos.
Refiriéndonos ahora a la gráfica, el parámetro de linealidad obtenido se puede decir que es acorde a lo
esperado, a pesar del porcentaje de error, pues el coeficiente de correlación (R2) fue de 0.9996, lo que
indica que existe una relación lineal entre la absorbancia y la concentración de hierro en las soluciones.
Sin embargo, el porcentaje de coeficiente de variación dio valores bastante altos, tanto en las soluciones
patrón (Tabla 5) como en la muestra problema (Tabla 7), lo que indica que los datos de los tres grupos
están dispersos entre sí, lo cual se puede confirmar teniendo en cuenta la desviación estándar. Es
importante tener en cuenta que, en las soluciones patrón, los datos se dispersan mas entre si a medida
que la concentración de hierro en ellas aumenta, lo que significa que en las primeras soluciones hubo
menor diferencia que en las últimas.

Conclusión
• Por medio de la espectrofotometría se pudo calcular efectivamente la concentración de Fe(II)
presente en la muestra de Jarabe de Sulfato Ferroso.
• Basándose en la Ley de Bouguer-Lambert-Beer, podemos obtener valores de Fe(II) y sulfato
ferroso cercanos a la realidad, sin embargo, por errores cometidos durante el proceso
 experimental, la exactitud se vio afectada, provocando porcentajes altos de error de 55.5% y
57% respectivamente.
• La correlación entre los datos de los diferentes grupo estuvo ligeramente dispersa, indicando
una separación entre los datos.

Bibliografía
[1] ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA Y VISIBLE. (2016). Anexo.4 Espectrofotometría
UV V2. Recuperado de http://www.anmat.gob.ar/webanmat/mercosur/ACTA01-
14/AGREGADO_XVI/2-14/uni_XIV/Anexo_4__Espectrofotometria_UV_V2.pdf
[2] Cantú, E. (2019, 20 diciembre). ¿Qué es un espectrofotómetro? Franja Industrias. Etiquetas En
Rollo. Recuperado de https://www.etiquetasenrollo.mx/2019/12/que-es-un-espectofotometro/
[3] Gómez, Barrantes, M; Elementos de Estadística Descriptiva; 4 ed; Ed Imprenta San José; Costa
Rica; 2014; Pág. 630.
[4] Dossal, M; Introducción a la Metrología Química; Departamento de Química; Universidad
Autónoma de México; México; 2008; Pág. 2-5.
[5] Gómez, C. (2017, 23 agosto). ¿Cómo demostrar que la curva de calibración es lineal? Carlos Gómez.
https://www.analytical.cl/post/como-demuestro-que-mi-curva-de-calibracion-es-lineal/
[6] Rodríguez, L., & Nadeau, P. (2015). SUMMARY OF THE MAIN REMOTE SENSING
TECHNIQUES USED IN VOLCANOES FOR MONITORING GAS EMISSIONS ON SURFACE.
Revista Geológica de América Central.
[7] BeringOmega. Espectrofotómetro Visible GENESYS ™ 20. Recuperado de:
https://beringomega.org/es/producto/espectrofotometro-visible-genesys-20/
[8] Rouco, Vilma. (2010). Espectrofotometría. Introducción al análisis químico. Pág. 40. Recuperado
de:https://cdn.goconqr.com/uploads/media/pdf_media/21926583/91d657d1-1622-4756-8991-
dce851c2e991.pdf
[9] Universidad de la Rioja. (s. f.). Instrumentos para la medida práctica del color. Pág. 12
Recuperado de: https://www.unirioja.es/cu/fede/color_de_vino/capitulo05.pdf
[10] Thermo Spectronic. (2000). 20 Genesys™ spectrophotometer. Operator's Manual.
Recuperado de: https://www.cienytec.com/PDFS/Espec_Genesys20_OpMan.pdf
[11] Aparicio, E. (2017). Técnicas colorimétricas. Recuperado de:
http://revista.cleu.edu.mx/new/descargas/1703/articulos/Articulo08_Tecnicas_colorimetricas.pdf