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2.4 Respuesta txica

2.4.1 Caracterizacin de la respuesta txica

La caracterizacin de los efectos txicos o dainos es esencial en la evaluacin del peligro potencial
impuesto por una substancia qumica.

La toxicidad, o sea la capacidad de producir un dao, es una propiedad intrnseca de la substancia.

Ya se mencion anteriormente, que la respuesta txica es cualquier cambio que produce una lesin
celular permanente.

Otra forma de expresar lo anterior es la siguiente: la toxicidad es la interrupcin de la homeostasis

de una clula que lleva a una alteracin en estado morfolgico o muerte.

Una clula normal no est en reposo o inactiva. Est cambiando dinmicamente para responder a
estmulos o cambios en funcin.

Una clula mantiene su estructura y funcin dentro de un rango de condiciones fisiolgicas, el cual
define su homeostasis normal.

La clula puede responder a estmulos externos adaptndose y llegando a un nuevo estado

estacionario. Si el cambio que experimenta la clula est ms all de su capacidad de adaptacin se
le causa un dao. Esto no necesariamente lleva a la muerte celular ya que hay muchas etapas de
dao celular que son reversibles. La muerte puede sobrevenir si el estmulo es severo y persistente

2.4.1.1 Dao celular

Existen muchos blancos celulares para el dao, pero generalmente, estos mecanismos convergen y
producen una respuesta celular comn. La muerte celular seguir mecanismos similares
independientemente de que la causa del dao sea de naturaleza qumica, fsica o biolgica.

El conocimiento de las manifestaciones de dao y de los blancos celulares potenciales permite

estimar los efectos adversos potenciales, disear alternativas y sugerir acciones teraputicas y
antagnicas para bloquear o revertir los efectos dainos. En esta seccin se define lo que es dao
celular y se hace una revisin de los blancos celulares crticos.

Blancos celulares.- La clula tiene varios componentes que deben estar en buen estado para que la
clula funcione.

Los componentes de la clula que en forma selectiva se pueden convertir en blancos son la
membrana plasmtica, el citoesqueleto y los lisosomas. El dao al citoesqueleto a su vez, causar
dao a la membrana plasmtica. Los lisosomas contienen enzimas digestivas y su destruccin
causar que estas enzimas se liberen produciendo lesiones graves en el citoplasma.

La clula necesita tener los siguientes caminos metablicos en buen estado: la produccin de ATP
mitocondrial, el metabolismo de calcio, la sntesis de protenas, la regulacin del ADN, la gliclisis
y el ciclo del cido ctrico o ciclo de Krebs. Estos dos ltimos proporcionan los precursores para
sntesis de aminocidos y los equivalentes reducidos cuya oxidacin genera la mayora de los ATP.
Los daos a la membrana plasmtica, a la produccin de ATP mitocondrial y al control de los
niveles de calcio intracelular son rutas comunes para la destruccin final de la clula y merecen
discusin especial.

La membrana plasmtica es utilizada por la clula para mantener los gradientes inicos que a su vez
regulan el volumen celular. Si se daa la membrana entran iones sodio y calcio y salen iones
potasio. El agua y los cloruros se redistribuyen de acuerdo al gradiente electroqumico y hay
incremento neto intracelular del agua. El aumento de agua intracelular es visible al microscopio por
el aumento de tamao de la clula que se hincha. Si sto no se corrige la clula se puede romper.
Hay varios mecanismos que pueden inducir estos cambios, algunos ejemplos son el trauma fsico,
fluidizacin de la membrana, peroxidacin de lpidos (tetracloruro de carbono), dao al
citoesqueleto, bloqueo de canales y ataque viral. Independiente de la agresin txica, la membrana
plasmtica es uno de los componentes que primero responde al dao y la prdida de integridad es el
punto final del dao.

En la mayora de las clulas las mitocondrias son responsables de la sntesis de ATP va la

respiracin aerbica. El ATP es la fuente de energa ms importante de la clula, se utiliza en las
reacciones biosintticas, y es necesario para la activacin de compuestos endgenos por
fosforilacin o adenilacin, para incorporarse en cofactores, para la funcionabilidad del
citoesqueleto y para operar las bombas inicas de la membrana celular.

La produccin de ATP por las mitocondrias requiere de oxgeno para funcionar, as que una de las
rutas para daar el proceso es la hipoxia (baja concentracin de oxgeno). El principal agente que
priva a la clula de oxgeno es el monxido de carbono el cual se liga a la hemoglobina inhibiendo
la unin de sta con el oxgeno. La anemia (baja concentracin de hemoglobina en la sangre) y la
isquemia (bajo flujo arterial o del drenaje venoso), reducen la capacidad de transporte de oxgeno y
pueden contribuir a la deficiencia de este compuesto a nivel celular.

La produccin de ATP tambin se puede impedir por:

agentes que interrumpen la cadena de transportes de electrones a travs de inhibidores de

enzimas como la rotenona (inhibe la NADH-coenzima Q reductasa) y el cianuro (inhibe la
citocromo oxidasa)
por substancias que inhiben o desacoplan la fosforilacin oxidativa tales como el DDT
(inhibe la ATP sintetasa) y
el arsenato (substituye al fsforo y produce intermediarios de baja energa).

El incremento del nivel de calcio intracelular produce la disociacin de la actina de los

microfilamentos en el citoesqueleto y la activacin de fosfolipasas y proteasas. Estos cambios
producen fragmentacin del ADN, condensacin de la cromatina, ampollado y rompimiento de
membranas y degradacin de protenas.

El control de calcio se puede romper por el incremento del ingreso o por la salida de este in de sus
depsitos celulares. Los agentes que inducen la entrada de calcio son metilmercurio que produce
poros y, el tetracloruro de carbono que rompe la membrana. Los agentes que inhiben la exportacin
de calcio del citoplasma son inhibidores de la calcio-ATPasa en la membrana celular o en el retculo
endoplsmico. Algunos ejemplos de ellos son el bromobenceno, diamida, diquat y in vanadato.

Los radicales libres son especies qumicas altamente reactivas que tienen un electrn no pareado.
Hay tres mecanismos principales para producir radicales libres en un escenario biomolecular y son:
 toma de un electrn por un xenobitico (v.g. una reductasa cataliza la transferencia de un
electrn al paraquat),
prdida de un electrn (v.g. el fenol y la hidrazina pierden un electrn en la reaccin
catalizada por peroxidasas ) y
fisin homoltica de un enlace inducido por la transferencia de un electrn a la molcula.

La transferencia del electrn se lleva a cabo por el citocromo P-450 o por la cadena de transporte de
electrones de la mitocondria. A menudo estos radicales donan un electrn al oxgeno molecular
formando un superxido (O2-* ), como es en el caso de la activacin del tetracloruro de carbono para
dar lugar al radical libre Cl3C* el cual se combina con oxgeno para formar la especie activa
Cl3COO*.

La clula no est indefensa contra estas especies reactivas, tiene dos lneas principales de defensa
para protegerse.
La primera es la presencia de antioxidantes los cuales donan o aceptan un electrn para
formar intermediarios estables. Ejemplos de ellos son el alfa-tocoferol, ascorbato y GSH.
Probablemente de mayor importancia, particularmente en la destoxificacin de radicales
oxigenados y del perxido de hidrgeno, son los sistemas de enzimas protectoras. stas
incluyen la perxido dismutasa, la cual convierte el superxido en perxido de hidrgeno, la
GHS peroxidasa y la catalasa convierten al perxido de hidrgeno en agua.

Si el radical libre no es inactivado causar daos a la clula y puede hacerlo va la unin a un blanco
o capturando un hidrgeno del blanco.

Los radicales libres neutros, como el HO* y el Cl3C*, se pueden unir covalentemente a
biomolculas y alterar su funcin, o en el caso que se unan a ADN el resultado sea una mutacin.

Los radicales libres pueden capturar un hidrgeno de otras molculas, convirtindolos en radicales
libres. La abstraccin de hidrgeno del ADN produce rompimiento o ligaduras cruzadas de las
cadenas, la abstraccin por lpidos inicia la peroxidacin de estos compuestos.

El dao por radicales libres est implicado en las lesiones causadas por agentes qumicos, por
radiacin, inflamacin, envejecimiento y reperfusin/isquemia.

2.4.1.2 Muerte Celular

El punto al cual la clula no se puede recuperar de las lesiones es difcil de definir. Hay muchos
pasos que se consideran reversibles y muchos que son definitivamente irreversibles.

Los dos fenmenos que consistentemente estn asociados a lesiones irreversibles son la incapacidad
de revertir la disfuncin mitocondrial y las distorsiones profundas de la funciones de la membrana.

Caractersticas de las lesiones celulares reversibles

Prdida de ATP que disminuye la actividad ATP-asa en la membrana
Hinchazn clular aguda (prdida del control de volumen)
Aumento de la velocidad de la gliclisis para compensar la prdida de ATP
Desprendimiento de los ribosomas del retculo endoplsmico rugoso
Permeabilidad incrementada de la membrana y disminucin de la actividad mitocondrial
 que resulta en el ampollamiento de la superficie clular
Mitocondrias normales, ligeramente hinchados o condensados

Caractersticas d e las lesiones irreversibles

Vacuolizacin severa de las mitocondrias

Dao masivo de la membrana celular
Crecimiento de los lisozomas
Entrada de calcio y activacin de las proteasas y fosfatasas
Prdida continua de protenas coenzimas y ARN
Eosinofilia que produce rompimiento de lisozomas
Picnosis (condensacin nuclear con agregacin de cromatina)
Carilisis (destruccin de cromatina)
Carirrexis (fragmentacin nuclear)
Digestin enzimtica del citoplasma y nucleo, fuga de compuestos intracelulares y entrada
de macromolculas extracelulares

Existen dos mecanismos principales de muerte celular: la apoptosis y la necrosis.

Apoptosis.- En una definicin muy amplia, la apoptosis se puede considerar como una muerte
celular "programada". La apoptosis es un evento celular natural el cual tambin puede ser inducido
por condiciones patolgicas. Como ejemplo de funciones fisiolgicas normales de la apoptosis
podemos mencionar la regresin del tero despus del parto, la inmunoeliminacin de clulas y la
muerte de clulas nerviosas en el desarrollo si no se establecen contactos axonales. La apoptosis est
implicada en enfermedades y en lesiones inducidas qumicamente. Se presenta apoptosis
insuficiente en el desarrollo de linfoma folicular y se piensa que en el SIDA, la esclerosis lateral
amiotrfica y en las lesiones por isquemia/perfusin se presenta apoptosis excesiva. Como ejemplo
de drogas o substancias qumicas que inducen apoptosis se tiene los glucocorticoides (apoptosis de
clulas linfoides) y el TCDD (apoptosis de timocitos causando atrofia tmica). La apoptosis se
diferencia de la necrosis por sus caractersticas morfolgicas.

La apoptosis es un evento controlado. Las clulas se vuelven ms condensadas consistente con el

hecho de que el agua est siendo removida de la clula (no es un proceso pasivo). Durante todo el
proceso la membrana celular y los organelos permanecen intactos. El contenido celular nunca se
derrama hacia el rea que la rodea lo cual hace que no se produzca reaccin inflamatoria.

Tabla 2.4.1.A.- Diferencias Morfolgicas entre Necrosis y Apoptosis.

Necrosis Apoptosis
La clula completa Inflamacin Condensacin
Ncleo Picnosis Creciente
Carilisis
Cariorrexis
Organelos Degeneracin Intactos
Degeneracin
Ruptura Cuerpos appticos
celular
Inmunorespuesta Inflamacin aguda Ninguna

Necrosis.- En la necrosis el resultado final es la ruptura de la membrana celular y el derrame del

contenido celular en el espacio intersticial. Esto trae como consecuencia una respuesta inflamatoria
en el rea que puede ser detrimente para las clulas que la rodean.

2.4.1.2.1 Respuesta de los tejidos a la prdida de clulas

Si la lesin produce que se pierdan clulas por necrosis o apoptosis, el resultado final depende
principalmente del tipo de clulas que se han lesionado. Las clulas vecinas pueden ser capaces de
responder con regeneracin produciendo clulas iguales a las perdidas o bien slo las reemplazan
por tejido no funcional.

Las clulas lbiles se estn dividiendo continuamente y en su ciclo celular no existe el estado de
reposo. Ejemplo de ellas son las clulas epiteliales, gastrointestinales y hematopoyticas. Si se
pierden clulas se pueden remplazar por clulas del mismo tipo.

Las clulas estables estn prcticamente en reposo y tienen una velocidad de replicacin muy baja.
Su ciclo celular est normalmente en reposo pero se pueden estimular para que entren en
replicacin. Ejemplos de estas clulas son los hepatocitos y las clulas renales (tbulos). Si ocurre
algn dao, las clulascontiguas pueden regenerar la masa perdida, como sucede con los hepatocitos
despus de una ciruga en la que se remueve parte del hgado.

La clulas permanentes no se estn dividiendo y no pueden entrar en ciclo de replicacin. Ejemplo

de estas clulas son las neuronas del sistema nervioso central y los miocitos del corazn. Si estas
clulas se pierden la nica respuesta de remplazo es a travs de la respuesta fibrtica. Las clulas
son remplazadas por tejido conectivo y se forma una cicatriz. El remplazo fibrtico tambin se
puede dar en algunas ocasiones para clulas lbiles y estables

2.4.1.3 Genotoxicidad

Neoplasia significa literalmente "crecimiento nuevo". Los neoplasmas o tumores,

independientemente del origen celular, se deben a la falta de respuesta al control celular normal. Las
clulas neoplsicas se dice que estn transformadas y continan replicndose sin obedecer las
seales reguladoras que controlan el crecimiento celular normal. Las clulas neoplsicas
satisfacen sus necesidades metablicas compitiendo favorablemente con las clulas y tejidos
normales, por lo que un neoplasma crecer activamente independientemente del ambiente local que
lo rodee.

Un tumor se dice que es benigno cuando permanece localizado en su sitio de origen y no tiene
capacidad de infiltrarse invadiendo tejidos locales o formar metstasis en sitios distantes. La
mayora de los tumores benignos forman una cpsula fibrosa que lo separa del tejido husped
aunque esto no siempre sucede. A los tumores malignos se les llama cncer y es el trmino que se
usa para designar al tejido neoplsico capaz de invadir los tejidos vecinos. Metstasis es el
trmino usado para designar el desarrollo de implantes secundarios que son discontinuos con
el tumor de origen. Un tumor puede ser maligno sin que forme metstasis, aunque slo los tumores
malignos son capaces de formarlas.
La discusin detallada de la naturaleza del crecimiento canceroso y de su manejo no ser tratado en
este libro y se centrar en los cnceres ambientales y las implicaciones de las exposiciones qumicas
y otros factores ambientales.

Todos los das el cuerpo est rodeado de substancias qumicas potencialmente peligrosas y algunas
de ellas estn relacionadas con el desarrollo de cncer. Un individuo puede quedar expuesto a
cancergenos ambientales en su sitio de trabajo, debido a sus hbitos personales y por los alimentos
que ingiere. Algunos riesgos son ubicuos (incremento en el desarrollo de cncer de piel por
exposicin a la luz solar) y otros son especficos para un estilo de vida (incremento de distintos
cnceres asociados al uso del tabaco).

Carcinognesis molecular.- La explicacin, a nivel molecular, del desarrollo del cncer se basa en
los siguientes conceptos

1. El ADN es el verdadero blanco para los cancergenos

2. La carcinognesis es un proceso que sucede en mltiples etapas
3. Los genes reguladores que suprimen la inhibicin del crecimiento de tumores y los que
promueven el crecimiento (oncogenes) son los principales blancos cuyas lesiones producen
cncer. (13)

La teora de la mutacin somtica del cncer establece que los daos del genoma que producen
mutaciones son la base para el desarrollo del cncer. Se ha demostrado en el laboratorio que se
puede producir una masa tumoral como resultado de la expansin clonal de una sola clula
progenitora que ha sufrido un dao gentico. Esto lleva a la idea de que el ADN es el blanco para los
cancergenos y de que un solo impacto en el ADN, en el sitio adecuado y que no sea reparado
correctamente, puede tener consecuencias severas para la clula.

La evidencia experimental de que esto sea as es la siguiente:

muchos cancergenos o sus productos reaccionan qumicamente con el ADN

muchos cancergenos son mutgenos
individuos que tienen deficiencias en la reparacin del ADN son ms propensos al cncer
la mayora de los cnceres muestran anormalidades cromosomales
la mayora de los cnceres contienen oncogenes activados y/o genes supresores de tumores
inactivados.

La formacin de tumores requiere de algo ms que el solo hecho de que ocurra una mutacin. La
carcinognesis es un proceso que tiene lugar en varias fases: a) al primer paso se le llama iniciacin
del dao gentico, b)el siguiente paso es la promocin de la clula iniciada (reproduccin) y
finalmente c) es el paso de progresin hacia otras caractersticas fenotpicas.

Cuando se le infringe un cambio a la molcula de ADN, la clula reacciona tratando de eliminarlo

usando alguno de los mecanismos que tiene para reparar daos del ADN. Si no tiene xito y el dao
en el ADN permanece hasta que la clula se reproduce, se dice que el dao se fij (fenmeno
irreversible) y queda incorporado al genoma. As pues, es posible que una sola molcula del
cancergeno produzca la iniciacin de una clula, por lo tanto la iniciacin no tiene dosis lmite. Esto
se conoce como la "hiptesis del impacto nico" y es la base de muchas de las reglamentaciones que
existen hoy en da. Hay varios compuestos que funcionan como iniciadores, por ejemplo,
dimetilbenzantraceno, N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG), uretano, benzopireno, etc.

Los promotores son normalmente agentes que incrementan la proliferacin (mitgenos), dando la
oportunidad a que la clula iniciada se reproduzca. La promocin es un fenmeno reversible y
generalmente se necesitan exposiciones repetidas y una vez que se remueven los promotores se
pierde el estmulo. En el caso de la promocin aparentemente s hay una dosis lmite de exposicin.
No se ha demostrado que el promotor tenga que interaccionar directamente con el ADN para causar
su efecto. Como ejemplos de agentes promotores se tiene a los steres del forbol.

La progresin se caracteriza por una proliferacin de las clulas iniciadas acompaada de cambios
genmicos mayores tales como translocaciones y perdidas de material cromosomal. Los cambios
que suceden en esta etapa son irreversibles y las clulas tumorales se convierten en malignas.

Blancos crticos.- Los blancos en el ADN que producen carcinognesis son muy especficos. No
cualquier cambio producido en cualesquiera de las protenas que codifica el genoma va dar lugar a
los cambios tan profundos que experimenta una clula que se vuelve cancerosa. Este tipo de clula
es muy especializada, tiene que perder y ganar un nmero considerable de caractersticas para que
pueda tener la capacidad de reproducirse en la forma que lo hace.

Los oncogenes y los genes represores de tumores. La clula tiene dos grupos de genes que controlan
la reproduccin celular, los oncogenes que estimulan la proliferacin celular y los genes supresores
de tumores que inhiben la reproduccin celular. Los oncogenes son genes altamente conservados
que codifican varias protenas funcionales en el ciclo de la reproduccin celular. Si el cambio en el
ADN produce que se incremente el nmero de copias de alguno de estos genes o, que ste quede
permanentemente activado, la clula lo interpreta como una seal de crecimiento continuo. El
incremento en la reproduccin celular aumenta las posibilidades de que se presenten ms
mutaciones que pueden producir adems otros cambios en el fenotipo.

Los genes supresores de tumores se consideran como "antioncogenes" y sus productos son protenas
que actan como inhibidores del crecimiento. Si se inactiva cualquiera de ellas, no se presenta la
inhibicin del crecimiento y la clula puede reproducirse a mayor velocidad.

La mayora de las clulas tumorales tienen activados los oncogenes e inactivados los genes
supresores de tumores. Estos dos cambios le dan a la clula un gran potencial de proliferacin.

Telomerasas.- Los telmeros son cadenas largas de ADN de secuencias repetitivas que se
encuentran en las puntas de los cromosomas.

El cultivo de clulas primarias slo presenta unas cuantas rondas de replicacin y las que ms se
reproducen son las clulas lbiles (hematopoyticas, epidrmicas y gastrointestinales). La razn de
que se detenga la reproduccin celular es la prdida gradual, cada ciclo de reproduccin, de los
telmeros y cuando se terminan se detiene la replicacin, debido al dficit de material gentico.

Las telomerasas son enzimas que replican el ADN telomrico, permitidole a las clulas continuar
su reproduccin. Las telomerasas estn presente en las clulas lbiles y se han detectado en todas las
lneas de clulas tumorales y malignas en que se ha buscado.