IPN

Escuela Nacional de Ciencia Biolgicas

Departamento de Bioqumica
Laboratorio de Bioqumica y Biologa Molecular

Curva tipo de azucares reductores

Grupo: 3IM2 SECCIN: 4
Profesor: Sal Espinosa Gmez
Alumnos:
Canova Ortega Sharon Michel.
Ponce Fontela Sara
Ziga Jurez Adrin

reactivo/t 0* 1 2 3 4 5
ubo
Introduccin
El mtodo DNS (tcnica de miller) es una tcnica colorimtrica Glucosa, 0 0.1 0.2 0.4 0.8 1.0
que emplea cido 3,5 dinitrosaliclico para la hidrlisis de fructosa
polisacridos presentes en una muestra. Determina las 0.005 M
absorbancias por medio de un espectrofotmetro a 540nm. (mL)
Esta tcnica sirve para cuantificar los azucares reductores
producidos durante una fermentacin o para cuantificar los Sacarosa 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
productos de una reaccin enzimtica. La curva de calibracin 0.2 M
es la representacin grfica en un eje de coordenadas, de la (mL)
Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentracin
(eje de abscisas: X). Se ensayan varias soluciones de Regulado 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
concentracin conocida y se determinan sus absorbancias, r de
construyndose la curva de calibrado, que es una recta. La acetatos
concentracin de una solucin problema (desconocida), se 0.05M
averigua por interpolacin de la Abs de la solucin en la curva (mL)
de calibracin, o a travs de la ecuacin de la recta (y = mx
+b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x concentracin + Agua 1.0 0.9 0.8 0.6 0.2 0
absorbancia del blanco. (mL)
El DNS reacciona nicamente con los azcares reductores. La
sacarosa es un disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis 3,5-DNS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
en medio cido se liberan glucosa y fructosa que s son
Absorban 0 0.074 0.219 0.433 0.778 1.018
reductores y reaccionan con el DNS generando un producto
cia
coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por
mtodos espectrofotomtricos es proporcional a la
Azcar 0 1 2 4 8 10
concentracin de sacarosa.
reductor
Esta tcnica es aplicable a todos los procedimientos de
(moles)
sistemas de cultivos de medios lquidos y slidos cuya
molcula de sustrato sean azcares reductores como glucosa,
xilosa, entre otros. Tabla 1 DATOS PARA CURVA TIPO DE ZUCARES REDUCTORES

Objetivos Micromoles Absorbancia

Construir una curva tipo de azcares reductores. de azcar nm
reductor
Interpretar una curva tipo de azcares reductores
0 0
Analizar el funcionamiento de una curva tipo.
1 0.0862
Resultados 2 0.181
4 0.359
En la prctica se obtuvieron los siguientes resultados, al
realizar las serie de tubos, y medir su absorbancia en el 8 0.775
espectrofotmetro. 10 0.908
Tabla 2 RESULTADOS POR SECCION
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*el tubo 0 corresponde al tubo blanco, o tubo de referencia con
el que se calibrara el espectrofotmetro.
Clculos
Si hay 0.01 mol por cada 1000 mL de solucin de azcar
reductor, entonces por cada 0.1 mL de solucin de azcar
reductor hay 1x10-6 moles de azcar reductor, entonces:
observar que el dato de R2 que nos sirve para saber que tanto
se acerca a la lnea de tendencia, podemos de decir que la
grfica de grupo que tiene como R2 =0.9977 es ms cercana a
la lnea de tendencia y por lo tanto es un poco ms til para ser
una referencia al interpolar que nuestra grafica donde se tiene
una R2 = 0.9966.
Conclusiones

Tubo moles de azcar reductor Por medio de una serie de ensayos con cantidades conocidas
1 1 para llevar a cabo la reaccin de identificacin de la formacin
2 2 de azucares reductores, sirven para construir una curva tipo.
3 4
4 8
5 10
Tabla 3 MICROMOLES DE AZUCAR REDUCTOR EN CADA TUBO

Velocidad inicial de la reaccin=

Tubo 1=

= 0.1
Bibliografa

J. Weininger, S., & R. Stermitz, F. (1998). Azucares,

Tubo 2= = 0.2 nuecleosidos y acidos nucleicos . En S. J.

Weininger, & F. R. Stermitz, Qumica orgnica

Tubo 3= = 0.4 (pg. 824). Espaa : REVERTE.

Tubo 4= = 0.8

Mc Murry, J. (2008). Biomolculas: carbohidratos. En J.
Mc Murry, Qumica Orgnica (7a ed., pgs. 992-

Tubo 5= = 1.0 993). Mxico: Cengage Learning.

Discusin de resultados
https://www.clubensayos.com/Ciencia/Azucares-
Al calcular la actividad de la enzima en unidades de invertasa, Reductores/556322.html (03-10-2015)
se puede observar que se requiere menos cantidad de la
enzima para hidrolizar un mol del azcar reductor en un minuto http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
en el tubo uno (0.1 U.I) y esa cantidad va aumentando al
mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf
aumentar los moles de sacarosa hasta el tubo 5 (1 U.I).

En base a los datos obtenidos de absorbancia y moles de

azcar reductor se construy una grfica, la cual ser de ayuda,
para interpolar los datos relacionados con esta, y as poder
interpretarlos.

La grafica obtenida en nuestro equipo, por los resultado de

absorbancia obtenida para cada ensayo y los moles de azcar
reductor, no muestra una tendencia completamente lineal, por
factores como no haber adicionado en cada tubo la cantidad
adecuada para cada tubo, o porque algo en los reactivos fuese
contraproducente para los ensayos, sin embargo es una grfica
que ser de ayuda para las posteriores prcticas.

Al hacer la comparacin de la grfica que se obtuvo en nuestro

equipo y la grfica que se obtuvo por toda la seccin se puede
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Pregunta extra:

Reaccin enzimtica

Reaccin qumica

Absorvancia vs micromoles de azucar reductor seccion III

1

y = 0.0933x - 0.0039
0.8 R = 0.9977

0.6
Absorbancia nm

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12

-0.2
micromoles de azucar reductor
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Grafica absorvancia vs moles de azcar reductor del equipo

1.2

y = 0.1007x + 0.0008
1 R = 0.9966

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12
moles de azcar reductor