Centro de Ciencias Básicas.

Departamento de Química.
Academia de Química.
Lic. Químico Fármaco Biólogo.

Reporte 8
“Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida.”

Materia: Bioquímica II
Profesora: María Cristina Serna Gutiérrez.
Alumnas

Flores Ibarra Joselyn Georgina.

Fecha: 04/Mayo/2018
RESULTADOS

Ilustración 1 Gel de poliacrilamida de cereales, de izquierda a derecha, Nesquick, Avena, Cereal, Arroz, Maíz,
Frijol de soya, All-Bran, Quínoa.

Fragmento D D Rf Peso molecular Logaritmo del Peso Molecular

de (mm) (mm) según el patrón peso molecular determinado.
proteína según el patrón
1 7 120 0.058 250 2.3979 299.75
2 15 120 0.125 200 2.3010 211.56
3 38 120 0.316 150 2.1760 164.25
4 62 120 0.517 100 2 100.32
Tabla 1 Proteínas encontradas en el cereal nesquik.

Rf vs PM
350

300

250
Peso molecular

200

150

100

50

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Rf
 CURVA PATRÓN
y = -0.8269x + 2.4288
2.45 R² = 0.9891
2.4
2.35
2.3
2.25
Log PM

2.2
2.15
2.1
2.05
2
1.95
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Rf

ANEXOS
Ecuación para calcular el peso molecular de muestra desconocida: Log PM= mRf + b
Ecuación de la recta de la curva patrón: y=-0.8269x + 2.4288
Donde: Y= Log PM x= Rf
Sustituyendo Rf en …
 Fragmento 1: Log PM= (-0.8269)(0.058) + 2.4288 = 2.4768
Despejando obtenemos: PM= Antilog10 (2.4768)= 299.75 g/mol
 Fragmento 2: Log PM= (-0.8269)(0.125) + 2.4288 = 2.325
Despejando obtenemos: PM= Antilog10 (2.325)= 211.56 g/mol
 Fragmento 3: Log PM= (-0.8269)(0.316) + 2.4288 = 2.2155
Despejando obtenemos: PM= Antilog10 (2.2155)= 164.25 g/mol
 Fragmento 4: Log PM= (-0.8269)(0.517) + 2.4288 = 2.0014
Despejando obtenemos: PM= Antilog10 (2.0014)= 100.32 g/mol

DISCUSIÓN
Las moléculas biológicas (ADN, proteínas, vitaminas, etc.) poseen cargas eléctricas, y por
tanto poseen esta propiedad de movilidad en un campo eléctrico. La movilidad dependerá
de la carga que presentan al pH que trabajemos. La electroforesis en gel es el método más
conveniente para realizar separaciones de macromoléculas (ADN y Proteínas).
Los soportes pueden ser más o menos restrictivos según que el tamaño de poros limite o
impida el paso de las moléculas. Los más restrictivos, como los geles de acrilamida-
bisacrilamida, oponen impedimento al paso de las moléculas, participando así en el proceso
de separación. El gel en la electroforesis retarda, en mayor o menor medida, a las moléculas
mayores respecto a las de menor tamaño. Las separaciones moleculares están pues
basadas en el tamizado molecular junto a la movilidad electroforética de las moléculas que
van a ser separadas.
El polímero utilizado para la formación del gel es la acrilamida y la bis-acrilamida, los cuales
se polimerizan mediante la adición de catalizadores (persulfato amónico, TEMED).
En general se emplean sistemas de dos tampones (discontinuos). Este sistema permite la
separación de volúmenes relativamente grandes de muestra sin pérdida de resolución. La
concentración se produce por isotacoforesis de la muestra en el primer gel ('stacking'). El
efecto de estrechamiento de las bandas se basa en el hecho de que los iones glicinato,
relativamente cargados negativamente (en el depósito de tampón superior) tienen una
movilidad electroforética inferior que los complejos de proteínas-SDS que a su vez tienen
menor movilidad que los iones Cl - de los tampones de carga en el gel de apilamiento
('stacking'). Cuando se conecta la diferencia de potencial todas las especies han de migrar
a la misma velocidad para mantener el circuito eléctrico. Los iones glicinato sólo se pueden
desplazar a la misma velocidad que los iones Cl - si hay una región de 'field strenght'. 'Field
strenght' es inversamente proporcional a la conductividad que es a su vez proporcional a la
concentración, El resultado es que las tres especies de interés ajustan sus concentraciones
de forma que [Cl - ] > [proteína-SDS] > [glicinato]. Como sólo hay una pequeña
concentración de proteína-SDS las tres se concentran en una banda muy delgada entre las
fronteras de migración del Cl- y del glicinato. Cuando el glicinato alcanza el borde del gel
de separación adquiere una mayor carga en el nuevo medio, con un pH superior, e
incrementa su movilidad. A partir de ese momento la interfase entre el glicinato y el Cl- deja
atrás a los complejos de proteína-SDS que se desplazarán a su propia velocidad.(
GREASER, 2011)
Cuando se conecta la diferencia de potencial todas las especies han de migrar a la misma
velocidad para mantener el circuito eléctrico. Los iones glicinato sólo se pueden desplazar
a la misma velocidad que los iones Cl - si hay una región de 'field strenght'. 'Field strenght'
es inversamente proporcional a la conductividad que es a su vez proporcional a la
concentración, El resultado es que las tres especies de interés ajustan sus concentraciones
de forma que [Cl - ] > [proteína-SDS] > [glicinato]. Como sólo hay una pequeña
concentración de proteína-SDS las tres se concentran en una banda muy delgada entre las
fronteras de migración del Cl- y del glicinato. Cuando el glicinato alcanza el borde del gel
de separación adquiere una mayor carga en el nuevo medio, con un pH superior, e
incrementa su movilidad. A partir de ese momento la interfase entre el glicinato y el Cl- deja
atrás a los complejos de proteína-SDS que se desplazarán a su propia velocidad. (ARNDT,
2012)
CONCLUSIÓN
La electroforesis en gel de poliacrilamida‐SDS es una técnica sencilla, rápida y reproducible
para la separación e identificación de proteínas. El análisis de proteínas con esta técnica
permite detectar el efecto del proceso sobre los alimentos para la mejora de la calidad de
los mismos.
BIBLIOGRAFÍAS
GREASER, M.L., C.M. WARREN. 2011. Protein electrophoresis in agarose gels for
separating high molecular weight proteins. B.T. Kurien & R.H. Scofield (editores). New York:
Humana Press.
ARNDT, C., S. KORITSKA, H. BARTSCH, M. BACHMANN. 2012. Native polyacrilamide
gels. Methods in Molecular Biology 869: 49‐53.