Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Ingeniería en Sistemas Ambientales

Materia: “Bioquímica”

Practica 2: “Curva tipo de azúcares reductores”

Grupo: 4AM1 Equipo: 11

Integrantes:

Ramírez Castro Aranza.

Rodríguez Vázquez Yacxeni Semirami
Sotelo Roldan Jimena

Profesores:

Claudia Albany Resendiz Mora

Karina Patricia Hernández Guzmán

Fecha de entrega: 16 de Octubre de 2023

Introducción.
Los azúcares se definen como carbohidratos que son polihidroxialdehidos o
polihidroxicetonas o compuestos que por hidrólisis los generan.
En la naturaleza, existen distintos tipos de azúcares según su estructura química.
que son capaces de oxidarse en presencia de agentes oxidantes en soluciones
alcalinas. Debido a esta característica, este grupo se denomina azúcares reductores
(AR), que son los monosacáridos y algunos disacáridos, como la maltosa (formada
por glucosa) y la lactosa (formada por galactosa y glucosa). Por otro lado, algunos
azúcares no tienen esta característica sin haber pasado previamente por un proceso
de hidrólisis, llamándose azúcares no reductores (ANR); cuando sufren hidrólisis por
ácidos o por acción de la enzima invertasa, liberan glucosa y fructosa y se
denominan azúcares invertidos, que tienen mayor poder endulzante y no forman
cristales. (Instituto Adolfo Lutz, 2018).
Una forma de determinar la concentración de azúcares reductores en una muestra
es por el método de DNS.
El método DNS determina la presencia de grupos carbónicos libres (C=O) de los
azúcares reductores. El procedimiento se basa en una reacción redox, que ocurre
en la utilización de ácido 3,5 dinitrosalicílico para provocar la oxidación de los
azúcares y al mismo tiempo su propia reducción endotérmica. Un mol de azúcar
reacciona con un mol de ácido 3,5 dinitrosalicílico, dando lugar a una reacción
estequiométrica que permite conocer la cantidad de azúcares reductores presentes
en la muestra.
Después de esto se continúa con la determinación, haciendo lecturas de
absorbancia en el espectrofotómetro a 540 nm. La reacción es colorimétrica, el
ácido 3.5 dinitrosalicílico es de color amarillo, mientras que la aparición de ácido
3-amino, 5-nitrosalicílico provoca un viraje a pardo oscuro, cuya intensidad será
proporcional a la cantidad de azucares reductores. Por esta razón, el método no es
recomendable para muestras coloreadas, ya que pueden afectar en la lectura que
se realice en el espectrofotómetro. (Miller, 1959)

La fructosa es un azúcar simple de seis carbonos con un grupo cetona en el

segundo carbono; la glucosa es un azúcar simple de seis carbonos pero con un
grupo aldehído en el primer carbono. La sacarosa es un disacárido, es decir, está
formado por los dos monosacáridos glucosa y fructosa. (Fernandes, 2021

Objetivos.
● Obtener una curva de calibración de azúcar reductor, mediante la cual se
puedan transformar las lecturas de absorbancia obtenidas en los
experimentos de cinética enzimática, en micromoles de azúcar reductor.
Diagrama de flujo.

Resultados.
Una vez los tubos con muestras hayan sido llevados a baño maría y previamente
llevados a enfriamiento, están listos para tomar una prueba de ellos en los tubos y
llevarlos al espectrofotómetro para determinar su absorbancia, la cual se puede
visualizar en la tabla 1.
Tabla 1. Absorbancia a 540nm
Tubos

1 2 3 4 5

Absorbancia 0.099 0.227 0.448 1.122 1.428

λ=540 nm

(μmoles) 1 2 4 8 10
Azúcar reductor / 2
mL
Figura 1. Curva tipo Azúcar reductor

Cálculos.
Tubo 1
1. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑓𝑟𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐴𝑅
0. 005𝑚𝑜𝑙 + 0. 005𝑚𝑜𝑙 = 0. 01𝑚𝑜𝑙
2. 0. 01 𝑚𝑜𝑙 − 1000𝑚𝐿
𝑥 − 0. 1𝑚𝐿 𝑥 = 1𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙
3. 1 𝑚𝑜𝑙 − 1000000 µ𝑚𝑜𝑙
1𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙 − 𝑥.
𝑥 = 1µ𝑚𝑜l.

Tubo 2
1. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑓𝑟𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐴𝑅
0. 005𝑚𝑜𝑙 + 0. 005𝑚𝑜𝑙 = 0. 01𝑚𝑜𝑙
2. 0. 01 𝑚𝑜𝑙 − 1000𝑚𝐿
𝑥 − 0. 2𝑚𝐿
𝑥 = 2𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙

3. 1 𝑚𝑜𝑙 − 1000000 µ𝑚𝑜𝑙

2𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙 − 𝑥
𝑥 = 2µ𝑚𝑜l

Tubo 3
1. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑓𝑟𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐴𝑅
0. 005𝑚𝑜𝑙 + 0. 005𝑚𝑜𝑙 = 0. 01𝑚𝑜𝑙
2. 0. 01 𝑚𝑜𝑙 − 1000𝑚𝐿
𝑥 − 0. 4𝑚𝐿
𝑥 = 4𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙
 3. 1 𝑚𝑜𝑙 − 1000000 µ𝑚𝑜𝑙
4𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙 − 𝑥
𝑥 = 4µ𝑚𝑜l

Tubo 4
1. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑓𝑟𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐴𝑅
0. 005𝑚𝑜𝑙 + 0. 005𝑚𝑜𝑙 = 0. 01𝑚𝑜𝑙
2. 0. 01 𝑚𝑜𝑙 − 1000𝑚𝐿 𝑥 − 0. 8𝑚𝐿
𝑥 = 8𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙
3. 1 𝑚𝑜𝑙 − 1000000 µ𝑚𝑜𝑙
8𝑥10−6 𝑚𝑜𝑙 − 𝑥
𝑥 = 8µ𝑚𝑜l

Tubo 5
1. 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 + 𝑓𝑟𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐴𝑅
0. 005𝑚𝑜𝑙 + 0. 005𝑚𝑜𝑙 = 0. 01𝑚𝑜𝑙
2. 0. 01 𝑚𝑜𝑙 − 1000𝑚𝐿 𝑥 − 1𝑚𝐿
𝑥 = 1𝑥10−5 𝑚𝑜𝑙
3. 1 𝑚𝑜𝑙 − 1000000 µ𝑚𝑜𝑙
1𝑥10−5 𝑚𝑜𝑙 − 𝑥
𝑥 = 10 µ𝑚𝑜l

REACCIÓN QUÍMICA

Figura 2. Reacción de azúcares reductores. La reducción del 3,5 DNS con la

D-glucosa forman al D-gluconato y sales de salicilato que son de color rojo y tienen
un máximo de absorción a una longitud de onda de 540 nm.
Evidencias.

img 1. Celdas del espectrofotómetro img 2. tubos con muestra

img 3. espectrofotómetro img 4. grafica absorbancia vs azucar reductor

Discusión.
La curva de azúcares reductores nos sirve para poder cuantificar la concentración
de azúcares reductores en una muestra, el agente reductor empleado en la práctica
es DNS (ácido 3,5-dinitrosalicílico), entonces estos reactivos pueden reaccionar con
los azúcares reductores para formar un producto colorido como se puede observar
en el apartado de evidencias, donde podemos ver los reactivos con una tonalidad
diferente; estos tienen una absorbancia la cual se puede medir
espectrofotométricamente.
En base a los resultados obtenidos, podemos observar en la figura 1 una curva tipo
de azúcares reductores, en la cual podemos observar una relación entre la
absorbancia con la concentración de azúcares reductores; se pueden ver distintos
puntos:

● La relación entre la absorbancia y la concentración de azúcares reductores

parece seguir una tendencia lineal, lo cual es común en este tipo de curvas.
 ● La alta absorbancia para la concentración más baja indica una buena
sensibilidad del método para detectar concentraciones bajas de azúcares
reductores.
● Es posible que a concentraciones más altas, la curva de calibración tienda a
saturarse, lo que significa que la absorbancia no aumenta proporcionalmente
con la concentración. Esto podría deberse a limitaciones en la cinética de la
reacción o a la capacidad del reactivo para reaccionar con grandes
cantidades de azúcares.

También observamos un cambio de color en cada tubo de ensayo como se habia

mencionado, esto se puede deber a que cuando se lleva a ebullición una mezcla
que contiene azúcares reductores ocurre una reducción. Este proceso de reducción
genera un cambio en el estado de oxidación y conduce a la formación de un
precipitado coloreado. Entonces cuando se calienta la mezcla, los azúcares
reductores reaccionan con los iones metálicos presentes en el reactivo,
reduciéndose y formando un precipitado de un óxido metálico coloreado.

Este cambio de color es una señal visual de que ha tenido lugar la reacción química
y, por lo tanto, indica la presencia de azúcares reductores en la muestra. La
intensidad del color o la cantidad de precipitado formado suele estar directamente
relacionada con la concentración de azúcares reductores en la muestra, lo que
permite una estimación cualitativa o cuantitativa de la cantidad de azúcares
presentes.

Conclusiones.

La cantidad de absorbancia está directamente relacionada con la cantidad de

azúcar reductor presente. La creación de una curva de calibración se fundamenta
en la existencia de una relación esencialmente lineal entre una característica
mensurable (la absorbancia) y la variable que se desea determinar (la
concentración).
Al modificar ciertos factores durante la ejecución de esta práctica, establecimos un
estándar que nos permite comparar cómo la enzima afecta al analito. La curva
obtenida sirve como punto de referencia para evaluar el comportamiento de una
muestra desconocida mediante el uso de interpolación.

Cuestionario.
1. Defina azúcar reductor, ¿quiénes son los azúcares reductores de nuestra
práctica? El azúcar, un carbohidrato cristalino, comestible y soluble en agua, es esencial
para la producción de energía en todos los seres vivos. Aunque se asocia más comúnmente
con la sacarosa que se encuentra en los alimentos de sabor dulce, el azúcar también se
encuentra en la mayoría de las frutas (fructosa) y en casi todos los aperitivos, alimentos
procesados o bebidas con sabor como jarabe de maíz de alta fructosa. A nivel químico, un
azúcar se considera "reductora" si reduce un agente oxidante dentro de una reacción
química, mientras que las que no reducen la oxidación se llaman "no reductoras".
2. Escriba con fórmulas los azúcares reductores utilizados en esta práctica

3. Escriba la reacción química con fórmulas, que se lleva a cabo entre los
azúcares reductores y el 3,5-dinitrosalicilato, no olvide las condiciones que
requieren.

Referencias.
● Carrillo, U. (México,2016) Curva tipo y DNS. Instituto Politécnico Nacional.
Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería. Campus Guanajuato.
Tomado de: https://sites.google.com/site/enzineticupiig/bradford-y-dns
● Mc Murry, J. (2008). Biomoléculas carbohidratos. En J. Mc Murry, Química
orgánica (7a ed., págs. 992 - 996). México Cengage Learning.
● McKee T., McKee J. R., “Bioquímica” Ed. McGraw- Hill; Interamericana,
3ª. Edición. pp. 200- 233, (2003).
● Nelson D.L., Cox M.M., “Lehninger Principios de Bioquímica” Editorial
OMEGA, 3ª. Edición, pp. 293- 314, (2001).
● Miller G., 1959. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of
Reducing Sugar. 31 (págs. 426-428) Anal. Chem.
● Ramírez, F.; Cuervo, F. ; Meráz, M. & otros. Manual de Prácticas de
Laboratorio. Ingeniería Bioquímica. Universidad Autónoma Metropolitana.
Unidad Iztapalapa Tomado de :
http://publicacionescbs.izt.uam.mx/DOCS/MIBQ.pd